معلومة

الوحدة 8: الثقافات النقية - تقنيات نقل التعقيم وألواح الخطوط للعزل - علم الأحياء


الوحدة 8: الثقافات النقية - تقنيات نقل التعقيم وألواح الخطوط للعزل

تقنيات التعقيم

1.- كن على دراية بمكان وجود البكتيريا ، وما هي العوامل البيئية التي تؤثر على نمو البكتيريا.

2.- فهم عملية وأهمية وضع العلامات واحتضان لوحات الآجار بشكل صحيح.

3.- تعلم ممارسات تقنيات التعقيم اللازمة لمنع انتقال التلوث

4.- التعرف على نمو البكتيريا على سطح صفيحة أجار ، ومرق المغذيات ، وميل أجار.

5.- استخدام تقديرات عدد المستعمرات للوصول إلى استنتاجات حول مقدار نمو البكتيريا.

6.- تحديد آثار غسل اليدين على كثرة البكتيريا. تحديد آثار تطهير مقاعد البدلاء على وفرة البكتيريا.

7.- تعريف: الثقافة النقية ، التلوث ، تقنيات التعقيم.

8.- معرفة خصائص وسط المرق ، والميل البكتيري ، وألواح الأجار.

9.- تحديد خطوات التحويل من المرق إلى المرق ، والميل إلى المائل ، والمرق إلى الطبق.

1.- (نقطة) اشرح المفاهيم التالية

ماذا تعني عبارة "البكتيريا في كل مكان"؟

2.- (1 نقطة) اذكر موقعين في المختبر حيث يمكن العثور على البكتيريا.

اذكر مكانين ، في المختبر ، حيث لا ينبغي أبدًا العثور على البكتيريا.

3.- (1 نقطة) الخطوة الأولى في التعامل مع أي نوع من الوسائط هي تسميتها بشكل صحيح قبل استخدامها.

لماذا يتم دائمًا تمييز لوحات الأجار في الأسفل؟

دائمًا ما يتم تحضين أطباق الأجار رأسًا على عقب. اشرح السبب.

4.- (1 نقطة) تعطى درجات حرارة الحضانة دائمًا بالدرجة المئوية. درجة حرارة الحضانة القياسية للبكتيريا المعزولة من العينات البشرية هي:

احتضان البكتيريا المعزولة من العينات البشرية في درجات حرارة منخفضة سوف يبطئ نموها. أعط درجة الحرارة التقريبية (بالدرجة المئوية) للحاضنات التالية:

حاضنة درجة حرارة الغرفة:

حاضنة درجة حرارة الثلاجة:


عزل الثقافة النقية بأساليب الصفيحة البلاستيكية | التخفيض التسلسلي | حل الخفض

هدف، تصويب: - لإجراء عزل الثقافة النقية باستخدام تقنية لوحة الصب.

1. كتاب عملي في علم الأحياء الدقيقة الصيدلاني للبروفيسور رجب ، ك.د. بافيسكار ، إن جي باتيل ، نشره S. Vikas And Company (الناشر الطبي) ، طبعة 2018 ، الصفحة رقم 61-63

2. كتاب علم الأحياء الدقيقة التجريبي (حسب منهج PCI) بقلم سافيتا ماندان ، أوميش لادا ، سانجاي سورانا ، نشرته Career Publication ، الطبعة الأولى ، الصفحة رقم 71-72

3. الأحياء الدقيقة الصيدلانية (حسب لائحة PCI) للبروفيسور Chandrakant Kokare ، تم النشر بواسطة Nirali Prakashan ، الطبعة الأولى ، الصفحة رقم 4.2 & # 8211 4.3

حضاره: - زراعة التربة المعزولة ، الإشريكية القولونية ، والمكورات العنقودية الذهبية.

جهاز: - دورق مخروطي ، أنابيب اختبار ، ألواح بتري ، حلقة سلك نيتشروم ، دورق ، رف أنبوب اختبار ، ماصات ، قلم تعليم زجاجي ، موقد بوسن.

المعدات: - الأوتوكلاف ، عداد مستعمرة مع عدسة مكبرة ، فرن هواء ساخن ، حاضنة ، ميزان ، مقياس درجة الحموضة ، حمام مائي.

المقدمة: - عادة ما تكون طريقة الصفيحة هي الطريقة المفضلة لحساب عدد البكتيريا المكونة للمستعمرات الموجودة في عينة سائلة. في هذه الطريقة ، يتم وضع كمية ثابتة من اللقاح (بشكل عام 1 مل) من مرق / عينة في وسط طبق بتري المعقم باستخدام ماصة معقمة. ثم يُسكب أجار مبرد مصهور (حوالي 15 مل) في طبق بتري الذي يحتوي على اللقاح ويخلط جيدًا. بعد تصلب الأجار ، يتم قلب اللوحة واحتضانها عند 37 & # 176 درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة.

مبدأ تقنية لوحة POUR: - في لوحة الصب ، يتم تخفيف الثقافة المختلطة مباشرة في أنابيب اختبار لوسط أجار سائل. يتم الحفاظ على الوسط في حالة سائلة عن طريق الحفاظ على الوسائط في درجة حرارة عالية للسماح بالتوزيع المناسب للقاح. ثم يتم تحضير الوسط في ألواح بتري ويترك ليتجمد. احتضان جميع الأطباق في ظل ظروف مناسبة لنمو الكائنات الحية الدقيقة. سلسلة من صفائح الآجار تظهر تناقص أعداد المستعمرات الناتجة عن تقنية التخفيف.

إجراءات تقنية لوحة POUR: -

1. خفف العينة البكتيرية بحيث يكون التركيز النهائي للبكتيريا في حدود 30-300 cfu / 0.1-1.0ml

2. تحضير وسط أجار المغذيات ونقل وسط 15 إلى 20 مل في كل أنبوب اختبار.

3. تعقيم جميع الأواني الزجاجية في فرن الهواء الساخن وتبرد إلى درجة حرارة 42 إلى 45 و # 176 درجة مئوية.

4. خذ ثلاثة أنابيب اختبار معقمة وثلاث لوحات بتري وقم بتمييزها باستخدام قلم تعليم زجاجي مثل A و B و C.

5. انقل قطعة واحدة من الزرع في أنبوب الاختبار الأول. امزج المزرعة برفق عن طريق لف الأنبوب بين راحة اليد.

6. انقل كمية واحدة من المزرعة من الأنبوب الأول A إلى الأنبوب الثاني B واخلط الأنبوب الأول الملقح.

7. انقل كمية واحدة من المزرعة من الثانية B إلى أنبوب الاختبار C الثالث واخلطها كما هو مذكور في الخطوة الأولى.

8. يتم سكب كل وسط السائل الملقح في ألواح بتري معقمة منفصلة. بعد أن يصلب الوسط ، ضع أطباق بتري في حاضنة على درجة حرارة 30 إلى 35 & # 176 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في وضع مقلوب.

الملاحظة والنتيجة: -

المستعمرات التي تظهر في لوحات بتري A ليست مميزة وصغيرة ومتداخلة مع بعضها البعض. في صفائح بتري B تكون المستعمرات كبيرة ومنفصلة ولا تختلط عمومًا مع مستعمرات أخرى. لوحظ في لوحات بتري C مستعمرات أكبر ومعزولة ذات شكل ولون وملمس وحجم وشكل مميز. من الصفيحة أ إلى ج يوجد تخفيف في اللقاح ويسمح فقط لعدد أقل من الكائنات الحية الدقيقة بالنمو في لوحات بتري ج. يتم تطوير المستعمرات على السطح وتحت السطح للوسيط.

مزايا طريقة لوحة POUR: -

1. تستخدم هذه الطريقة لحساب الخلايا القابلة للحياة.

2. يتم الحصول على مستعمرات منفصلة متميزة على وسط صلب.

عيوب طريقة لوحة POUR: -

1. تنتشر الكائنات الحية الدقيقة بشكل موحد في أجار سائل لذلك توجد الميكروبات أيضًا تحت السطح. ومن ثم تطورت المستعمرات السطحية وكذلك المستعمرات الفرعية ، ومن الصعب للغاية عزل وحساب المستعمرات تحت السطحية.

2. لا يمكن عزل الميكروبات الحساسة لدرجة الحرارة العالية عن طريق تقنية لوحة الصب لأن درجة حرارة الأجار يجب أن تكون عالية دائمًا للحفاظ على تناسق السائل. ومن ثم فإن طريقة صب اللوحة غير مناسبة لعزل الكائنات الحية الدقيقة المحبة للنفسية.

3. هذه الطريقة مملة وتستغرق وقتا طويلا وتتطلب مهارة.

4. البكتيريا الهوائية التي تحاصر داخل الأجار تفشل في البقاء على قيد الحياة بسبب نقص الأكسجين.

5. لكل تخفيف تحتاج إلى أنابيب منفصلة.

6. الحاجة إلى التحكم في درجة الحرارة المحددة ، وإلا فإن الوسائط الساخنة جدًا تقتل البكتيريا الموجودة في العينة.


"تقنيات التعقيم وعزل الثقافة النقية لتقرير معمل البكتيريا" مقالات وأوراق بحثية

افتراضية مختبر الوحدة 3 1. صِف بإيجاز الخطوات المطلوبة للنقل المعقم بكتيريا من مجهول إلى أنبوب مرق سائل. قد تضطر إلى البحث عن هذا باستخدام الزر & quotT & quot (أخبرني المزيد عن ذلك.) للنقل بطريقة معقمة بكتيريا من المجهول إلى أنبوب المرق السائل ، يجب عليك إشعال الحلقة أو السلك قبل البدء في تعقيمها. تقوم بعد ذلك بإزالة الأغطية من الأنابيب وإشعال أفواهها باللهب لمنع التلوث الذي ينتقل عن طريق الهواء. عندما يتم كل هذا ، يكون لديك.

بريميوم أسيد ، أنثوسيانين ، لون 709 كلمة | 3 صفحات

تقرير معمل Api 20 #

التاريخ: الأربعاء 16 نوفمبر 2011 هولي لوسون - أبيض العنوان: API 20E مقدمة: المبدأ العام للتجربة هو استخدام مجموعة من الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد المعوي بكتيريا. يتكون نظام الاختبار هذا من شريط يحتوي على 20 غرفة ، كل منها يتكون من أنبوب دقيق وقبيبة للسماح باختبار 20 اختبارًا مختلفًا في وقت واحد تقريبًا. المواد: حلقة التلقيح ، أنبوب اختبار يحتوي على 5 مل من محلول ملحي معقم ، زجاجة غسيل من الماء ، API بلاستيك.

حمض أميني ممتاز ، ماصة ، كاتالاز 544 كلمة | 3 صفحات

تعيين مختبر البكتيريا غير معروف

الغرض من المجهول بكتيريا مختبر كانت المهمة لتحديد غير معروف بكتيريا حضاره ومن خلال سلسلة من الاختبارات الأيضية ، حدد أي منها بكتيريا جنس أقام في نقي حضاره تم الاستلام. مرق مغذي محصن بالبكتيريا حضاره (مرقمة 45 ، يشار إليها من الآن فصاعدًا باسم U45) وتم عمل لوحة خطية لعزل a نقي حضاره للاستخدام طوال المهمة. من لوحة الخط ، تم عمل عدة شرائح لتحديد مورفولوجيا مجهول 45. صبغة جرام.

البكتيريا المتميزة ، الأيض ، التنفس الخلوي 1738 كلمة | 7 صفحات

الامتحان النهائي لعلم الأحياء الدقيقة مثال على تقرير البكتيريا غير المعروفة

علم الأحياء الدقيقة غير معروف مختبر أبلغ عن كاترينا بيتراكوفا مقدمة: الكائنات الدقيقة تسبب قدرًا كبيرًا من الأمراض. بالنسبة لمقدمي الرعاية الصحية ، من المهم جدًا أن يكونوا على دراية بالكائنات الحية المسببة للأمراض والتي تسبب المرض ، وبالتالي ، إيجاد العلاج المناسب. تتطلب الكائنات الحية الدقيقة المختلفة بيئات مختلفة من أجل التكاثر وتصبح خطرة على صحة الإنسان. جزء لا يتجزأ من أي علاج طبي هو أن تكون قادرًا على التعرف و.

البكتيريا سالبة الجرام الممتازة ، علم الأحياء الدقيقة ، تلطيخ 1749 كلمة | 7 صفحات

تقرير معمل

معمل تقرير تحديد غير معروف بكتيريا 03/10 / 05- 04/01/05 المؤلفون: ريتشارد هندريكس ، جيسيكا بريبيش NMU المستخلص: مرق حضاره تم اختيار رقم 16 عشوائياً من قبل مجموعتنا وخضع لاختبارات نوعية لتحديد التصنيف. ال حضاره بدت متجانسة طوال فترة الاختبار ويتم الإبقاء عليها حاليًا من قبل قسم علم الأحياء الدقيقة بجامعة شمال ميشيغان. نقترح ذلك حضاره 16 مثال على الإشريكية القولونية. خلفية: التقنيات كانت تستخدم.

المعوية الممتازة ، تلطيخ ، البكتيريا 1587 كلمة | 7 صفحات

تقرير معمل غير معروف

مجهول مختبر تقرير علم الأحياء الدقيقة غير معروف أ سونيا كابرا 26 نوفمبر 2014 مقدمة هناك العديد من الأسباب للتعرف على المجهول بكتيريا. بعض هذه الكائنات لها صفات مميزة تميزها عن بعضها البعض ، مثل التعرض لبيئات معينة. خلال الفصل الدراسي في المختبر ، نحن قادرون على مواجهة بعض الكائنات الحية الدقيقة القليلة التي اتصلنا بها نحن البشر. بالمعرفة المكتسبة من الجلسات في المختبر ، يمكننا الآن.

Pseudomonas aeruginosa الممتاز ، علم الأحياء الدقيقة ، متوسط ​​النمو 1022 كلمة | 4 صفحات

تقرير مختبر البكتيريا غير معروف

غير معروف بكتيريا # 22 الغرض كان الغرض من هذه التجربة هو العثور على هوية اثنين غير معروفة بكتيريا في أنبوب الاختبار المحدد. المواد • الحلقة البكتيرية • موقد بنسن • طبق بتري مع أجار • كريستال بنفسجي • غرام اليود • 95٪ إيثانول • سافرين • شرائح زجاجية • مجهر • غير معروف بكتيريا في إجراء أنبوب الاختبار في اليوم الأول ، تم رسم لوحة واحدة نوعيا وتركها في.

قسط 629 كلمة | 3 صفحات

تقرير مختبر البكتيريا غير معروف

هذه أبلغ عن بالتفصيل كيف تم تنفيذ مشروع مماثل من أجل تحديد اثنين من الميكروبات غير المعروفة باستخدام التقنيات التي تم تعلمها خلال الفصل الدراسي. شرعنا في المشروع بمعرفة أنه سيتعين علينا تحديد جرام (+) بالإضافة إلى جرام (-) من الأنواع التي تم تقديمها وبدأت التجربة على النحو التالي. الطرق صفيحتا الخط مصنوعتان من خليط مجهول بكتيريا أظهر اثنين من أشكال مستعمرة مختلفة. مستعمرات بكتيريا كان.

البكتيريا المتميزة ، الإشريكية القولونية ، العصوية 559 كلمة | 3 صفحات

تقنية العقيم

العقيم تقنية يقوم على الضمير الجراحي ، وهو الدافع الأخلاقي والمهني الذي ينظم السلوك المهني فيما يتعلق بنقل المرض. (أكمل) لا بد أن يصاب جميع المرضى بالعدوى. يمكن لبعض المواقف أن تزيد من الضعف ، مثل اضطراب دفاعات الجسم مثل التناقضات مع التخدير أو الحروق الشديدة أو اضطراب المناعة. الفرق الرئيسي بين غرفة العمليات والبيئات السريرية الأخرى هو أن منطقة العمليات عالية.

التعقيم الممتاز ، الدعك ، تقنية التعقيم 578 كلمة | 3 صفحات

بكتيريا

مختبر 11 منهجية باستخدام العقيممثقف قليلا بكتيريا تم تلقيحها على أجار TSA. كان هناك خط رباعي. تم تسخين حلقة التلقيح وإبقائها باردة لفترة من الوقت قبل الخط التربيعي التالي. لوحظت ستة أطباق أجار لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة 30 درجة مئوية. اختر واحدة من المستعمرة الكثيفة وقم بعملحضاره على لوحة أجار الجديدة. تكررت الخطوة للحصول على مستعمرة واحدة ، وهي نقي مستعمرة. أ) المصادرة بكتيريا من منهجية أعضاء الأسماك.


مرق إلى مرق أو مرق لنقل طبق

1. ضع ملصقًا على الحاوية المقصودة للمزرعة (مرق معقم غير مُلقح في أنبوب أو وسط صلب في طبق).

2. عقد الحلقة الخاصة بك مثل قلم رصاص ، أدخل الحلقة في اللهب كما هو موضح في الشكل 1. يجب أن يكون اتجاه سلك الحلقة في اللهب على

بزاوية 30 درجة للحرق المناسب. احتفظ بالسلك في اللهب حتى يصبح شديد السخونة ، ثم حرك الجزء المجاور غير السلكي من الحلقة برفق عبر اللهب. سيصبح السلك الآن معقمًا ، وسيحتوي الجزء غير السلكي على أي غبار محترق قد يكون قد سقط في الوسائط أثناء إجراء النقل. اسمح للحلقة أن تبرد لبضع ثوان في الهواء قبل أن تلمسها بثقافتك أو وسيطك.


الشكل 1: الاشتعال المناسب للحلقة. لاحظ كيف يتم تثبيت مقبض الحلقة بواسطة الإبهام فقط وإصبعين الأولين ويتم إدخال الحلقة في الجزء الأكثر سخونة من اللهب.

3. التقط أنبوب زراعة حساء المانح بيدك الأخرى ، مع الاستمرار في الإمساك بالحلقة المعقمة. باستخدام اليد التي تمسك الحلقة ، استخدم إصبعك الصغير على راحة يدك لإزالة الغطاء أو السدادة من أنبوب الثقافة كما هو موضح في الشكل 2. لا تضع الغطاء أو تسد مقعدك. إذا كان الأنبوب زجاجيًا ، فقم بتمرير شفة الأنبوب برفق عبر موقد بنسن لحرق أي غبار ملتصق ولإنشاء فارق في درجة الحرارة يمنع الغبار من السقوط في الأنبوب. الآن ، أدخل الحلقة في المرق دون لمس جوانب الأنبوب ، ثم قم بإزالتها ، حاملاً مجموعة من الثقافة. قم بتمرير الجزء العلوي من أنبوب الثقافة من خلال اللهب ، واستبدل غطاء الأنبوب أو السدادة ، وأعد الأنبوب إلى الرف.

الشكل 2: نقل ثقافة. (أ) إزالة غطاء الأنبوب أثناء معالجة حلقة (ب) الحصول على لقاح من أنبوب مرق مع الحفاظ على عقم الغطاء (لاحظ الغطاء في اليد).

4. التقط الأنبوب أو اللوح الوجهة المعقم المسمى. قم بإزالة الغطاء ، (إذا كان أنبوبًا زجاجيًا ، فمرر شفة الأنبوب عبر اللهب) ،
5. أدخل الحلقة التي تحتوي على المزرعة في الأنبوب المقصود من المرق المعقم ، وقم بتدويرها برفق ثم قم بإزالتها. إذا كانت الوجهة عبارة عن لوحة من وسط صلب ، فاتبع الإرشادات الخاصة بالخطوط للعزل أو لوحة الانتشار الموجودة في قسم البروتوكولات في الويكي.
6. أعد تركيب الغطاء واضبط أنبوب المرق الذي تم تلقيحه حديثًا في الرف.
7. أعد تعقيم الحلقة قبل وضعها لأسفل عن طريق إدخال الحلقة في اللهب بطيء جدا! يؤدي القيام بذلك ببطء إلى السماح لأي سائل متبقي في الحلقة بالتبخر بدلاً من الغليان وتجنب تناثر الخلايا البكتيرية الحية في جميع أنحاء المقعد وأنت.


عزل الثقافة النقية

لا توجد الكائنات الحية الدقيقة في الطبيعة أبدًا في التجمعات النقية. توجد أنواع مختلفة من الكائنات الحية الدقيقة المختلطة عادة في التربة والماء والغذاء والهواء وأجزاء مختلفة من جسم الإنسان أو الحيوان. لدراسة الدور الذي تلعبه كائنات دقيقة معينة في هذه البيئات ، من الضروري عزل الكائنات الحية الدقيقة في الثقافة النقية.

الثقافة المختلطة: - تحتوي الثقافة على أكثر من نوع واحد من الميكروبات.

ثقافه نقية: - (مزرعة معملية تحتوي على نوع واحد من الكائنات الحية). عادة ما يتم اشتقاق الثقافة النقية من ثقافة مختلطة عن طريق نقل العينة إلى وسط نمو جديد ومعقم بطريقة تفرق الخلايا الفردية عبر السطح المتوسط ​​أو عن طريق ترقق العينة عدة مرات قبل تلقيح الوسيط الجديد.

من المهم للغاية الحفاظ على ثقافات نقية منعزلة لفترات طويلة في حالة قابلة للحياة.

تقنيات الثقافة النقية: - . يُطلق على عزل نوع واحد من الكائنات الحية الدقيقة من خليط من نوع مختلف كثيرًا تقنية الاستزراع النقي.

تُستخدم الطرق التالية لعزل الثقافة النقية.

طريقة لوحة STREAK: - طريقة لوحة الخطوط هي الطريقة الأكثر استخدامًا لعزل الثقافات. مبدأ هذه الطريقة هو أنه ، من خلال وضع خط ، يتم إنشاء تدرج مخفف عبر وجه صفيحة بتري حيث تترسب الخلايا البكتيرية على سطح أجار.

يتم تحضير ألواح الخط عن طريق وضع كمية صغيرة من الثقافة المختلطة على السطح عند الوسط الصلب في صفيحة بتري مع حلقة سلك من البلاتين أو النيتشروم. العينة مخططة بطريقة توفر تخفيفًا متتاليًا. الغرض من الخطوط هو تخفيف اللقاح (الثقافة البادئة) على التوالي حتى تنفصل الميكروبات.

يمكن أيضًا أن يتم خط الخطوات الثانية من نفس الحلقة / الإبرة دون إعادة التوطين. في بداية الخط ، تكون الميكروبات مزدحمة وتتطور المستعمرات عن كثب ، ولكن مع استمرار الخط ، يتم فصل الخلايا حيث تحتوي الإبرة على عدد أقل من الخلايا. ومن ثم ، في الخط الأخير ، تم تطوير عدد قليل من المستعمرات ومنفصلة بشكل واضح. نقل المستعمرات المعزولة جيدًا من لوحة الخط إلى لوحة جديدة أخرى للعزل والتنقية (الزراعة الفرعية).

طرق لوحة POUR: - المبدأ الرئيسي لهذه الطريقة هو تخفيف اللقاح في أنابيب متتالية تحتوي على وسط أجار مسال للسماح بتوزيع شامل للخلايا البكتيرية داخل الوسط.

تقنية التخفيف الحلقي: -

في هذه الطريقة ، يتم تخفيف الثقافة المختلطة للبكتيريا مباشرة في أنابيب من وسط أجار سائل (مبرد) ويخلط جيدًا. يتم الحفاظ على الوسط في حالة سائلة عند درجة حرارة 45 & # 176 درجة مئوية للسماح بتوزيع دقيق للقاحات. في هذه الطريقة يتم وضع كمية ثابتة من اللقاح (بشكل عام 1 مل) من العينة في وسط طبق بتري المعقم باستخدام ماصة معقمة. يُسكب محتوى كل أنبوب في ألواح بتري منفصلة ثم يُترك ليتجمد. يتم تحضين هذه الصفائح بعد ذلك لتطوير مستعمرات بكتيرية في كل من وسط أجار (مستعمرات تحت السطح) وفي الوسط (مستعمرات سطحية). سلسلة من صفائح الآجار تظهر تناقص عدد المستعمرات الناتجة عن تقنية التخفيف الحلقي.

تقنية التخفيف التسلسلي: -

في هذه الطريقة ، يمكن تخفيف اللقاح الأصلي باستخدام الماء المعقم أو محلول ملحي (باستخدام ماصة) بحيث يصبح تركيز الميكروبات تدريجيًا أقل.

يمكن عزل الكائن الدقيق السائد في مزرعة مختلطة في شكل نقي عن طريق سلسلة من التخفيفات.

الهدف من هذا التخفيف هو تلقيح سلسلة من الأنابيب بمعلق جرثومي مخفف لدرجة أن هناك بعض الأنابيب تظهر نمو ميكروب فردي واحد فقط.

على سبيل المثال مزرعة تحتوي على 10 مل من الوسط السائل تحتوي على 1000 كائن حي دقيق. أي 100 كائن دقيق / مل من الوسط السائل. يتم إخراج 1 مل من هذا الوسط وخلطه مع 9 مل من وسط سائل معقم طازج ثم يحتوي الوسط الناتج على 100 كائن حي دقيق في 10 مل أو 10 / مل. يضاف 1 مل إضافي من هذا المعلق إلى 9 مل أخرى من وسط سائل معقم طازج ، كل مل يحتوي الآن على كائن حي دقيق واحد. إذا أظهر هذا الأنبوب أي نمو جرثومي ، فهناك احتمال كبير جدًا أن يكون هذا النمو ناتجًا عن إدخال كائن حي دقيق واحد في الوسط ويمثل الثقافة النقية لذلك الكائن الدقيق.

عيوب تقنيات لوحة POUR:

الكائنات الحية الدقيقة محاصرة تحت سطح الوسط عندما تصلب. ومن ثم ، يتم تطوير مستعمرات سطحية وتحت السطحية ، ومن الصعب للغاية عزل وحساب المستعمرات تحت السطحية.

هذه الطريقة مملة وتستغرق وقتا طويلا وتتطلب مهارة.

تتعرض الكائنات الدقيقة لصدمة حرارية بسبب الحفاظ على الوسط السائل عند درجة حرارة 45 و 176 درجة مئوية.

طريقة لوحة الانتشار: - يتضمن مبدأ هذه الطريقة استخدام رشاش معقم بسطح أملس مصنوع من المعدن أو الزجاج لتطبيق كمية صغيرة من البكتيريا المعلقة في محلول فوق صفيحة يجب أن تكون جافة وفي درجة حرارة الغرفة حتى يتمكن الأجار من امتصاص البكتيريا. أكثر سهولة.

في تقنية لوحة الانتشار ، لا يتم تخفيف الثقافة المختلطة في وسط الاستزراع. يتم تخفيفه في سلسلة من الأنابيب التي تحتوي على ماء معقم أو محلول ملحي.

تتم إزالة عينة من كل أنبوب تخفيف (0.1 مل) وتوضع على سطح صفيحة أجار. تنتشر الثقافة باستخدام رشاش زجاجي على سطح صفيحة أجار.

يتم تحضين الأطباق ويتم ملاحظة المستعمرات المعزولة بعد 24 ساعة ويتم العد

مزايا طريقة لوح الانتشار :

Ø في هذه الطريقة ، تتشكل المستعمرات السطحية فقط.

Ø تستخدم هذه الطريقة أيضًا في حساب الكائنات الحية الدقيقة الموجودة في اللقاح.

Ø لا تتعرض الكائنات الدقيقة لدرجات حرارة أعلى.

طريقة الميكرومانيبولاتور: المعالج الدقيق هو جهاز يستخدم للتفاعل الجسدي مع عينة تحت المجهر. قد تتكون عادةً من عصا تحكم إدخال ، وهي آلية لتقليل نطاق الحركة وقسم إخراج بوسائل الاحتفاظ بأداة صغيرة لعقد الكائن أو حقنه أو قصه أو معالجته بأي طريقة أخرى كما هو مطلوب. عادة ما تستخدم Micromanipulators بالاقتران مع المجهر

Micromanipulator عبارة عن أجهزة يمكنها التقاط خلية جرثومية واحدة من مستعمرة مختلطة الثقافة. يتم استخدام Micromanipulators مع المجاهر لالتقاط خلية بكتيرية واحدة من مستحضرات قطرة معلقة. يتم امتصاص الخلية الميكروبية المفردة برفق في الماصة الدقيقة ونقلها إلى قطرة كبيرة من وسط معقم على زلة غطاء أخرى. طريقة المعالجة الدقيقة تجعل المرء متأكدًا بشكل معقول من الثقافة النقية القادمة من خلية واحدة. ومع ذلك ، يجب استخدام الجهاز بمهارة ودقة

طريقة لفة الأنبوب: - تُستخدم طريقة الأنبوب الملفوف لعزل اللاهوائيات الصارمة.

يتم استخدام أنبوب الثقافة اللاهوائية المنسدلة للعزل والذي تم تغطيته بوسط أجار مختزل مسبقًا يحتوي على نيتروجين خالٍ من الأكسجين.

عند إزالة السدادة ، يتم الاحتفاظ بالأنبوب اللاهوائي عن طريق شطفه باستمرار باستخدام ثاني أكسيد الكربون الخالي من الأكسجين من قنية الغاز ، ويتم تلقيح حلقة نقل مثبتة على سطح أجار حيث يتم تدوير الأنبوب بواسطة محرك يبدأ التلقيح من الأسفل ويسحب الحلقة بالتدريج

تحضير تخفيف بعشرة أضعاف وإضافة 0.1 مل من المزرعة المخففة إلى الأجار المنصهر المبرد إلى 50 درجة مئوية و 176 درجة مئوية مصبوبة في أنبوب الاختبار. الآن قم بإمالة الأنبوب ولفه بحيث يتم تشكيل هذا الوسيط كغشاء رقيق حول جدار الأنبوب. احتضن وعد عدد المستعمرات في اليوم التالي


العمل العملي للتعلم

ملاحظات تستند إلى المعلومات الواردة في "علم الأحياء الدقيقة العملي الأساسي" © Society for General Microbiology.

الرجوع إلى تقنيات التعقيم قبل البدء في هذا أو أي عمل عملي آخر في علم الأحياء الدقيقة.

يمكنك صنع ألواح من البكتيريا أو الخمائر. تتضمن لوحة الخط التخفيف التدريجي لقاح من البكتيريا أو الخميرة على سطح وسط أجار صلب في طبق بتري. والنتيجة هي أن بعض المستعمرات الموجودة على الصفيحة تنمو منفصلة جيدًا عن بعضها البعض. الهدف من الإجراء هو الحصول على مستعمرات نقية وحيدة معزولة. إذا كان هناك أكثر من شكل أو لون واحد للمستعمرة على خطوط الخط واضحًا ، فهذا يشير إلى أن الثقافة تحتوي على أكثر من نوع أو نوع واحد من البكتيريا أو الخميرة. هذه الطريقة هي أبسط الطرق المختلفة لإعداد لوحة الخط. ارى ملاحظة 1 للبدائل.

تُستخدم هذه التقنية للتحقق من نقاء الثقافات التي يتم الحفاظ عليها لفترة طويلة من الزمن - سيُظهر أخذ العينات والتقطيع المنتظم أي تلوث بواسطة الميكروبات الأخرى. يتم استخدامه أيضًا من قبل الممارسين الخبراء لبدء ثقافات جديدة يتم الحفاظ عليها عن طريق انتقاء مستعمرة معزولة مناسبة لأنواع محددة ذات حلقة معقمة وتنمو الخلايا في مرق مغذٍ معقم.

الصحة و أمبير السلامة والملاحظات الفنية

1 طريقتان أخريان عند عمل لوحة الخط هما:

أنا لرفع الغطاء عموديًا (أي لا يزال أعلى القاعدة مباشرة) أقل كمية تسمح بالوصول إلى الحلقة

ثانيا لوضع الغطاء على سطح العمل ، ارفع القاعدة ، اقلبها وقم بتلقيح سطح أجار المواجه لأعلى. هذه هي الطريقة التي يستخدمها علماء الأحياء المجهرية المحترفون ، وأفضل ما يكون مخصصًا للطلاب الأكبر سنًا الذين يعملون في معمل خالٍ من الغبار والرياح نسبيًا.

2 يمكنك تصوير وقطع رسم بسيط للمكان الذي يجب أن تكون فيه الخطوط وتثبيته مؤقتًا على لوحة أجار كقالب - مما يسهل وضع الخطوط في المكان المناسب.

إجراء

أ قم بفك غطاء الزجاجة التي تحتوي على اللقاح.

ب امسك حلقة التلقيح في يدك اليمنى.

ج أشعل الحلقة واتركها تبرد.

د ارفع الزجاجة / أنبوب الاختبار الذي يحتوي على اللقاح بيدك اليسرى.

ه قم بإزالة الغطاء / سدادة الصوف القطني للزجاجة / أنبوب الاختبار بإصبع يدك اليمنى.

F شعلة عنق الزجاجة / أنبوب الاختبار.

ز أدخل الحلقة في مرق الثقافة واسحبها. في جميع الأوقات ، امسك الحلقة بأكبر قدر ممكن.

ح اشعل عنق الزجاجة / أنبوب الاختبار مرة أخرى.

أنا استبدل الغطاء / سدادة الصوف القطني للزجاجة / أنبوب الاختبار باستخدام الإصبع الصغير من يدك اليمنى. ضع الزجاجة / أنبوب الاختبار على المنضدة (أو في رف).

ي ارفع غطاء طبق بتري الذي يحتوي على الوسط الصلب جزئيًا.

ك امسك الحلقة المشحونة بالتوازي مع سطح الأجار. تشويه اللقاح للخلف وللأمام عبر منطقة صغيرة من الوسط (انظر المنطقة المخططة "أ" في الصورة).

ل أزل الحلقة وأغلق طبق بتري.

م أشعل الحلقة مرة أخرى واتركها تبرد.

ن اقلب الطبق 90 درجة عكس اتجاه عقارب الساعة.

ا باستخدام الحلقة المبردة ، خط اللوحة من المنطقة "أ" عبر سطح الأجار في ثلاثة أو أربعة خطوط متوازية (المنطقة "ب"). تأكد من ترحيل كمية صغيرة من الثقافة.

ص أزل الحلقة وأغلق طبق بتري.

ف أشعل الحلقة مرة أخرى واتركها تبرد. اقلب الطبق بمقدار 90 درجة عكس اتجاه عقارب الساعة مرة أخرى وخط من "ب" عبر سطح الأجار في ثلاثة أو أربعة خطوط متوازية (المنطقة "ج").

ص أزل الحلقة وأغلق طبق بتري.

س أشعل الحلقة مرة أخرى واتركها لتبرد. اقلب الطبق بزاوية 90 درجة عكس اتجاه عقارب الساعة وقم بخط الحلقة عبر سطح الأجار من "C" إلى وسط اللوحة "D".

ر أزل الحلقة وأغلق طبق بتري. شعلة الحلقة مرة أخرى.

ش أغلق الصفيحة وقم باحتضانها في وضع مقلوب.

روابط انترنت

موارد معلم الأحياء الدقيقة
جمعية علم الأحياء الدقيقة العام - مصدر علم الأحياء الدقيقة العملي الأساسي ، وهو دليل ممتاز للتقنيات المعملية وعلم الأحياء الدقيقة العملي للمدارس الثانوية ، ومجموعة مختارة من التطبيقات العملية المجربة والمختبرة باستخدام الكائنات الحية الدقيقة.

علم الأحياء الدقيقة على الإنترنت
يتم دعم MiSAC (اللجنة الاستشارية لعلم الأحياء الدقيقة في المدارس) من قبل جمعية علم الأحياء الدقيقة العامة (انظر أعلاه) وتتضمن مواقع الويب الخاصة بهم مزيدًا من معلومات السلامة ورابطًا لطلب النصيحة عبر البريد الإلكتروني.

(تم الوصول إلى المواقع الإلكترونية في أكتوبر 2011)

© 2019 ، الجمعية الملكية لعلم الأحياء ، 1 شارع ناوروجي ، لندن WC1X 0GB جمعية خيرية مسجلة رقم 277981 ، تأسست بموجب الميثاق الملكي


كيف تتم طريقة لوحة الخط؟

  1. يجب تعقيم حلقة التلقيح في موقد بنسن بمجرد وضع الحلقة في اللهب. انتظر حتى تتحول الحلقة إلى اللون الأحمر مشيرًا إلى أنها ساخنة بالفعل. دعها تبرد لبضع دقائق.
  2. باستخدام حلقة التلقيح ، اختر مستعمرة معزولة من لوحة أجار وانتشر على الربع الأول من لوحة بتري. (4, 5)
  3. خط حلقة التلقيح برفق باستخدام حركة ذهابًا وإيابًا.
  4. ضع الحلقة في اللهب واتركها تبرد. قم بتمديد الخطوط إلى الربع الثاني من لوحة بتري.
  5. كرر الخطوة الرابعة وهذه المرة مد الخط إلى الربع الثالث من لوحة بتري.
  6. كرر الخطوة الرابعة وعد إلى المنطقة التي رسمتها في الربع الثالث من لوحة بتري وهذه المرة مد الخط إلى الربع الرابع من لوحة بتري.
  7. شعلة الحلقة. (8 و 9 و 10)

تفسير النتائج

يجب تحضين اللوحة المخططة لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. افحص بعناية المستعمرات المزروعة على طبق بتري. النتيجة المتوقعة هي أن جميع المستعمرات يجب أن يكون لها نفس المظهر العام.

إذا لاحظت أن هناك أكثر من نوع واحد من المستعمرات ، فعليك البدء في رسم الخطوط مرة أخرى ولكن هذه المرة على لوحة منفصلة للحصول على ثقافة نقية. (4 و 5 و 6)


شاهد الفيديو: عملي# التعقيم ميكروبيولوجي عامة - هاشم (كانون الثاني 2022).