معلومة

11.2: جزيئات الحمض النووي لها خرائط تقييد فريدة - علم الأحياء


يحدد تسلسل جزيء DNA توزيع مواقع التعرف على الكائنات الحية. من أحجام شظايا التقييد التي يتم حلها على الهلام ، يمكن للباحثين تحديد جزيء الحمض النووي الأصلي المستخدم في هضم التقييد.

مطلوب التخطيط الدقيق لخرائط القيود ذات المعنى. تتمثل الخطوة الأولى في تجربة رسم الخرائط في تحديد أحجام شظايا التقييد التي سيتم إنشاؤها من جزيء DNA مستهدف ذي مصادر طاقة مختلفة. تقوم مجموعة متنوعة من البرامج بإنشاء خرائط التقييد هذه وتوفر بيانات مجدولة مع تفاصيل حول أطوال ومواضع أجزاء التقييد في تسلسل الحمض النووي. قائمة الإنزيمات التي تقطع تسلسلاً معينًا مثيرة للإعجاب دائمًا ،
لكن القليل من الإنزيمات عادة ما تكون عملية لغرض التجربة. عند اختيار مصادر الطاقة لخريطة التقييد ، هناك العديد من الأشياء التي يجب وضعها في الاعتبار:

  • كم عدد أجزاء التقييد التي سيتم إنشاؤها؟
  • ما هي الأحجام المتوقعة لأجزاء التقييد؟
  • هل سيتم حل جميع شظايا التقييد بوضوح على المواد الهلامية التي تحتوي على 1٪ من مادة الاغاروز؟
  • هل تولد الطاقة المتجددة مجموعة مميزة من الأجزاء من كل عينة من عينات الحمض النووي؟
  • ما هي تكلفة الطاقة المتجددة؟

في هذا المعمل ، ستستخدم برنامج NEB Cutter لتحديد مواقع الطاقة المتجددة في تسلسل البلازميد. (يتم توفير NEB Cutter بواسطة New England Biolabs ، وهو مورد تجاري للطاقة المتجددة.)
سوف تتذكر أن البلازميدات عبارة عن دوائر فائقة الالتفاف. الهضم مع RE يفتح البلازميد ويريح بنيته. (بدون هضم الطاقة المتجددة ، لا يمكن الاعتماد على الأحجام الظاهرة للبلازميدات الموجودة في المواد الهلامية للأغاروز.) والبلازميدات التي نستخدمها في تجاربنا هي بلازميدات معقدة تعتمد على pYES2.1 (5886 نقطة أساس). ابحث في النتائج عن مصادر الطاقة المتجددة التي ستولد أجزاء تقييد يمكن تمييزها بوضوح من البلازميدات. يوصى بشدة أن تختار نفس RE لجميع الملخصات الثلاثة! نظرًا لأن البلازميدات تعتمد على pYES2.1 ، فلن يكون من المستغرب ملاحظة بعض أجزاء التقييد الشائعة في تلك الهضم.

التعامل مع نوكليازات تقييدية في المختبر

إن البروتينات المتفاعلة التي نستخدمها في المختبر عبارة عن بروتينات عالية النقاء (ومكلفة!) تم تنقيتها من البكتيريا المؤتلفة. مثل جميع الإنزيمات ، يعمل كل RE على النحو الأمثل في ظل مجموعة محددة من ظروف التفاعل ، بما في ذلك درجة الحرارة ، ودرجة الحموضة ، وتركيزات أيونات المعادن والأملاح. طورت الشركة المُصنِّعة للطاقة المتجددة لدينا مخازن مؤقتة تدعم مستويات عالية من النشاط لأكثر من 200 من مصادر الطاقة المتجددة. يحتوي كل مخزن مؤقت على 0.1 مجم / مل من ألبومين مصل البقر (BSA) ، وهو بروتين وفير من مصل البقر ، مما يساعد على استقرار العناصر الأرضية المعرضة للتمسخ ومنع الامتصاص غير المحدد للـ REs لاختبار الأنابيب والنصائح.

مثل جميع الإنزيمات ، تخضع العناصر المتفاعلة للتمسخ التلقائي ، لذلك يجب التعامل مع العناصر الكاذبة بعناية. (بالمقارنة ، الحمض النووي هو جزيء مستقر بشكل استثنائي.) يزداد معدل تماثل البروتين مع درجة الحرارة وفي واجهات الهواء / الماء. بعض الاحتياطات البسيطة ستقلل من تمسخ الطبيعة. اتبع هذه القواعد البسيطة عند إعداد ملخصات التقييد:

  • استخدم المخزن المؤقت الموصى به لطاقة معينة.
  • احتفظ بردود الفعل على الجليد حتى تبدأ الحضانة.
  • احرص على عدم إدخال فقاعات. لا تستخدم خلاط الدوامة.
  • أضف RE أخيرًا ، بعد أن يتم تجميع المكونات الأخرى لخليط التفاعل.

التوصيف الجزيئي

مقدمة

يوفر تحليل نوكلياز التقييد (REA) لجينوم الميكوبلازما وسيلة ملائمة وفعالة من حيث التكلفة لتحديد اختلافات تسلسل الحمض النووي بين سلالات الأنواع المولَّدة. تتضمن الطريقة مقارنة عدد وحجم الشظايا الناتجة عن هضم الحمض النووي الصبغي مع نوكلياز داخلي مقيد يقطع الحمض النووي في موضع ثابت داخل موقع تمييز محدد ، ويتألف عادة من 4 إلى 6 نقاط أساس. نظرًا للخصوصية العالية للنوكليازات المقيدة ، فإن الهضم الكامل للحمض النووي الجيني المحدد مع نوكلياز داخلي محدد يوفر مجموعة قابلة للتكاثر من الشظايا. يوفر فصل الشظايا بواسطة الرحلان الكهربي لهلام الاغاروز والتلطيخ ببروميد الإيثيديوم نمط تقييد يمكن مقارنته بنمط السلالات ذات الصلة. تسمى الاختلافات في مجموعة الشظايا الناتجة عن نوكلياز داخلي محدد بتعدد أشكال طول جزء التقييد (RFLPs). يمكن أن تنتج RFLPs من إعادة ترتيب التسلسل ، أو إدخال أو حذف مقاطع DNA ، أو بدائل القاعدة داخل مواقع انشقاق نوكلياز التقييد.

أصبح تحليل نوكلياز التقييد أداة تصنيفية أكثر فائدة ، مما يسهل تحديد وتصنيف عزلات الميكوبلازم بالإضافة إلى توفير وسائل لتقييم درجة عدم التجانس الوراثي للسلالات داخل الأنواع المستقرة (رازين ، 1989 ، 1991 ، 1992). بالإضافة إلى ذلك ، يوفر REA معلومات قيمة عن نوع وعدد متواليات النوكليوتيدات المحددة في الجينوم ، والتي تعمل كأساس لبناء الخرائط الجينومية الفيزيائية (الفصل B4 ، هذا المجلد). الميزة العظيمة للكروموسومات REA هي أنها قابلة للتطبيق عالميًا وحساسة لأن الجينوم بأكمله يتم تقييمه من أجل RFLP ، بالإضافة إلى أن الاختبار سهل نسبيًا. علاوة على ذلك ، على عكس SDS-PAGE لبروتينات الخلايا الميكوبلازمية ، فإن REA ليست عرضة للتلوث بملوثات وسط المزرعة وتتطلب القليل جدًا من الحمض النووي غير المسمى (3 إلى 5 ميكروغرام) لكل اختبار.


11.2: جزيئات الحمض النووي لها خرائط تقييد فريدة - علم الأحياء

يتم توفير جميع المقالات المنشورة بواسطة MDPI على الفور في جميع أنحاء العالم بموجب ترخيص وصول مفتوح. لا يلزم الحصول على إذن خاص لإعادة استخدام كل أو جزء من المقالة المنشورة بواسطة MDPI ، بما في ذلك الأشكال والجداول. بالنسبة للمقالات المنشورة بموجب ترخيص Creative Common CC BY ذي الوصول المفتوح ، يمكن إعادة استخدام أي جزء من المقالة دون إذن بشرط الاستشهاد بالمقال الأصلي بوضوح.

تمثل الأوراق الرئيسية أكثر الأبحاث تقدمًا مع إمكانات كبيرة للتأثير الكبير في هذا المجال. يتم تقديم الأوراق الرئيسية بناءً على دعوة فردية أو توصية من قبل المحررين العلميين وتخضع لمراجعة الأقران قبل النشر.

يمكن أن تكون ورقة الميزات إما مقالة بحثية أصلية ، أو دراسة بحثية جديدة جوهرية غالبًا ما تتضمن العديد من التقنيات أو المناهج ، أو ورقة مراجعة شاملة مع تحديثات موجزة ودقيقة عن آخر التقدم في المجال الذي يراجع بشكل منهجي التطورات الأكثر إثارة في العلم. المؤلفات. يوفر هذا النوع من الأوراق نظرة عامة على الاتجاهات المستقبلية للبحث أو التطبيقات الممكنة.

تستند مقالات اختيار المحرر على توصيات المحررين العلميين لمجلات MDPI من جميع أنحاء العالم. يختار المحررون عددًا صغيرًا من المقالات المنشورة مؤخرًا في المجلة ويعتقدون أنها ستكون مثيرة للاهتمام بشكل خاص للمؤلفين أو مهمة في هذا المجال. الهدف هو تقديم لمحة سريعة عن بعض الأعمال الأكثر إثارة المنشورة في مجالات البحث المختلفة بالمجلة.


نتائج

قارنا مستويات التعبير الجيني للحمض النووي للمراسل الذي يشفر جين لوسيفيراز اليراع (لوس-gene) بأطوال مختلفة تبلغ 1717 نقطة أساس و 4331 نقطة أساس و 25690 نقطة أساس فيما يلي قد نسميها لوس1.7 كيلو ، لوس4.3k و لوس25.7 ك ، على التوالي (الشكل 1 أ-ج والشكل S1 في المعلومات التكميلية). استخدمنا ثلاثة شروط مختلفة: نفس الشيء لوس- تركيز الجين (الشكل 1 د) ، نفس تركيز وحدة النوكليوتيدات (الشكل 1 هـ) ، ومزيج من الاثنين (نفسهما) لوس- تركيز وحدة الجينات والنيوكليوتيدات المعدل بإضافة الحمض النووي غير المشفر ، nc2.6 ك) (الشكل 1f). مستوى التعبير من لوس25.7k أعلى 1000 مرة من ذلك مع لوس1.7 كيلو ، مما يشير إلى أن محصول البروتين لكل جين مستهدف يزداد بمقدار 1000 مرة من حيث الحجم لقالب أطول ، لوس25.7 ك (الشكل 1 د). في حالة نفس تركيز وحدة النوكليوتيدات ، حيث تتناسب تركيزات الأهداف عكسًا مع طول جزيئات الحمض النووي (الشكل 1 هـ) ، فإن مستوى التعبير من لوس25.7k هو الأعلى على الرغم من حقيقة ذلك لوسيحتوي 25.7k على أقل عدد من الأهداف. ومن المثير للاهتمام ، في مقارنة لوس1.7 كيلو و لوس4.3 كيلو ، لوستسبب 4.3k في زيادة مستوى التعبير الجيني بمقدار 7 مرات (الشكل 1 د) ومرتين (الشكل 1 هـ) ، على التوالي. تشير هذه النتائج إلى أن حذف منطقة غير مشفرة 2.6 كيلو بايت يؤدي إلى انخفاض إنتاجية البروتين ، أي أن حجم التعبير الجيني يزداد عندما تكون منطقة ترميز لوسيفيراز متصلة بالمنطقة غير المشفرة. للتحقق من صحة هذه النتيجة ، تمت مقارنة مستوى التعبير الجيني بشرط أن كلا من كمية لوس- تم توحيد تركيز الجين والنيوكليوتيدات بإضافة المزيد nc2.6k إلى المخزن المؤقت للتفاعل (الشكل 1f). وتبين أن إضافة nc2.6k إلى لوس1.7 كيلو و لوستسبب 4.3k في زيادة إنتاجية البروتين من حيث الحجم (الشكل 1 د ، و) ، مما يشير إلى التأثير الجوهري لتركيز النيوكليوتيدات على كفاءة التعبير الجيني. ومع ذلك ، من الواضح أن كفاءة التعبير لكل هدف تتعزز بشكل ملحوظ عندما يكون طول قالب جزيء DNA أطول (الشكل 1f).

تأثيرات العوامل المختلفة على كفاءة التعبير الجيني. (أ,ب) رسم تخطيطي للأبوين 4.3-kbp و 25.7-kbp plasmid DNAs. يمثل الصندوق الأبيض الموجود على DNA البلازميد جين مراسل لوسيفيراز اليراع مع محفز T7. يوضح السهم الأحمر في المربع الأبيض اتجاه النسخ الجيني للمراسل. (ج) شظايا الحمض النووي الناتجة عن هضم Sal I للوالد 25.7 kbp البلازميد أو تضخيم PCR. ينتج Sal I جين مراسل خطي واحد بسعة 25.7 كيلو بايت. تم تحضير جين مراسل 1.7 كيلو بايت ، وجين مراسل 4.3 كيلو بايت ، وجزء DNA غير مشفر 2.6 كيلو بايت في الثانية بواسطة PCR القياسي. يتم تلوين جين المراسل الخطي 25.7 كيلو بايت في الثانية ومنطقة الحمض النووي غير المشفر 2.6 كيلو بايت في اللون الأحمر والرمادي ، على التوالي. (دF) كفاءة، أنا، من رد فعل النسخ / الترجمة المقترنة لوس-الجين ، كما تم تقييمه من تغير شدة التألق. نفس الشيء لوس- تركيز الجين (0.12 ميكرومتر ، د) ، نفس تركيز وحدة النوكليوتيدات (1.8 ميكرومتر ، ه) ، أو مزيج من الاثنين (نفس لوس- تركيز وحدة الجينات والنيوكليوتيدات) (0.12 ميكرومتر و 1.8 ميكرومتر ، F) من جينات المراسل. في (د - و) ، يُظهر المحور الطولي شدة التألق النسبية المقيسة إلى تلك الخاصة بـ لوس25.7 ك. مستويات التعبير البروتين النسبي مع لوسيتم تقديم 25.7 ك كوسيلة ± SD لما لا يقل عن خمس تجارب مستقلة.

تشير النتائج المذكورة أعلاه بوضوح إلى أن مستوى التعبير الجيني زاد بشكل ملحوظ استجابة لزيادة طول القوالب ، بالإضافة إلى تأثير تركيز النوكليوتيدات في محلول عازلة التفاعل. يتضح أن قوة التعبير في ترتيب لوس25.7 كيلو و GT لوس4.3 كيلو و GT لوس1.7 ك تحت جميع الظروف التي تم اختبارها هنا (الشكل 1). لا يعتمد على عدد الأهداف ، بل على طول قالب DNA. تشير هذه النتائج أيضًا إلى أن المنطقة غير المشفرة في الحمض النووي للمراسل متورطة في تنظيم التعبير الجيني.

قد لا يكون تصميم الحمض النووي الخطي الموضح في الشكل 1 مقنعًا بدرجة كافية لاستقصاء تأثير طول الحمض النووي على التعبير الجيني حيث تختلف التسلسلات غير المحددة لكل من التدفقات الصاعدة والهابطة لمحفز T7 RNA في كل جين. لمعالجة القلق في التصميم التجريبي ، قمنا بعد ذلك بتصميم اختبار ترجمة في المختبر بأربعة أنواع من جينات المراسل بأطوال نيوكليوتيدات مختلفة. تم الحصول على الحمض النووي للمراسل الأربعة الذي يشفر لوسيفيراز اليراع مع مروج T7 من DNA البلازميد المتماثل 25.7 كيلو بايت في البوصة المشقوق بإنزيم التقييد Sal I أو Afl II أو Aat II أو ApaL I ، على التوالي (الشكل 2 أ). ينتج Sal I جين مراسل خطي واحد بسعة 25.7 كيلو بايت ، بينما تولد الإنزيمات الأخرى جينات مراسلة ذات أطوال مختلفة مع شظايا DNA غير مشفرة (الشكل 2 ب). يمزج الحمض النووي الناتج مع جينات المراسل بأطوال مختلفة (ApaLI 2.8k و AatII 3.3k و AflII 11.2k و لوس25.7k) لتقييم كفاءتها الترجمية كقوالب DNA للنسخ / الترجمة المقترنة المستمرة. كما هو متوقع ، زاد التعبير الجيني للمراسل بطريقة تعتمد على طول النيوكليوتيدات على قوالب الحمض النووي بينما ظلت كمية وتكوين النيوكليوتيدات متطابقة في كل تفاعل (الشكل 2 ج ، د). تشير هذه النتائج بقوة إلى أن طول الحمض النووي يؤثر بشكل إيجابي على الأنشطة الجينية في نظام التعبير الجيني الخالي من الخلايا.

تعتمد على طول النوكليوتيدات في النسخ / الترجمة المقترنة لـ لوس-جين. (أ) رسم تخطيطي للحمض النووي للبلازميد 25.7 كيلو بايت للوالدين مع مواقع هضم إنزيم التقييد. يمثل الصندوق الأبيض الموجود على DNA البلازميد جين مراسل لوسيفيراز اليراع مع محفز T7. يوضح السهم الأحمر في المربع الأبيض اتجاه النسخ الجيني للمراسل. (ب) شظايا الحمض النووي الناتجة عن تفاعلات هضم الإنزيم للبلازميد الأبوي. ينتج Sal I جين مراسل خطي واحد بسعة 25.7 كيلو بايت. يولد Afl II و Aat II و ApaL I جين مراسل 11.2 كيلو بايت وثلاثة أنواع من شظايا الحمض النووي غير المشفر 4.8 كيلو بايت في الثانية وجين مراسل 3.3 كيلو بايت وخمسة أنواع من أجزاء الحمض النووي غير المشفرة (7-bp ، ثلاثة 4.8 أطوال -kbp و 7.9-kbp) وجين مراسل 2.8 كيلوبايت وأربعة أنواع من أجزاء الحمض النووي غير المشفرة (20.7-kbp و 1.2-kbp وطولان 0.5-kbp) ، على التوالي. تم تلوين جينات المراسل في شظايا الحمض النووي باللون الأحمر لـ Sal I ، والبرتقالي لـ Afl II ، والأخضر لـ Aat II والأزرق الفاتح لعلاجات ApaL I ، على التوالي. (ج,د) كفاءة، أنا، من رد فعل النسخ / الترجمة المقترنة لوس-جين ، كما تم تقييمه من شدة التألق. 2.5 نانوغرام (ج) و 15 نانوغرام (د) من مخاليط DNA المهضومة كقوالب DNA للتفاعل. في (ج,د) ، يُظهر المحور الطولي شدة التألق النسبية المقيسة إلى تلك الخاصة بـ لوس25.7 ك. مستويات التعبير البروتين النسبي مع لوسيتم تقديم 25.7k كوسيلة ± SD لما لا يقل عن خمس تجارب مستقلة.

لتحديد تأثير حجم الجين المراسل على نشاط التعبير الجيني ، تم إجراء ملاحظات جزيء واحد لكل جين مراسل خطي بواسطة AFM. كشفت صور AFM لكل DNA في المخزن المؤقت لـ 10 مللي مولار Tris – HCl (pH7.5) عن بنية خطية ، مما يشير إلى أن جزيئات الحمض النووي تميل إلى إظهار بنية متعرجة أكثر كلما زاد طولها (الشكل 3 أ). بشكل ملحوظ ، في خليط تفاعل 0.05٪ للتعبير الجيني في المختبر ، لوسشكل 25.7 كيلو هيكلًا متقلصًا مع كثافة أعلى لشرائح الحمض النووي من تلك الموجودة في لوس4.3k و لوس1.7 ك (الشكل 3 ب والشكل S2 في المعلومات التكميلية). بناءً على هذه الملاحظات ، نعتبر أن سلوكيات الانزلاق والقفز لبوليميراز الحمض النووي الريبي ، والتي تمت دراستها على نطاق واسع ، قد تم تعزيزها باستخدام الحمض النووي الأطول. بالإضافة إلى ذلك ، تميل البروتينات التي تتعايش في المخزن المؤقت لتفاعل التعبير الجيني إلى التمركز على التشكل المنكمش لجزيئات الحمض النووي الأكبر حجمًا ، مما يشير إلى أن التقارب الفعال لبوليميراز الحمض النووي الريبي للحمض النووي قد تم تعزيزه في الحمض النووي الأطول (انظر التمثيلات التخطيطية على الصور السفلية في الشكل . 3 ب). في المناقشة التالية ، قد نجادل في آلية تعزيز التعبير الجيني فيما يتعلق بالخصائص الفيزيائية والكيميائية لجزيئات الحمض النووي الأطول.

صور AFM لمراسل الحمض النووي بأطوال مختلفة مع التمثيلات التخطيطية. (أ) صور AFM لكل DNA مراسل خطي في 10 ملي محلول تريس - حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.5). (ب) صور AFM لكل DNA مراسل خطي في خليط تفاعل 0.05٪ للتعبير الجيني في المختبر.

تنظم الخلايا التعبير الجيني للحفاظ على الوظائف الخلوية. يبدأ التعبير الجيني بالنسخ ويتبعه باستمرار أحداث الترجمة. ومن ثم ، فإن بدء النسخ هو نقطة فعالة للتحكم في إنتاج البروتين. في هذه الدراسة ، أوضحنا أن طول الحمض النووي هو عامل حاسم للتعبير الجيني باستخدام نظام النسخ / الترجمة المقترن. يمكن تفسير الآثار الإيجابية لطول الحمض النووي على كفاءة التعبير الجيني بشكل أساسي من خلال زيادة نشاط النسخ ، بينما يجب أيضًا مراعاة استقرار mRNA ونشاط النيوكلياز وتدهور القالب. في الواقع ، يبدو أن mRNA كان أقل ثباتًا قليلاً من RNA الريبوسومي عندما تم فحص استقرار mRNA في محللات الخلايا الشبكية بواسطة RT-qPCR (الجدول S1 في المعلومات التكميلية). في هذه الأثناء ، يُلاحظ أن أطوال واستقرار النصوص من كل جين مراسل في الشكل 2 هي نفس تلك الخاصة بالنيوكليوتيدات من مروج T7 إلى فاصلها. وبالتالي ، يُنظر إلى أن مرحلة الترجمة لا تشارك في التحكم في التعبير الجيني في التجارب الحالية في نظام خالٍ من الخلايا.


ترددات مواقع الحظر

يلخص الجدول أدناه الترددات التي تحدث بها مواقع نوكلياز التقييد في جزيئات الحمض النووي الشائعة الاستخدام. يمكن العثور على خرائط تقييد مفصلة في تسلسل الحمض النووي والخرائط. تم تحديد المواقع المدرجة في هذه الجداول من خلال تحليل الكمبيوتر للتسلسلات المنشورة. على الرغم من أننا حاولنا التأكد من دقتها ، إلا أنه لم يتم تأكيد المواقع بالضرورة عن طريق التجريب. عندما يتم عرض نفس الخصوصية بواسطة عدة إنزيمات ، يتم سرد الموقع باسم الإنزيم المتاح من New England Biolabs. يتم سرد الإنزيمات الأخرى بنفس الخصوصية في جدول المتشابهات المتشابهة. يتم كتابة تسلسل التعرف 5 & حاد إلى 3 & حاد.

DNASU هو مستودع مركزي لاستنساخ ومجموعات البلازميد التي قد تكون مفيدة أيضًا.

إنزيم تسلسل التعرف Adeno 2 لامدا ** M13mp18 * pBR322 pKLAC2 pMAL-p5x pSNAPf pTXB1 pTYB21 pUC19 T7
آاتي § GACGT / C. 3 10 0 1 0 0 5 1 0 1 1
AbaSI § CNNNNNNNNNNN / NNNNNNNNNG
AccI § GT / MKAC 17 9 1 2 5 1 2 5 3 1 33
Acc65I § G / GTACC 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
AciI § CCGC (-3 / -1) 582 516 42 67 81 80 75 102 92 34 199
AclI § AA / CGTT 3 7 2 4 2 5 3 12 9 2 19
AcuI § CTGAAG (16/14) 23 40 0 2 8 4 5 2 2 2 1
AfeI § AGC / GCT 13 2 1 4 0 2 0 1 2 0 0
AflII § ج / تاغ 4 3 0 0 0 0 0 0 0 0 19
AflIII § A / CRYGT 25 20 3 1 4 2 5 3 4 1 23
العمر أنا § أ / CCGGT 5 13 0 0 1 0 1 1 0 0 2
AgeI-HF® § أ / CCGGT 5 13 0 0 1 0 1 1 0 0 2
عهدي § GACNNN / NNGTC 9 9 0 1 1 2 1 2 2 1 14
AleI-v2 § CACNN / NNGTG 10 20 1 0 1 0 1 0 2 0 8
AluI § AG / CT 158 143 27 17 38 28 27 30 34 16 140
AlwI § جاتك (4/5) 35 58 3 12 18 12 20 15 16 10 1
ألوني § CAGNNN / CTG 25 41 1 1 5 2 4 1 2 1 15
ApaI § GGGCC / C. 12 1 0 0 0 1 1 1 1 0 0
ApaLI § G / TGCAC 7 4 0 3 3 6 4 4 4 3 1
ApeKI § G / CWGC 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
ApoI § R / AATTY 29 58 11 0 19 5 3 5 7 1 13
ApoI-HF § R / AATTY 29 58 11 0 19 5 3 5 7 1 13
AscI § GG / CGCGCC 2 2 0 0 0 0 1 0 0 0 0
AseI § AT / TAAT 3 17 7 1 5 4 7 10 4 3 12
عاصي § GCGAT / CGC 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
افاي § C / YCGRG 40 8 2 1 2 1 2 3 1 1 4
AvaII § G / GWCC 73 35 1 8 7 9 6 6 8 2 54
AvrII § C / CTAGG 2 2 0 0 0 0 1 0 0 0 3
BaeGI § GKGCM / ج 45 10 1 3 8 8 8 6 5 3 16
بايي § (10/15) ACNNNNGTAYC (12/7) 5 10 3 0 1 0 0 0 1 0 3
بامهي § G / GATCC 3 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
BamHI-HF® § G / GATCC 3 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
باني § G / GYRCC 57 25 7 9 7 4 8 8 12 4 33
BanII § GRGCY / C. 57 7 2 2 5 2 5 3 6 1 1
BBSI § GAAGAC (2/6) 27 24 0 3 3 3 2 4 4 0 38
BbsI-HF ® § GAAGAC (2/6) 27 24 0 3 3 3 2 4 4 0 38
BbvCI § CCTCAGC (-5 / -2) 9 7 2 0 0 0 0 0 0 0 10
BbvI § GCAGC (8/12) 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
BccI § CCATC (4/5) 62 145 14 9 22 16 8 14 25 3 121
BceAI § ACGGC (12/14) 80 115 7 3 13 11 8 13 10 2 47
BcgI § (10/12) CGANNNNNNTGC (12/10) 10 28 0 3 6 4 1 4 6 1 19
BciVI § GTATCC (6/5) 9 26 0 2 3 4 3 4 4 2 23
BclI § T / جاتكا 5 8 0 0 2 2 1 1 2 0 1
BclI-HF § T / جاتكا 5 8 0 0 2 2 1 1 2 0 1
BcoDI § GTCTC (1/5) 60 37 5 3 11 8 4 8 9 4 95
BfaI § ج / تاغ 54 13 5 5 19 3 14 8 8 4 60
BfuAI § ACCTGC (4/8) 39 41 3 1 5 4 4 2 3 1 18
BglI § GCCNNNN / NGGC 20 29 1 3 3 1 7 2 3 2 2
BglII § أ / جاتكت 11 6 1 0 1 1 2 0 2 0 1
BlpI § GC / TNAGC 8 6 0 0 0 1 0 1 1 0 20
BmgBI § كاكجتك (-3 / -3) 15 17 0 0 1 1 2 0 0 0 8
بمري § ACTGGG (5/4) 22 4 1 5 2 5 11 8 2 6
BMTI § GCTAG / ج 4 1 0 1 4 0 1 1 1 0 1
BmtI-HF® § GCTAG / ج 4 1 0 1 4 0 1 1 1 0 1
BpmI § CTGGAG (16/14) 32 25 2 4 3 4 1 5 6 1 23
BpuEI § CTTGAG (16/14) 19 13 4 6 7 5 9 7 9 4 56
Bpu10I § CCTNAGC (-5 / -2) 23 19 4 1 0 1 2 0 2 0 39
ساعي § YAC / GTR 22 14 5 1 4 0 3 2 4 0 35
BsaBI § GATNN / NNATC 2 21 2 1 2 2 1 1 3 0 7
BsaHI § GR / CGYC 44 40 1 6 6 5 8 12 7 3 8
BsaI-HF®v2 § GGTCTC (1/5) 18 2 0 1 3 2 2 2 2 1 29
BsaJI § C / CNNGG 234 105 9 8 18 10 17 15 15 5 85
BsaWI § W / CCGGW 28 81 6 5 8 7 5 8 6 3 32
BsaXI § (9/12) ACNNNNNCTCC (10/7) 29 19 4 0 3 1 1 2 3 1 12
BseRI § GAGGAG (10/8) 63 19 1 0 2 0 3 0 0 0 13
BseYI § CCCAGC (-5 / -1) 31 32 3 2 3 4 5 4 4 1 29
BSGI § GTGCAG (16/14) 34 41 0 1 4 6 3 5 4 0 21
BsiEI § CGRY / CG 50 22 3 7 11 8 6 9 8 5 17
بشكاي § GWGCW / C. 38 28 3 8 8 9 9 7 7 5 24
BsiWI § ج / GTACG 4 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0
BsiWI-HF ® § ج / GTACG 4 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0
BSLI § CCNNNNN / NNGG 216 176 17 20 18 16 26 31 25 6 90
BsmAI § GTCTC (1/5) 60 37 5 3 11 8 8 10 4 95
BsmBI-v2 § CGTCTC 21 14 1 1 2 2 0 2 2 2 16
BsmFI § GGGAC (10/14) 59 38 2 4 4 1 5 4 6 0 46
BsmI § GAATGC (1 / -1) 10 46 1 1 3 1 5 1 0 0 15
BsoBI § C / YCGRG 40 8 2 1 2 1 2 3 1 1 4
BspCNI § CTCAG (9/7) 75 80 24 7 10 10 9 20 16 5 142
BspDI § AT / CGAT 2 15 2 1 2 0 0 0 0 0 3
BspEI § T / CCGGA 8 24 0 1 1 2 0 1 1 0 0
BspHI § T / كاتجا 3 8 1 4 2 1 2 2 3 3 13
Bsp1286I § GDGCH / C. 105 38 5 10 16 11 15 11 12 5 40
BspMI § ACCTGC (4/8) 39 41 3 1 5 4 4 2 3 1 18
BspQI § جي سي تي سي تي سي تي سي (1/4) 7 10 0 1 2 1 3 1 1 1 4
BSRBI § CCGCTC (-3 / -3) 28 17 4 2 6 4 6 9 5 3 17
BSRDI § GCAATG (2/0) 14 44 3 2 7 4 4 4 4 2 18
BSrFI-v2 § R / CCGGY 40 61 1 7 9 2 6 11 9 1 3
BSRGI § T / GTACA 5 5 1 0 1 0 1 1 2 0 13
BSRGI-HF® § T / GTACA 5 5 1 0 1 0 1 1 2 0 13
BSRI § ACTGG (1 / -1) 86 110 19 18 23 26 19 32 28 11 118
BssHII § G / CGCGC 52 6 0 0 1 2 2 1 1 0 1
BssSI-v2 § كاكجاج (-5 / -1) 11 8 0 3 5 3 4 2 4 3 31
BstAPI § GCANNNN / NTGC 20 34 0 2 3 2 0 3 2 1 12
BstBI § TT / CGAA 1 7 0 0 2 0 0 0 1 0 7
BstEII § G / GTNACC 10 13 0 0 1 1 0 1 1 0 1
BstEII-HF® § G / GTNACC 10 13 0 0 1 1 2 1 1 0 1
BstNI § CC / WGG 136 71 7 6 15 14 19 19 14 5 2
BstUI § CG / CG 303 157 17 23 26 31 19 41 35 10 65
BstXI § CCANNNNN / NTGG 10 13 0 0 2 4 1 4 3 0 11
BstYI § ص / جاتسي 22 21 2 8 12 9 11 10 12 7 2
BstZ17I-HF ® § GTATAC 3 3 0 1 3 0 1 1 1 0 8
Bsu36I § CC / TNAGG 7 2 1 0 1 1 1 0 0 0 30
BtgI § C / CRYGG 82 46 2 2 4 3 6 1 4 0 26
BtgZI § GCGATG (10/14) 23 45 4 3 4 6 6 4 3 0 24
BtsCI § GGATG (2/0) 78 150 4 12 20 17 7 12 18 5 97
BtsIMutI § CAGTG (2/0) 20
BtsI-v2 § GCAGTG (2/0) 22 34 1 2 7 5 5 4 4 3 20
Cac8I § GCN / NGC 285 238 28 31 33 32 41 49 42 14 104
CLI § AT / CGAT 2 15 2 1 2 0 0 0 0 0 3
CspCI § (11/13) CAANNNNNGTGG (12/10) 6 7 1 0 1 0 1 0 0 0 9
CviAII § ج / ATG 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
CviKI-1 § RG / قبرصي 680 692 103 73 131 86 119 112 121 45 562
CviQI § جي / تاك 83 113 19 3 15 7 14 6 11 3 168
DdeI § C / TNAG 97 104 30 8 17 11 11 20 19 6 282
DpnI § GA / TC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
DpnII § / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
دراي § TTT / AAA 12 13 5 3 5 1 6 3 2 3 9
DraIII-HF® § CACNNN / GTG 10 10 1 0 2 0 6 1 1 0 16
DrdI § GACNNNN / NNGTC 6 3 1 2 5 2 2 4 4 2 11
EaeI § نعم / GGCCR 70 39 3 6 10 5 15 4 8 3 2
EagI-HF® § ج / GGCCG 19 2 0 1 4 1 2 2 2 0 0
EarI § CTCTTC (1/4) 29 34 2 2 11 6 4 3 5 3 46
EciI § GGCGGA (11/9) 29 32 2 4 6 6 8 9 8 3 2
Eco53kI § GAG / CTC 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
EcoNI § CCTNN / NNNAGG 10 9 0 1 3 0 0 2 1 0 1
EcoO109I § RG / GNCCY 44 3 0 4 1 2 5 1 3 1 22
EcoP15I § CAGCAG (25/27) 50 72 4 7 7 10 6 6 5 3 36
EcoRI § G / AATTC 5 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
EcoRI-HF® § G / AATTC 5 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
EcoRV § GAT / ATC 9 21 0 1 1 1 1 1 3 0 0
EcoRV-HF® § GAT / ATC 9 21 0 1 1 1 1 1 3 0 0
Esp3I § CGTCTC (1/5) 21 14 1 1 2 2 0 2 2 2 16
فات آي § / CATG 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
FauI § مجلس التعاون الجمركي (4/6) 147 90 10 10 14 17 11 28 22 5 24
Fnu4HI § GC / NGC 411 380 17 42 52 42 47 49 52 19 156
FokI § جاتج (9/13) 78 150 4 12 20 17 7 12 18 5 97
FseI § GGCCGG / CC 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
FspEI § CC (12/16)
FspI § TGC / GCA 17 15 1 4 3 2 2 1 2 2 7
HaeII § RGCGC / Y. 76 48 6 11 6 9 3 7 12 3 26
HaeIII § GG / CC 216 149 15 22 31 23 36 34 36 11 68
HgaI § GACGC (5/10) 87 102 7 11 10 12 7 20 15 4 70
HhaI § GCG / ج 375 215 26 31 36 39 41 46 17 103
HincII § GTY / RAC 25 35 1 2 9 7 4 7 6 1 61
HindIII § أ / AGCTT 12 6 1 1 1 1 4 0 2 1 0
HindIII-HF® § أ / AGCTT 12 6 1 1 1 1 4 0 2 1 0
HinfI § G / ANTC 72 148 26 10 31 9 11 16 20 6 218
HinP1I § G / CGC 375 215 26 31 36 39 27 41 46 17 103
HpaI § GTT / AAC 6 14 0 0 3 1 1 1 2 0 18
HpaII § C / CGG 171 328 18 26 32 25 24 50 35 13 58
HphI § GGTGA (8/7) 99 168 18 12 15 19 14 21 20 7 102
HpyAV § CCTTC (6/5) 84 106 14 10 24 14 11 16 20 6 110
HpyCH4III § ACN / GT 122 187 31 14 25 20 15 18 22 8 174
HpyCH4IV § A / CGT 83 143 22 10 21 10 19 23 22 5 170
HpyCH4V § TG / CA 207 273 18 21 39 28 30 26 27 13 116
Hpy188I § TCN / GA 80 170 31 15 24 19 17 19 28 10 153
Hpy99I § CGWCG / 61 102 8 9 14 9 13 18 16 5 29
Hpy166II § GTN / NAC 116 125 10 8 29 20 13 27 24 5 199
Hpy188III § TC / NNGA 103 185 28 19 32 22 25 27 28 13 173
I-CeuI § تاكتاتاكجتككتاجتاجكجا (-9 / -13) 0 0 0 0 0 0
I-SceI § تاجاتاكاجتات (-9 / -13) 0 0 0 0 0 0
كاسي § G / GCGCC 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
KpnI § GGTAC / سي 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
KpnI-HF® § GGTAC / سي 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
LpnPI § CCDG (10/14)
MboI § / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
MboII § GAAGA (8/7) 113 130 10 11 38 15 14 14 18 8 140
MfeI § ج / AATTG 4 8 0 0 2 1 2 1 1 0 8
MfeI-HF® § ج / AATTG 4 8 0 0 2 1 2 1 1 0 8
MluCI § / AATT 87 189 62 8 43 22 19 31 44 7 79
MluI § A / CGCGT 5 7 0 0 0 1 2 2 1 0 1
MluI-HF® § A / CGCGT 5 7 0 0 0 1 2 2 1 0 1
MlyI § GAGTC (5/5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
MmeI § TCCRAC (20/18) 25 18 3 4 8 3 5 4 4 2 33
MnlI § CCTC (7/6) 397 262 62 26 56 24 41 35 39 13 342
MscI § TGG / CCA 17 18 1 1 0 1 2 0 1 0 2
MseI § T / TAA 115 195 63 15 41 24 23 32 39 13 207
مسلي § CAYNN / NNRTG 35 62 3 7 10 10 6 7 9 3 38
MspA1I § CMG / CKG 95 75 4 6 14 11 8 10 12 6 35
MspI § C / CGG 171 328 18 26 32 25 24 50 35 13 58
MspJI § CNNR (9/13)
MwoI § GCNNNNN / NNGC 391 347 19 34 33 30 42 41 43 13 170
NaeI § دول مجلس التعاون الخليجي / GGC 13 1 1 4 3 0 2 5 5 0 0
ناري § GG / CGCC 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
ملحوظة: كتكاجك 9 7 2 0 0 0 0 0 0 10
Nb.BsmI § GAATGC 10 46 1 1 3 1 1 0 0 15
Nb.BsrDI § GCAATG 14 44 3 2 7 4 4 4 2 18
Nb.BssSI § كاكجاج 11 8 0 3 5 3 2 4 3 31
Nb.BtsI § GCAGTG 22 34 1 2 7 5 4 4 3 20
NciI § CC / SGG 97 114 4 10 10 13 9 27 15 7 9
NcoI § C / CATGG 20 4 0 0 1 1 3 0 1 0 1
NcoI-HF® § C / CATGG 20 4 0 0 1 1 3 0 1 0 1
NdeI § CA / TATG 2 7 3 1 1 1 1 1 1 1 7
NgoMIV § G / CCGGC 13 1 1 4 3 0 2 5 5 0 0
NheI-HF® § G / CTAGC 4 1 0 1 4 0 1 1 0 1
NlaIII § كاتج / 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
NlaIV § GGN / NCC 178 82 18 24 22 14 20 22 30 11 99
NmeAIII § GCCGAG (21/19) 17 8 0 3 2 3 2 2 4 1 14
لاأنا § GC / GGCCGC 7 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0
NotI-HF® § GC / GGCCGC 7 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0
NruI § TCG / CGA 5 5 0 1 1 0 1 1 0 0 3
NruI-HF® § TCG / CGA 5 5 0 1 1 0 1 1 0 0 3
NsiI § ATGCA / ت 9 14 0 0 6 0 1 0 0 0 8
NsiI-HF® § ATGCA / ت 9 14 0 0 6 0 1 0 0 0 8
NspI § RCATG / Y 41 32 6 4 9 3 5 5 5 3 24
Nt. Alwi § GGATC (4 / -5) 35 58 3 12 18 12 15 16 10 1
Nt.BbvCI § CCTCAGC (-5 / -7) 9 7 2 0 0 0 0 0 0 10
Nt.BsmAI § GTCTC (1 / -5) 60 37 5 3 11 8 8 10 4 95
Nt.BspQI § جي سي تي سي تي سي تي سي (1 / -7) 7 10 0 1 2 1 1 1 1 4
Nt.BstNBI § GAGTC (4 / -5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
Nt.CviPII § (0 / -1) CCD 4148 4641 570 457 806 570 609 716 729 251 3575
PacI § TTAAT / TAA 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1
PaeR7I § C / TCGAG 6 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0
PaqCI § كاككتجك (4/8) 9 12 0 0 0 0 1 0 0 0 5
PCII § أ / كاتجت 9 2 3 1 3 1 2 1 1 1 6
PflFI § GACN / NNGTC 12 2 0 1 1 1 1 1 2 0 1
PflMI § CCANNNN / NTGG 18 14 0 2 3 1 5 2 2 0 8
PI-PspI § تجكاكاكاجكتاتاتججتاتتاتجت (-13 / -17) 0 0 0 0 0 0
PI-SceI § أتكتاتجتكجتجكججاجاجاجاجتات (-15 / -19) 0 0 0 0 0 0
PleI § GAGTC (4/5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
بلوتي § جي جي سي جي سي / سي
PmeI § GTTT / AAAC 1 2 0 0 0 0 1 1 0 0 2
PmlI § كاك / جي تي جي 10 3 0 0 0 0 1 0 1 0 1
PpuMI § RG / GWCCY 23 3 0 2 1 2 1 0 0 0 12
PshAI § GACNN / NNGTC 2 7 0 1 1 0 0 1 2 0 6
PsiI-v2 § TTA / TAA 4 12 2 0 2 1 1 1 1 0 5
PspGI § / CCWGG 136 71 7 6 15 14 19 19 14 5 2
PspOMI § G / GGCCC 12 1 0 0 0 1 1 1 1 0 0
PspXI § VC / TCGAGB 3 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0
PstI § CTGCA / G 30 28 1 1 3 1 4 1 1 1 0
PstI-HF® § CTGCA / G 30 28 1 1 3 1 4 1 1 1 0
PvuI § CGAT / CG 7 3 1 1 2 1 1 2 2 0
PvuI-HF® § CGAT / CG 7 3 1 1 3 2 1 1 2 2 0
PvuII § CAG / CTG 24 15 3 1 3 3 3 3 4 2 3
PvuII-HF® § CAG / CTG 24 15 3 1 3 3 3 3 4 2 3
RsaI § GT / AC 83 113 19 3 15 7 14 6 11 3 168
RsrII § CG / GWCCG 2 5 0 0 0 1 1 0 0 0 1
ساسي § GAGCT / ج 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
SacI-HF® § GAGCT / سي 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
SacII § CCGC / GG 33 4 0 0 2 0 1 1 1 0 0
سالي § G / TCGAC 3 2 1 1 1 1 1 4 1 1 0
SalI-HF® § G / TCGAC 3 2 1 1 1 1 1 4 1 1 0
سابي § جي سي تي سي تي سي تي سي (1/4) 7 10 0 1 2 1 3 1 1 1 4
Sau3AI § / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
Sau96I § G / GNCC 164 74 4 15 14 20 21 26 24 6 79
SbfI § CCTGCA / GG 3 5 1 0 1 1 1 0 1 1 0
SbfI-HF® § CCTGCA / GG 3 5 1 0 1 1 1 0 1 1 0
ScaI-HF® § AGT / ACT 5 5 0 1 2 1 1 2 1 4
ScrFI § CC / NGG 233 185 11 16 25 27 28 46 29 12 11
SexAI § A / CCWGGT 9 5 0 0 3 0 0 0 0 0 0
SfaNI § GCATC (5/9) 85 169 7 22 18 20 17 23 19 8 96
SfcI § C / TRYAG 47 38 7 4 9 4 10 6 8 4 48
SfiI § GGCCNNNN / NGGCC 3 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1
SFOI § GGC / دول مجلس التعاون الخليجي 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
SgrAI § CR / CCGGYG 6 6 0 1 0 0 0 1 1 0 0
SmaI § مجلس التعاون الجمركي / GGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
SmlI § ج / تايراغ 29 17 4 6 8 5 10 8 9 4 75
SnaBI § TAC / GTA 0 1 1 0 1 0 1 0 0 0 13
SpeI § أ / CTAGT 3 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2
SpeI-HF® § أ / CTAGT 3 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2
SphI § GCATG / ج 8 6 1 1 2 0 2 2 1 1 0
SphI-HF® § GCATG / ج 8 6 1 1 2 0 2 2 1 1 0
SrfI § GCCC / GGGC
SspI § AAT / ATT 5 20 6 1 6 2 1 3 5 1 6
SspI-HF® § AAT / ATT 5 20 6 1 6 2 1 3 5 1 6
StuI § AGG / CCT 11 6 0 0 1 0 0 1 1 0 1
StyD4I § / CCNGG 233 185 11 16 25 27 28 46 29 12 11
StyI-HF® § C / CWWGG 44 10 0 1 4 1 4 2 4 0 36
SwaI § ATTT / AAAT 1 0 1 0 0 0 1 1 1 0 1
TaqI-v2 § T / CGA 50 121 12 7 32 16 15 22 17 4 111
TfiI § G / AWTC 32 87 18 6 14 4 5 5 10 2 103
TseI § G / CWGC 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
Tsp45I § / GTSAC 73 81 9 9 9 7 5 12 13 4 108
TspMI § C / CCGGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
TspRI § NNCASTGNN / 83 119 9 11 22 14 16 16 15 10 94
Tth111I § GACN / NNGTC 12 2 0 1 1 1 1 1 2 0 1
XbaI § T / CTAGA 5 1 1 0 1 0 1 1 1 1 3
XcmI § CCANNNNN / NNNNTGG 14 12 0 0 1 3 0 3 4 0 8
XhoI § C / TCGAG 6 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0
XmaI § C / CCGGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
XmnI § GAANN / NNTTC 5 24 2 2 3 1 3 7 2 1 12
ZraI § GAC / GTC 3 10 0 1 0 0 5 1 0 1 1

& القسم نسخة HF من هذا الإنزيم متاح.

* بالنسبة إلى M13mp18 ، سيتم قطع المناطق مزدوجة الشريطة فقط.
** يشير إلى ركيزة الحمض النووي من النوع البري Hind III بها 6 مواقع تقييد على الحمض النووي لعاثيات لامدا من النوع البري ، بينما يحتوي Lambda's mutant (Lambda DNA، NEB # N3011) على 7 مواقع Hind III.


كل ما تريد معرفته عن إنزيمات التقييد من النوع الثاني

ما هي استخدامات إنزيمات التقييد من النوع الثاني؟

إنزيمات التقييد من النوع الثاني هي الأنزيمات المألوفة المستخدمة في تطبيقات البيولوجيا الجزيئية اليومية مثل استنساخ الجينات وتفتيت الحمض النووي وتحليله. تشق هذه الإنزيمات الحمض النووي في مواضع ثابتة فيما يتعلق بتسلسل التعرف عليها ، مما يخلق شظايا قابلة للتكرار وأنماط منفصلة للهلام الكهربائي. تم اكتشاف وتمييز أكثر من 3500 إنزيم من النوع الثاني ، مع التعرف على حوالي 350 تسلسلًا مختلفًا للحمض النووي. تم التعرف على الآلاف أكثر من إنزيمات lsquoputative و rsquo من النوع الثاني من خلال تحليل الجينوم البكتيري المتسلسل والجينوم البدائي ، ولكنها لا تزال غير مميزة.

كيف يتم تسمية إنزيمات التقييد من النوع الثاني؟

تتم تسمية إنزيمات التقييد وفقًا للكائن الحي الدقيق الذي تم اكتشافها فيه. إنزيم التقييد lsquoHindIII & rsquo ، على سبيل المثال ، هو ثالث أنشطة نوكلياز عديدة موجودة في بكتيريا Haemophilus influenzae المصلي د. تضاف البادئة & lsquoR. & rsquo أحيانًا لتمييز إنزيمات التقييد عن إنزيمات التعديل التي تشاركها في الجسم الحي. وهكذا ، يشير & lsquoR.HindIII & rsquo على وجه التحديد إلى إنزيم التقييد ، و lsquoM.HindIII & rsquo إلى إنزيم التعديل. عندما لا يكون هناك غموض ، يتم حذف البادئة & lsquoR. & rsquo.

النوع الثاني خصائص الانزيمات التقييدية

إن إنزيمات التقييد من النوع الثاني متنوعة للغاية من حيث تسلسل الأحماض الأمينية ، والحجم ، وتنظيم المجال ، وتكوين الوحدة الفرعية ، ومتطلبات العامل المشترك وطرق العمل. يتم تصنيفها بشكل فضفاض إلى أكثر من عشرة أنواع فرعية وفقًا لسلوكها الأنزيمي. هذا تصنيف عملي يعكس خصائصهم بدلاً من نسختهم. إنه لا يعكس بالضرورة العلاقات التطورية أو الهيكلية ، والأنواع الفرعية ليست متعارضة. يمكن أن ينتمي الإنزيم إلى عدة أنواع فرعية إذا أظهر كلًا من خصائصها المحددة. نناقش هذه الأنواع الفرعية بترتيبها من حيث الأهمية ، والأربعة الرئيسية هي النوع IIP و IIS و IIC و IIT.


سؤال : الأسبوع العاشر - أسئلة ما بعد إنزيم التقييد 1- في مختبر اليوم قمت بتنقية DNA البلازميد من الإشريكية القولونية. ما أنواع الجزيئات الموجودة في الإشريكية القولونية التي بدأت بها؟ أ) ما هي أنواع الجزيئات التي تتوقع وجودها في عينتك بعد التنقية؟ ب) ما هو إنزيم التقييد الذي استخدمته لـ

1- في معمل اليوم قمت بتنقية DNA البلازميد من الإشريكية القولونية. ما أنواع الجزيئات الموجودة في الإشريكية القولونية التي بدأت بها؟

أ) ما هي أنواع الجزيئات التي تتوقع وجودها في عينتك بعد التنقية؟

ب) ما هو إنزيم التقييد الذي استخدمته للهضم اليوم؟

ج) ما هو حجم (أحجام) أجزاء الحمض النووي التي تتوقع الحصول عليها من هضم إنزيم التقييد إذا كانت البكتيريا تحتوي على البلازميد بدون إدخال؟

د) ما هو حجم (أحجام) شظايا الحمض النووي التي تتوقع الحصول عليها من هضم إنزيم التقييد إذا كانت البكتيريا تحتوي على البلازميد مع الجين المعني؟

هـ) استنادًا إلى ما تعرفه حول كيفية عمل إنزيمات التقييد ، تشرح سبب قدرتك على التنبؤ بأحجام الحمض النووي التي سيتم الحصول عليها من هذه التجربة.

هذه هي ملاحظات المعمل الخاصة بي من قسم البروتوكول.

الرجاء الإجابة على جميع الأسئلة بوضوح. لقد رفعت كل ما تحتاجه للإجابة على الأسئلة.


الاختبارات الجينية

تم تشخيص الأمراض الوراثية تقليديا من خلال المعايير السريرية أو الاختبارات البيوكيميائية. غالبًا ما يكون التشخيص السريري غامضًا لأن السمات المحددة للاضطراب قد تستغرق سنوات حتى تتطور. قد تؤدي الاختبارات الكيميائية الحيوية المستخدمة لاكتشاف وجود أو عدم وجود منتج جيني إلى نتائج ملتبسة بالإضافة إلى ذلك ، غالبًا ما يكون اختبار ما قبل الولادة وتحديد الحالة الحاملة أمرًا صعبًا. مع ظهور تقنيات جزيئية جديدة ، يمكن الآن تحديد الجينات والطفرات الجينية المحددة قبل ظهور الأعراض السريرية بوقت طويل. فائدة أخرى للاختبار التشخيصي الجديد القائم على البيولوجيا الجزيئية هو أن هذه الاختبارات لا تتطلب سوى عينة صغيرة من الحمض النووي (مثل الموجودة في أنبوب دم واحد) بدلاً من خزعات الأنسجة. بسبب هذه المزايا ، أصبح الاختبار الجيني الجزيئي أمرًا شائعًا.

التقنيات

يستخدم الاختبار الجيني تحليل إنزيم التقييد ، وتهجين الحمض النووي والحمض النووي الريبي ، و PCR (بمفرده أو معًا) للكشف عن الطفرات النقطية الدقيقة ، أو عمليات الحذف ، أو إدخال الحمض النووي. تعد طفرات انزياح الإطارات (حيث يُضاف حمض نووي أو يُحذف ، مما يؤدي إلى تعويض الرمز الثلاثي) ، والإنهاء المبكر للترجمة (مما يؤدي إلى بروتين صغير بشكل شاذ) ، وإدخال تكرارات متعددة من التسلسل اللامعقول ، هي الطفرات التي يُرجح أن تكون مسببة للأمراض أكثر من طفرات بسيطة في زوج القاعدة. الطفرات التي تنطوي على تغيير بسيط من حمض أميني لآخر قد يكون أو لا يكون لها أهمية إكلينيكية. قد يكون من الممكن التنبؤ بتأثير تغيير الأحماض الأمينية بناءً على بنية البروتين ، أو قد يكون من الضروري إعادة إنتاج النمط الظاهري الجديد في ثقافة الخلية أو حتى في نموذج حيواني لإثبات إمكانية إحداث الاستبدال. تُعرف تغييرات الأحماض الأمينية الفردية بدون عواقب بيولوجية ملحوظة باسم تعدد الأشكال الحميدة ، وهي شائعة جدًا في عموم السكان. لذلك ، يجب أن يكون علماء الوراثة قادرين على التمييز بين الطفرات المسببة للأمراض وتعدد الأشكال غير الممرض ، وهي مهمة غالبًا ما تكون صعبة. هذا التمايز واضح في مرض مثل فقر الدم المنجلي ، وهو متجانسة ، حيث أن جميع المرضى المصابين بالمرض لديهم حمض الفالين بديل عن حمض الغلوتاميك على جين بيتا غلوبين في الهيموجلوبين. ومع ذلك ، فإن الاختبارات الجينية معقدة لأن العديد من الأمراض الموروثة ليست نتيجة طفرة واحدة ، بل طفرات متعددة ، تؤدي جميعها إلى نفس النمط الظاهري. على سبيل المثال ، 70٪ من الأوروبيين الشماليين المصابين بالتليف الكيسي لديهم حذف ثلاثة أزواج أساسية ينتج عنه فقدان الحمض الأميني فينيل ألانين من منظم توصيل غشاء التليف الكيسي. [25] من الممكن فحص هذا الحذف وتشخيص المرضى الذين يعانون من هذه الطفرة (الشكل 8). ومع ذلك ، فإن الـ 30٪ المتبقية من المصابين بالتليف الكيسي لديهم أكثر من 200 طفرة مختلفة تؤدي إلى أنماط ظاهرية متشابهة. [26] يحدث عدم التجانس هذا في العديد من الأمراض الموروثة ، وبالتالي ، فإن الاختبار السلبي لطفرة معينة لا يستبعد إمكانية الإصابة بالمرض ، بل يستبعد فقط الطفرة المحددة.

الشكل 8. حذف 3-قاعدية الزوج في التليف الكيسي. تتضمن الطفرة حذف CTT في exon العاشر للجين. التسلسل الموجود على اليسار من شخص سليم والتسلسل على اليمين من مريض مصاب بالتليف الكيسي. ينتج عن هذا الحذف المكون من 3 أزواج أساسية فقدان الفينيل ألانين من البروتين. (أعيد طبعه بإذن: Watson J، Gilman M، Witkowski J، Zoller M: Recombinant DNA. New York، W.H Freeman and Co.، 1992، p.530.)

الشكل 8. حذف 3-قاعدية الزوج في التليف الكيسي. تتضمن الطفرة حذف CTT في exon العاشر للجين. التسلسل الموجود على اليسار من شخص سليم والتسلسل على اليمين من مريض مصاب بالتليف الكيسي. ينتج عن هذا الحذف المكون من 3 أزواج أساسية فقدان الفينيل ألانين من البروتين. (أعيد طبعه بإذن: Watson J، Gilman M، Witkowski J، Zoller M: Recombinant DNA. New York، W.H Freeman and Co.، 1992، p.530.)

هناك مشكلة أخرى في الاختبارات الجينية الحالية وهي أن عمليات الحذف أو الإضافات الصغيرة جدًا في الحمض النووي المسؤولة عن المرض تظل صعبة للغاية لتحديدها. حتى عمليات الحذف الكبيرة التي تنطوي على تسلسل طويل من الحمض النووي قد يكون من الصعب أحيانًا اكتشافها. هذا لأن الكروموسومات غير الجنسية تأتي في أزواج ، لذلك حتى العيب الكبير في جين واحد قد يتم حجبه بواسطة جين عادي آخر. على الرغم من أن الجين الطبيعي يجب أن ينتج نطاق التهجين المتوقع على لطخة جنوبية ، ويجب أن يكون هذا النطاق أقل كثافة مما لو كان هناك جينان طبيعيان ، فإن التحليل الكمي بواسطة النشاف الجنوبي صعب ونسبي فقط في أحسن الأحوال. تساعد هذه المشكلات في تفسير السبب في أنه على الرغم من تحديد العديد من الجينات والطفرات على أنها مهمة في أمراض مختلفة وأن الاختبارات الجينية أصبحت شائعة ، حتى الآن ، فإن عددًا قليلاً نسبيًا من الاختبارات التشخيصية تشخص المرض بشكل لا لبس فيه.

مقاربات جديدة

إن تحديد طفرة معينة مسؤولة عن مرض معين يسهل الاختبار الجيني. ومع ذلك ، عندما لا تكون الطفرة المحددة معروفة ، فإن الاختبار المباشر غير ممكن. في هذه الحالة ، قد تكون التقنيات البديلة مثل تحليل الارتباط مفيدة. يمكن استخدام تحليل الارتباط في العائلات التي توجد فيها دائمًا تسلسلات محددة للحمض النووي (الواسمات) في الأفراد المصابين بالمرض ، ولكن ليس في الأشخاص غير المصابين بالمرض. [27] بالنسبة لبعض الأمراض ، داخل عائلة معينة ، تكون الواسمات دائمًا وراثية مع المرض ، على الرغم من أن التسلسل الدقيق لواسمات الحمض النووي قد يختلف بين أفراد الأسرة. تتمثل الصعوبات التي ينطوي عليها تحليل الارتباط في أن هناك حاجة إلى جيلين أو أكثر من أفراد الأسرة المتأثرين للدراسة ، ويجب تحديد العلامات لكل فرد على حدة. أيضًا ، عندما يكون للجين تأثير ضعيف على التعبير عن المرض ، يجب دراسة المزيد من العائلات لاستخلاص استنتاجات ذات مغزى. لذلك ، لا يمكن إجراء تحليل الارتباط في فرد واحد من أفراد الأسرة المتأثرين أو عندما يكون الأقارب غير متعاونين. تم استخدام تحليل الارتباط في العائلات لتشخيص الحثل العضلي الدوشيني ، والهيموفيليا ، والضمور العضلي النخاعي. [28-30] لسوء الحظ ، فإن العديد من الأمراض ، مثل الفصام والسمنة المفرطة ومرض السكري ، متعددة العوامل ولا يمكن فحصها حتى الآن ، حتى باستخدام تحليل الارتباط.

تم تطوير طريقتين جديدتين لفحص الجينوم بأكمله بدلاً من العلامات الفردية. يقارن تحليل الفرق التمثيلي الاختلافات بين جينومين ، بينما يحدد مسح عدم التطابق الجيني (GMS) التسلسلات المتطابقة بين عينتين. يستخدم تحليل الفرق التمثيلي تقنيات التهجين لانتقاء مناطق الحمض النووي التي تختلف عن بعضها البعض. [31] ومع ذلك ، تتطلب هذه الطريقة أن يتم تهجين كل جزء تقريبًا إلى جزء تكميلي من الحمض النووي ، يكون الجينوم البشري كبيرًا جدًا لدرجة أن تحليل الفرق التمثيلي قد يستغرق أسابيع. يقوم فحص عدم التطابق الجينومي بفحص الحمض النووي من الأقارب المتضررين من العائلات غير ذات الصلة لتحديد تسلسل الجينات المماثلة.[32] المفهوم الأساسي هو أن زوجًا واحدًا من الأقارب سيكون له العديد من المناطق المتشابهة في جينومهم ، ولكن من خلال فحص جينومات الأفراد المتضررين من عائلات غير مرتبطة ، يجب أن تكون هناك مناطق متطابقة باستمرار عبر العائلات. سيتم ربط هذه المناطق بجين المرض. تقدم هاتان الطريقتان وعدًا جديدًا في رسم الخرائط وتحديد الأمراض الوراثية.

مخاوف أخلاقية

تثير القدرة على فحص الاضطرابات الوراثية العديد من الأسئلة الأخلاقية ، بما في ذلك التأثير النفسي للفحص على المرضى ، وعواقب النتائج على مزايا التأمين الصحي والتوظيف ، وفي النهاية ، القرارات المتخذة التي تنتج عن المعلومات التي تم الحصول عليها عن طريق الفحص قبل الولادة. لمعالجة هذه القضايا الأخلاقية ، تم تخصيص 3 ٪ من ميزانية مشروع الجينوم البشري لاستكشاف وإعداد النتائج الاجتماعية والقانونية والأخلاقية لرسم خرائط الجينوم البشري. عندما يصبح الفحص بحثًا عن أمراض وراثية متعددة متاحًا ، ستكون هناك حاجة إلى قرارات صعبة فيما يتعلق بمن يجب اختباره وما إذا كان هؤلاء الأفراد يرغبون في الاختبار. يجب استخدام المعلومات المكتسبة من الفحص بعناية وفقط في السياق المناسب على الرغم من أن الاختبار الجزيئي قد يحدد وجود جين معيب ، إلا أن هذا لا يثبت حدوث المرض ، أو يعطي أي فكرة عن عمر ظهور المرض ، الدور الذي قد تلعبه البيئة ، أو شدة المرض في فرد معين. كل هذه القضايا لديها القدرة على التأثير على المجتمع من حيث البطالة والتعليم ومزايا التأمين وكيف ننظر إلى بعضنا البعض (أي ، كأفضل أو أدنى). قد يتأثر الجنين أيضًا ، مع نتائج الاختبارات الجينية قبل الولادة التي تؤثر على ما إذا كان انحراف جيني معين مقبولًا ، أو حتى رغبة الوالدين المحتملة في اختيار سمات معينة لنسلهم (من لون الشعر إلى الذكاء إلى الجنس). لذلك ، لا يزال من الضروري ، إلى جانب التقدم في فهمنا للجينوم البشري ، أن يستمر العمل في مجالات الأخلاق وعلم الاجتماع للمساعدة في استخدام المعلومات الجديدة الناتجة بأفضل طريقة ممكنة من أجل الصالح العام للبشرية.


مناقشة

في الوقت الحالي ، من الصعب اكتشاف SVs الكبيرة أو المعقدة من التسلسل وحده ، بل ويصعب تقدير أحجام SV ، نظرًا لقصر طول القراءة وحجم الإدخال المحدود بين أزواج القراءة. على وجه الخصوص ، تعتبر عمليات الإدراج الكبيرة صعبة بشكل خاص على طرق استدعاء SV القائمة على القراءة القصيرة للكشف عنها نظرًا لأن محاذاة القراءات الداعمة التي تحتوي على محتويات غير موجودة في المرجع أمر صعب ، كما أن تغطية القراءة يتم إسقاطها محليًا فقط حول موقع الإدراج. قد يؤدي وجود عناصر متكررة حول نقاط فاصل SV إلى صعوبة اكتشاف SV من قراءة التسلسل القصير. في المقابل ، باستخدام الخرائط الضوئية المستندة إلى القنوات النانوية ، يتم احتواء SVs كاملة بسهولة في خريطة بصرية واحدة ، مما يجعل اكتشاف SV مجديًا ودقيقًا للغاية. أظهرنا هنا أن OMSV هي أداة قوية لتحديد SVs كبيرة ، تتراوح من كيلو قاعدة إلى أكثر من مائة كيلو قاعدة. في الواقع ، طالما أنه يمكن محاذاة الخريطة الضوئية بشكل صحيح مع المرجع من خلال وجود مواقع التقاط كافية في الأجزاء المجاورة غير SV ، فكلما كانت SV أكبر ، كان من الأسهل على OMSV اكتشافها ، نظرًا لأن المسافة المقابلة تتغير بين مواقع الشد المحددة أقل احتمالًا بسبب أخطاء القياس والقياس وحدها. تجعل هذه الخاصية OMSV مكملاً مثالياً لمتصلين SV المعتمدين على التسلسل ، والذين يكونون أكثر دقة بشكل عام في اكتشاف SVs الأصغر.

يكتشف OMSV مناطق معقدة و SVs كبيرة جدًا باستخدام إستراتيجية محاذاة ثنائية الجولة تسمح بمحاذاة الخريطة الضوئية لمواقع متعددة على الجينوم. قد تأتي محاذاة الخرائط الضوئية المقسمة بتكلفة إضافية لوقت المحاذاة. تتمثل إحدى طرق معالجة هذه المشكلة أولاً في محاذاة الخرائط الضوئية بسرعة والتي يمكن مواءمتها مع مواضع جينومية مفردة باستخدام محاذاة قياسية ، ثم تطبيق استراتيجية المحاذاة الانقسام فقط على الخرائط الضوئية المتبقية غير المحاذاة.

نظرًا لأن وحدات استدعاء SV لا تتطلب سوى قائمة بمحاذاة الخرائط الضوئية كمدخلات ، يمكن تغيير طرق المحاذاة المستخدمة في خط أنابيب OMSV بمرونة إلى خيارات أخرى. بالإضافة إلى ذلك ، في حالة توفر مجموعة de novo عالية الجودة للخرائط البصرية ، يمكن أيضًا محاذاة الخرائط الضوئية أولاً مع التجميع ، ويمكن بعد ذلك الاستدلال على محاذاةها للمرجع من مواءمة التجميع مع المرجع. بالنسبة للخرائط الضوئية التي تنحرف بشكل كبير عن الخريطة المرجعية ، يمكن أن تكون استراتيجية المحاذاة المكونة من خطوتين أكثر دقة من محاذاة الخرائط الضوئية مباشرةً مع المرجع.

مع كل خريطة بصرية قادمة من جزيء DNA واحد ، يمكن توسيع OMSV لدراسة الأنماط الفردانية ، وتكوين نوع الخلية في عينة ، والتنوع من خلية إلى خلية. تتطلب هذه التحليلات محاذاة عالية الدقة للتسميات الفردية للخرائط البصرية. قد يؤدي فحص مواقع النتوء في إنزيم ثانٍ باستخدام قناة ألوان إضافية إلى تحسين دقة المحاذاة اللازمة لهذه التحليلات. مع هذه الدقة المحسنة ، نأمل أيضًا في توسيع OMSV لاستدعاء zygosity من SVs المعقدة.


التسلسلات المتكررة ، ومعظمها مشتق من عناصر قابلة للتبديل. يتم نشر هذه التسلسلات عن طريق إدخال نسخ جديدة من نفسها في مواقع عشوائية في الجينوم.

الوسم اللاجيني للموضع على أساس الأصل الأبوي ، والذي ينتج عنه تعبير جيني أحادي الموازي.

سائل فاصل للون عالي الكفائه

(HPLC). تقنية لفصل جزيئات الحمض النووي أو البروتين بالوزن الجزيئي والتشكيل. يتم حل الجزيئات من خلال الاختلافات في توزيعها بين الطور الثابت والمرحلة المتنقلة. يتم زيادة الدقة عن طريق زيادة ضغط النظام.

رحلان شعري عالي الأداء

(HPCE). فئة من تقنيات الفصل التي تستخدم الشعيرات الدموية ضيقة التجويف المصهور من السيليكا لفصل خليط معقد من المركبات الكيميائية. يتم فصل الجزيئات على أساس الاختلافات في الشحنة والحجم والبنية والجهد الكارثي للماء باستخدام مجالات كهربائية قوية.

يستلزم اختبار مثيلة الحمض النووي هذا تعديلًا أوليًا للحمض النووي بواسطة ثنائي كبريتيت الصوديوم ، وتحويل جميع السيتوزينات غير الميثيلية ، ولكن غير الميثيلية ، إلى اليوراسيل ، والتضخيم اللاحق باستخدام البادئات الخاصة بالحمض النووي الميثيل مقابل الحمض النووي غير الميثيل.

طريقة الرحلان الكهربائي للهلام والتي يتم فيها فصل البروتينات في العينة بنقاطها الكهربية المتساوية في بُعد واحد ، وبحجمها في بُعد ثانٍ عمودي.

مقايسة مثيلة كمية عالية الإنتاجية تستخدم تقنية PCR (TaqMan) القائمة على التألق في الوقت الحقيقي ولا تتطلب مزيدًا من التلاعب بعد خطوة PCR. يتم تنفيذ هذه التقنية بالاقتران مع معالجة بيسلفيت (حيث يتم تحويل بقايا السيتوزين غير الميثيل إلى اليوراسيل) ، ويتم تحقيق تمييز التسلسل من خلال تصميم البادئات لتتداخل مع المواقع المحتملة لمثيلات الحمض النووي (CpG dinucleotides).

طريقة تسلسل الحمض النووي التي ينبعث فيها الضوء كنتيجة لتفاعل إنزيمي ، في كل مرة يتم دمج نيوكليوتيد في سلسلة الحمض النووي المتنامية. كما هو مطبق في الكشف عن المثيلة ، فإن تباين تسلسل الحمض النووي المعتمد على المثيلة ، والذي يتم تحقيقه عن طريق معالجة ثنائي كبريتيت الصوديوم ، يتم التعامل معه كنوع من SNP من النوع C-T ، ويخضع لنوع SNP التقليدي.

تضخيم الحمض النووي باستخدام البادئات التعسفية. يتم تنفيذ دورات التضخيم الأولى عند درجة حرارة تلدين منخفضة ، بحيث يتم تهجين التمهيدي مع العديد من المتواليات غير المحددة. يتم بعد ذلك زيادة درجة الحرارة ، بحيث يتم تضخيم أفضل المنتجات فقط لأحداث التلدين الأولية ، مما ينتج عنه عدد من النطاقات المنفصلة التي توفر بصمة الجينوم.

تضخيم المواقع intermethylated

(الأهداف). تقنية بصمة ميثيل الحمض النووي التي تستخدم الميثيل المتماثل وتضخيم PCR التعسفي للحصول على العديد من النطاقات المجهولة ، والتي تمثل تسلسل الحمض النووي المحاط بموقعين ميثيل.

(رقاقة). العزل ، باستخدام أجسام مضادة محددة ، لشظايا الكروماتين المرتبطة بعامل نووي معين أو مرتبطة بتوقيع تعديل هيستون معين. يمكن بعد ذلك تحليل الحمض النووي المناعي باستخدام بادئات PCR محددة.

مزيج من الترسيب المناعي للكروماتين مع التهجين إلى المصفوفات الجينية الدقيقة التي تُستخدم لتحديد تسلسل الحمض النووي المرتبط بعامل نووي معين أو بملف تعريف تعديل هيستون محدد.

(الترسيب المناعي للحمض النووي الميثيلي). الترسيب المناعي مع الأجسام المضادة لـ 5-ميثيل سيتوزين متبوعًا بالتهجين إلى المصفوفات الدقيقة الجينومية ، مما يسمح بتحديد المتواليات الغنية بالميثيل- CpG.

المصفوفات الدقيقة التي تحتوي على مجموعة من قليل النوكليوتيدات المتداخلة أو غيرها من المجسات التي تمتد إما على الجينوم بأكمله أو ، لنهج أكثر تخصصًا ، منطقة فرعية ذات أهمية.

تقنية تحليلية تحدد الكتلة الجزيئية. يتضمن هذا مصدرًا أيونيًا يتم فيه إنتاج الأيونات الجزيئية في الطور الغازي من جزيئات التحليل ، ومحلل الكتلة الذي يتم فيه استخدام المجالات الكهربائية و / أو المغناطيسية لفصل أيونات التحليل حسب نسب الكتلة إلى الشحن المختلفة ، وكاشف لتسجيل الأيونات المفصولة.

الكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة بالرش الكهربائي

تقنية قياس الطيف الكتلي يتم فيها تأين الجزيئات داخل الهباء الجوي للقطرات الصغيرة. ثم يتم تحديد الجزيئات باستخدام المجالات الكهربائية والمغناطيسية.

نظام تحليلي يتم فيه استخدام مطيافين كتلي مرتبطين لقياس كميات صغيرة من المستقلبات. يتم فصل المواد التحليلية حسب كتلتها وشحنتها. من خلال برمجة الجهاز للاستجابة لكتل ​​معينة فقط ، يمكن تحقيق درجة عالية من الخصوصية والحساسية.

نمو خلوي من أصل غدي ، يمكن أن ينشأ من أعضاء تشمل القولون والغدة الكظرية والغدة النخامية والغدة الدرقية. هذه الزيادات حميدة ، ولكن من المعروف أن بعضها لديه القدرة ، بمرور الوقت ، على التحول إلى ورم خبيث (عند هذه النقطة تُعرف باسم سرطان غدي).

مخطط شجرة يمثل أوجه التشابه النسبية بين العينات المختلفة المقابلة للمرضى من البشر من حيث التنبؤ بالنتائج. العينات المتجمعة في نفس الفرع من مخطط الشجرة لها نفس العلامات النذير (على سبيل المثال ، العمر ، المرحلة ، عمليات حذف الكروموسومات أو المكاسب ، أو التعبير الجيني المحدد) ومن المحتمل أن يكون لها نفس النتيجة.


شاهد الفيديو: التكنولوجيا الجزيئية شرح لتهجين الحمض النووى وانزيمات القصرواستنساخ تتابعات DNA (كانون الثاني 2022).