معلومة

الوحدة 25: الفحص البكتيري للأغذية - عدد الأطباق القياسي - علم الأحياء


الوحدة 25: الفحص البكتيري للأغذية - عدد الأطباق القياسية

الفصل 3: عدد الصفائح الهوائية

للحصول على معلومات إضافية ، اتصل Guodong Zhang.

يهدف عدد الألواح الهوائية (APC) إلى الإشارة إلى مستوى الكائنات الحية الدقيقة في المنتج. تم تطوير الإجراءات التفصيلية لتحديد APC للأغذية من قبل رابطة الكيميائيين التحليليين الرسميين (AOAC) (3) والجمعية الأمريكية للصحة العامة (APHA) (1). تتطابق طريقة عد الألواح التقليدية لفحص الأطعمة المجمدة أو المبردة أو المطبوخة مسبقًا أو الجاهزة ، الموضحة أدناه ، مع AOAC طرق التحليل الرسمية، ثانية. 966.23 ، مع تغيير إجرائي واحد (966.23C). نطاق عد مستعمرة مناسب (10) هو 25-250. طريقة العد الآلي للصفائح اللولبية لفحص الأطعمة ومستحضرات التجميل (5) ، الموضحة أدناه ، تتوافق مع AOAC طرق التحليل الرسمية، ثانية. 977.27. للحصول على تفاصيل إجرائية لعدد اللوحات القياسي ، انظر المرجع. 2 - تم تغيير المبادئ التوجيهية لحساب أعداد اللوحات والإبلاغ عنها لتتوافق مع التغييرات المتوقعة في الإصدار السادس عشر من الطرق القياسية لفحص منتجات الألبان (2) و الاتحاد الدولي لمنتجات الألبان إجراءات (جيش الدفاع الإسرائيلي) (6).

طريقة عد اللوحة التقليدية

  1. المعدات والمواد
    1. منطقة عمل ، طاولة مستوية مع سطح واسع في الغرفة نظيف ومضاء جيدًا (شمعة 100 قدم على سطح العمل) وجيدة التهوية وخالية بشكل معقول من الغبار والمسودات. يجب ألا تتجاوز الكثافة الميكروبية للهواء في منطقة العمل ، المقاسة في الصفائح المتساقطة المتساقطة أثناء الطلاء ، 15 مستعمرة / لوحة خلال 15 دقيقة من التعرض.
    2. مساحة تخزين خالية من الغبار والحشرات وكافية لحماية المعدات والمستلزمات
    3. أطباق بتري أو زجاجية أو بلاستيكية (15 × 90 مم على الأقل)
    4. الماصات المزودة بمساعدات الماصات (بدون ماصات الفم) أو الماصات ، 1 و 5 و 10 مل ، متدرجة في وحدات 0.1 مل
    5. زجاجات التخفيف ، 6 أونصات (160 مل) ، زجاج مقاوم للبوروسيليكات ، مع سدادات مطاطية أو أغطية بلاستيكية لولبية
    6. حاويات أطباق الماصات والبتري ، مناسبة للحماية
    7. حمام مائي دائري ، لأجار التقسية ، يتم التحكم فيه حرارياً حتى 45 ± 1 درجة مئوية
    8. حاضنة ، حليب 35 ± 1 درجة مئوية ، 32 ± 1 درجة مئوية
    9. عداد مستعمرات ، حقل مظلم ، كيبيك ، أو ما يعادله ، بمصدر ضوء مناسب ولوحة شبكية
    10. سجل تالي
    11. الفراغات المخففة ، 90 ± 1 مل من الحليب المخفف بالفوسفات (R11) من Butterfield ، 99 ± 2 مل
    12. أجار عدد الصفائح (الطرق القياسية) (M124)
    13. الثلاجة ، لتبريد العينات والحفاظ عليها في درجة حرارة 0-5 درجة مئوية ، 0-4.4 درجة مئوية
    14. المجمد للحفاظ على العينات المجمدة من -15 إلى -20 درجة مئوية
    15. موازين الحرارة (الزئبق) دقة النطاق المناسبة التي تم فحصها باستخدام مقياس حرارة معتمد من المعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا (NIST)

    باستخدام أنابيب معقمة منفصلة ، قم بإعداد التخفيفات العشرية من 10 -2 ، 10 -3 ، 10 -4 ، وغيرها حسب الاقتضاء ، من تجانس الطعام (ارى الفصل 1 لتحضير العينة) بنقل 10 مل من التخفيف السابق إلى 90 مل من المادة المخففة. تجنب أخذ العينات من الرغوة. هز جميع التخفيفات 25 مرة في 30 سم (1 قدم) قوس في غضون 7 ثوان. الماصة 1 مل من كل تخفيف في أطباق بتري منفصلة ومكررة ومحددة بشكل مناسب. قم بإعادة رج زجاجة التخفيف 25 مرة في 30 سم قوس خلال 7 ثوان إذا بقيت لأكثر من 3 دقائق قبل أن يتم تنقيطها في طبق بتري. أضف 12-15 مل من أجار عدد الألواح (مبرد إلى 45 ± 1 درجة مئوية) لكل لوحة خلال 15 دقيقة من التخفيف الأصلي. بالنسبة لعينات الحليب ، اسكب عنصر تحكم أجار ، واسكب أداة التحكم في الماء المخفف وماء الماصة للتحكم في الماصة. أضف أجار إلى الأخيرين لكل سلسلة من العينات. أضف أجار على الفور إلى أطباق بتري عندما تحتوي العينة المخففة على مواد استرطابية ، مثل الدقيق والنشا. صب أجار وألواح التحكم في الماء المخفف لكل سلسلة من العينات. قم على الفور بخلط تخفيف العينة ووسط الأجار جيدًا وبشكل موحد عن طريق الدوران البديل والحركة ذهابًا وإيابًا للألواح على سطح مستوٍ. دع أجار يصلب. قلب أطباق بتري الصلبة واحتضانها على الفور لمدة 48 ± 2 ساعة عند 35 درجة مئوية. لا تكدس الألواح عند صب الأجار أو عندما يتجمد الأجار.

    طرق التحليل الرسمية (3) لا يوفر إرشادات للعد والإبلاغ عن عدد اللوحات ، بينما الطرق القياسية للامتحان منتجات الألبان، الطبعة السادسة عشر. (2) يقدم إرشادات مفصلة للتوحيد ، لذلك استخدم إرشادات APHA بصيغتها المعدلة (6،8). قم بالإبلاغ عن جميع أعداد الألواح الهوائية (2) المحسوبة من الألواح المكررة. بالنسبة لعينات الحليب ، قم بالإبلاغ عن جميع تعداد الألواح الهوائية (2) المحسوبة من لوحات مكررة تحتوي على أقل من 25 مستعمرة على أنها أقل من 25 عددًا مقدرًا. قم بالإبلاغ عن جميع تعداد الألواح الهوائية (2) المحسوبة من لوحات مكررة تحتوي على أكثر من 250 مستعمرة كأعداد مقدرة. قد تعطي الأعداد خارج النطاق الطبيعي 25-250 مؤشرات خاطئة للتكوين البكتيري الفعلي للعينة. قد تؤدي عوامل التخفيف إلى المبالغة في التعداد المنخفض (أقل من 25) ، وقد يصعب حساب عدد الأطباق المزدحمة (أكبر من 250) أو قد تمنع نمو بعض البكتيريا ، مما يؤدي إلى انخفاض العدد. يحسب التقرير أقل من 25 أو أكثر من 250 مستعمرة حسب عدد الألواح الهوائية المقدرة (EAPC). استخدم الدليل التالي:

    1. لوحات عادية (25-250). حدد لوحة (ألواح) خالية من الموزعات. عد جميع وحدات تشكيل المستعمرات (CFU) ، بما في ذلك تلك ذات الحجم الدقيق ، على اللوحة (اللوحات) المحددة. سجل التخفيف (ق) المستخدم والعدد الإجمالي للمستعمرات التي تم عدها.
    2. أطباق بها أكثر من 250 مستعمرة. عندما يتجاوز عدد CFU لكل لوحة 250 ، بالنسبة لجميع التخفيفات ، قم بتسجيل التهم على أنها كثيرة جدًا بحيث لا يمكن حسابها (TNTC) للجميع باستثناء اللوحة الأقرب إلى 250 ، وعد CFU في تلك الأجزاء من اللوحة التي تمثل توزيع المستعمرة. انظر المرجع. 2 للحصول على إرشادات مفصلة. حدد علامة APC المحسوبة مع EAPC للإشارة إلى أنه تم تقديره من التهم خارج 25-250 لكل نطاق لوحة (ارى د -3).
    3. الموزعات. عادة ما تكون مستعمرات الانتشار من 3 أنواع متميزة: 1) سلسلة من المستعمرات ، ليست منفصلة بشكل واضح ، والتي يبدو أنها ناتجة عن تفكك الكتلة البكتيرية 2) واحدة تتطور في فيلم من الماء بين أجار وقاع الطبق و 3) الذي يتشكل في فيلم من الماء على حافة أو على سطح أجار. إذا كانت الصفائح المحضرة من العينة بها نمو مفرط في الموزعات بحيث (أ) المساحة المغطاة بالموزعات ، بما في ذلك إجمالي مساحة النمو المكبوت ، تتجاوز 50٪ من مساحة اللوحة ، أو (ب) مساحة النمو المكبوت تتجاوز 25٪ من مساحة اللوحة ، لوحات التقارير كموزعات. عندما يكون من الضروري حساب اللوحات التي تحتوي على موزعات لم يتم التخلص منها بواسطة (أ) أو (ب) أعلاه ، فاحسب كل نوع من أنواع الموزعات الثلاثة المميزة كمصدر واحد. بالنسبة للنوع الأول ، إذا كانت هناك سلسلة واحدة فقط ، فاحسبها على أنها مستعمرة واحدة. إذا ظهر أن سلسلة واحدة أو أكثر تنشأ من مصادر منفصلة ، فاحسب كل مصدر على أنه مستعمرة واحدة. لا تحسب كل نمو فردي في مثل هذه السلاسل كمستعمرة منفصلة. عادةً ما ينتج عن النوعين 2 و 3 مستعمرات مميزة ويتم حسابهما على هذا النحو. اجمع بين عدد الموزعات وعدد المستعمرات لحساب APC.
    4. لوحات بدون CFU. عندما لا تحتوي الألواح من جميع التخفيفات على مستعمرات ، فقم بالإبلاغ عن APC على أنها أقل من 1 مرة من أقل تخفيف يستخدم. قام Mark بحساب APC بعلامة النجمة للإشارة إلى أنه تم تقديره من التهم خارج النطاق 25-250 لكل لوحة. عندما يكون من المعروف أن اللوحة (اللوحات) من العينة ملوثة أو غير مرضية بأي شكل من الأشكال ، قم بتسجيل النتيجة (النتائج) على أنها حادث معمل (LA).

    عدد الحوسبة والتسجيل (انظر المراجع 6 ، 8)

    لتجنب خلق انطباع وهمي عن الدقة عند حساب APC ، قم بالإبلاغ عن أول رقمين مهمين فقط. قم بالتقريب إلى رقمين مهمين فقط في وقت التحويل إلى SPC. بالنسبة لعينات الحليب ، عندما لا تحتوي أطباق جميع التخفيفات على مستعمرات ، فقم بالإبلاغ عن عدد أقل من 25 خلية مقدرة. قم بالتقريب برفع الرقم الثاني إلى أعلى رقم تالي عندما يكون الرقم الثالث 6 أو 7 أو 8 أو 9 واستخدم الأصفار لكل رقم متتالي باتجاه اليمين من الرقم الثاني. قم بالتقريب لأسفل عندما يكون الرقم الثالث 1 أو 2 أو 3 أو 4. عندما يكون الرقم الثالث 5 ، قم بالتقريب للأعلى عندما يكون الرقم الثاني فرديًا وتقريبه للأسفل عندما يكون الرقم الثاني زوجيًا.

    1:100 1:1000
    232, 244 33, 28

    كل اللوحات بها أقل من 25 CFU. عندما تنتج الألواح من كلا التخفيفين أقل من 25 CFU لكل منهما ، سجل عدد اللوحات الفعلي ولكن سجل العدد على أنه أقل من 25 × 1 / d عندما يكون d هو عامل التخفيف للتخفيف الذي تم الحصول على التهم الأولى منه.

    جميع الأطباق تحتوي على أكثر من 250 وحدة تشكيل مستعمرة. عندما تنتج الألواح من كلا التخفيفين أكثر من 250 CFU لكل منهما (ولكن أقل من 100 / سم 2) ، قم بتقدير التعدادات الهوائية من الألواح (EAPC) الأقرب 250 واضربها في التخفيف.

    المستعمرات
    1:100 1:1000 EAPC / مل (ز)
    TNTC 640 640,000

    TNTC ، عدد كبير جدًا بحيث يتعذر احتسابه.
    EAPC ، يقدر عدد الألواح الهوائية.

    جميع اللوحات مع نثرات و / أو حوادث المختبر. الإبلاغ على التوالي كموزع (SPR) ، أو حادث مختبر (LA).

    جميع اللوحات التي تحتوي على أكثر من 100 وحدة تشكيل مستعمرة لكل سم مربع. تقدير APC أكبر من 100 مرة من أعلى تمييع مطلي ، مرات مساحة اللوحة. يبلغ متوسط ​​العد في الأمثلة أدناه 110 لكل سم مربع.

    المستعمرات / التخفيف
    1:100 1:1000 EAPC / مل (ز)
    TNTC 7،150 (أ) & GT6500000 EAPC (ب)
    TNTC 6,490 & GT5،900،000 EAPC

    (أ) على أساس مساحة اللوحة 65 سم 2
    (ب) EAPC ، المقدرة APC
    ج بناءً على مساحة اللوحة 59 سم 2

    طريقة اللوح الحلزوني

    طريقة عدد الصفائح الحلزونية (SPLC) للكائنات الدقيقة في الحليب والأطعمة ومستحضرات التجميل هي طريقة رسمية لـ APHA (2) و AOAC (3). في هذه الطريقة ، تقوم الطبق الميكانيكي بتلقيح صفيحة أجار دوارة بعينة سائلة. يتناقص حجم العينة الذي يتم صرفه عندما يتحرك قلم التوزيع من المركز إلى حافة اللوحة الدوارة. يتم تحديد التركيز الميكروبي عن طريق عد المستعمرات على جزء من طبق بتري حيث يمكن عدها بسهولة وقسمة هذا العدد على الحجم المناسب. يحدد تلقيح واحد كثافة الميكروبات بين 500 و 500000 كائن حي دقيق / مل. يمكن إجراء تخفيفات إضافية للتركيزات الميكروبية العالية المشتبه بها.

    1. المعدات والمواد
      1. طبق حلزوني (Spiral Systems Instruments، Inc.، 7830 Old Georgetown Road، Bethesda، MD 20814)
      2. عداد مستعمرات حلزونية (أنظمة لولبية) مع شبكة خاصة لربط أحجام العينات المودعة بأجزاء معينة من أطباق بتري
      3. مصيدة تفريغ للتخلص من السوائل (زجاجة مفرغة سعة 2-4 لتر تعمل كخزان تفريغ ومصدر تفريغ 50-60 سم زئبق)
      4. أكواب صغيرة يمكن التخلص منها ، 5 مل
      5. أطباق بتري من البلاستيك أو الزجاج 150 × 15 مم أو 100 × 15 مم
      6. أجار عدد الصفائح (الطرق القياسية) (M124)
      7. آلة حاسبة (اختيارية) ، يوصى باستخدام آلة حاسبة يدوية إلكترونية غير مكلفة
      8. أكياس بولي إيثيلين لتخزين الأطباق الجاهزة
      9. محلول هيبوكلوريت الصوديوم التجاري ، حوالي 5٪ NaOCl (مبيض)
      10. ماء مخفف معقم
      11. حقنة ، مع طرف Luer للعوائق في سعة القلم ليست حرجة
      12. منطقة العمل ، مساحة التخزين ، الثلاجة ، موازين الحرارة ، العد ، الحاضنة ، كما هو موصوف لطريقة عد الألواح التقليدية ، أعلاه.
      13. محلول هيبوكلوريت الصوديوم (5.25٪). متاح تجاريا.

      يوصى باستخدام موزع أوتوماتيكي بنظام توصيل معقم لتحضير أطباق الأجار. حجم الآجار الموزع في الأطباق قابل للتكرار ومعدل التلوث منخفض مقارنة بصب الأجار يدويًا في المختبر المفتوح. عندما يكون ذلك ممكنًا ، استخدم غطاء تدفق الهواء الرقائقي جنبًا إلى جنب مع الموزع الآلي. صب نفس الكمية من أجار في جميع اللوحات بحيث يتم تقديم نفس ارتفاع أجار لطرف القلم اللولبي للحفاظ على زاوية التلامس. يجب أن تكون ألواح الأجار مستوية أثناء التبريد.

      تقترح الطريقة التالية لتجهيز ألواح الأجار مسبقًا: استخدم موزعًا أوتوماتيكيًا أو صب كمية ثابتة (حوالي 15 مل / 100 مم لوحة 50 مل / 150 مم) من أجار معقم عند 60-70 درجة مئوية في كل طبق بتري. دع الأجار يتجمد على سطح مستوٍ مع أطباق مصبوبة مكدسة لا تزيد عن 10 أطباق. ضع ألواح أجار صلبة في أكياس من البولي إيثيلين ، وأغلقها برباط أو مادة مانعة للتسرب ، وقم بتخزينها مقلوبة عند 0-4.4 درجة مئوية. أحضر الأطباق مسبقة الصب إلى درجة حرارة الغرفة قبل التلقيح.

      كما هو موضح في الفصل 1 ، حدد ذلك الجزء من العينة الذي يحتوي على أصغر كمية من الأنسجة الضامة أو الكريات الدهنية.

      يقوم الطبق الحلزوني بتلقيح سطح صفيحة أجار المحضرة للسماح بتعداد الكائنات الحية الدقيقة في محاليل تحتوي على ما بين 500 و 500000 كائن حي دقيق لكل مل. يمكن للمشغل الذي لديه الحد الأدنى من التدريب تلقيح 50 لوحة لكل ساعة. ضمن النطاق المحدد ، لا يلزم استخدام زجاجات أو ماصات للتخفيف وغيرها من المعدات المساعدة. مساحة المقعد المطلوبة ضئيلة ، ووقت فحص محاذاة الأداة أقل من دقيقتين. ترسبات الطبق تتناقص كمية العينة في دوامة أرخميدس على سطح صفيحة أجار مسبقة الصنع. حجم العينة على أي جزء من اللوحة معروف. بعد الحضانة ، تظهر المستعمرات على طول الخط الحلزوني. إذا كانت المستعمرات الموجودة على جزء من اللوحة متباعدة بشكل كافٍ عن بعضها البعض ، فاحسبها على شبكة خاصة تربط حجمًا معايرًا بكل منطقة. تقدير عدد الكائنات الحية الدقيقة في العينة بقسمة عدد المستعمرات في منطقة محددة على الحجم الموجود في نفس المنطقة. أظهرت الدراسات أن الطريقة تكون بارعة ليس فقط مع الحليب (4) ولكن أيضًا مع الأطعمة الأخرى (7،10).

      تحقق من زاوية طرف القلم يوميًا واضبطه إذا لزم الأمر. (استخدم الفراغ لعقد غطاء المجهر على وجه طرف القلم إذا كان مستوى انزلاق الغطاء متوازيًا على بعد حوالي 1 مم من سطح المنصة ، ويكون الطرف موجهًا بشكل صحيح). يتم نقل السوائل من خلال النظام عن طريق الفراغ. قم بتنظيف طرف القلم عن طريق الشطف لمدة 1 ثانية بمحلول هيبوكلوريت الصوديوم متبوعًا بمياه التخفيف المعقم لمدة ثانية واحدة قبل إدخال العينة. يقلل إجراء الشطف هذا بين معالجة كل عينة من التلوث المتبادل. بعد الشطف ، اسحب العينة إلى طرف أنبوب التفلون بواسطة فراغ مطبق على صمام ثنائي الاتجاه. عندما تمتلئ الأنبوب والمحقنة بالعينة ، أغلق الصمام الموصول بالمحقنة. ضع لوحة أجار على المنصة ، ضع طرف القلم على سطح أجار ، وابدأ تشغيل المحرك. أثناء التلقيح ، قم بتسمية غطاء لوحة بتري. بعد تلقيح أجار ، يرفع القلم من سطح أجار ويتوقف اللوح الحلزوني تلقائيًا. قم بإزالة اللوحة الملقحة من المنصة وقم بتغطيتها. حرك القلم إلى وضع البداية. نظام شطف الفراغ بهيبوكلوريت والماء ، ثم إدخال عينة جديدة. اقلب اللوحات وضعها على الفور في الحاضنة لمدة 48 ± 3 ساعات عند 35 ± 1 درجة مئوية.

      تحقق من عقم الطبق الحلزوني لكل سلسلة من العينات عن طريق طلاء الماء المخفف المعقم. تنبيه: يجب ألا تتلوث الألواح مسبقة الصب من قبل مستعمرة سطحية أو أن تكون أقل من درجة حرارة الغرفة (يمكن أن تتسرب المياه من أجار). لا ينبغي أن تكون جافة بشكل مفرط ، كما يتضح من التجاعيد الكبيرة أو المظهر المزجج. يجب ألا تحتوي على قطرات ماء على سطح أجار أو اختلافات أكبر من 2 مم في عمق أجار ، ويجب ألا يتم تخزينها في 0-4.4 درجة مئوية لمدة تزيد عن شهر واحد. يشير معدل التدفق المنخفض عبر الأنابيب إلى وجود عوائق أو مادة في النظام. لإزالة العوائق ، قم بإزالة الصمام من المحقنة ، أدخل حقنة محمولة باليد مع تركيب اللوير الذي يحتوي على الماء ، واضغط. استخدم شطف الكحول لإزالة المواد المتبقية الملتصقة بجدران النظام. قم بإذابة البقايا المتراكمة بحمض الكروميك. شطف جيدا بعد التنظيف.

      1. وصف. استخدم نفس شبكة العد لكل من أطباق بتري 100 و 150 ملم. يتم توفير قناع للاستخدام مع أطباق 100 مم. شبكة العد مقسمة إلى 8 أسافين متساوية ، كل إسفين مقسم على 4 أقواس معنون L و 2 و 3 و 4 من خارج حافة الشبكة. تمت إضافة خطوط أخرى داخل هذه الأقواس لسهولة العد. المقطع هو المساحة الواقعة بين خطي قوس داخل إسفين. عدد المناطق التي تم عدها (على سبيل المثال ، 3) يعني عدد الأجزاء المحسوبة داخل إسفين. ترسب الطبق اللولبي عينة على لوحة أجار بنفس الطريقة في كل مرة. تربط الشبكة المستعمرات الموجودة على اللوح الحلزوني بالحجم الذي تم احتواؤه فيه. عندما يتم حساب المستعمرات بالشبكة ، يصبح حجم العينة أكبر حيث يبدأ العد عند الحافة الخارجية للوحة ويتقدم نحو مركز اللوحة.
      2. معايرة. يظهر حجم العينة الممثلة بأجزاء مختلفة من شبكة العد في دليل المشغل الذي يصاحب اللوح الحلزوني. تم فحص ثوابت منطقة الشبكة من قبل الشركة المصنعة وهي دقيقة. للتحقق من هذه القيم ، قم بإعداد 11 تركيزات بكتيرية في نطاق 10 6-10 3 خلايا / مل عن طريق إجراء تخفيفات 1: 1 من المعلق البكتيري (استخدم nonpreader). لوحة جميع احتضان كلا المجموعتين من اللوحات لمدة 48 ± 3 ساعة عند 35 ± 1 درجة مئوية. احسب التركيزات لكل تخفيف. عد الألواح الحلزونية على سطح الشبكة ، باستخدام قاعدة العد 20 (الموضحة في H ، أدناه) ، وسجل عدد المستعمرات التي تم عدها ومنطقة الشبكة التي تم عدها عليها. تشير كل مستعمرة حلزونية لمنطقة شبكة معينة ، مقسومة على العد الهوائي / مل للتركيزات البكتيرية المطلية حلزونيًا المقابلة ، إلى الحجم المودع في منطقة الشبكة المحددة هذه. استخدم الصيغة التالية:

      للتحقق من الحجم الإجمالي الذي يتم الاستغناء عنه بواسطة اللوح الحلزوني ، قم بوزن الكمية المستغلة من طرف القلم. اجمعها في دورق بلاستيكي سعة 5 مل وقم بوزنه على الميزان التحليلي (± 0.2 مجم).

      الشكل 1. لوحة 10 سم ، المساحة (3 ب)

      قاعدة العد رقم 20. بعد الحضانة ، قم بتوسيط اللوح اللولبي فوق الشبكة عن طريق ضبط أذرع الإمساك على العارض. اختر أي إسفين وابدأ في عد المستعمرات من الحافة الخارجية للمقطع الأول باتجاه المركز حتى يتم حساب 20 مستعمرة. أكمل عن طريق عد المستعمرات المتبقية في المقطع حيث توجد المستعمرة العشرون. في إجراء العد هذا ، تشير الأرقام مثل 3 ب ، 4 ج (الشكل ل) إلى مقاطع المنطقة من الحافة الخارجية للإسفين إلى خط القوس المحدد. يتم التحكم في أي مخالفات في العد في تكوين العينة عن طريق حساب نفس المقاطع في الإسفين المقابل وتسجيل النتائج. يوضح مثال الصفيحة الملقحة حلزونيًا (الشكل 1) طريقة تحديد عدد الميكروبات. تم عد جزأين من كل إسفين على جوانب متقابلة من الصفيحة مع 31 و 30 مستعمرة على التوالي. حجم العينة الموجود في الأجزاء المظلمة هو 0.0015 مل. لتقدير عدد الكائنات الحية الدقيقة ، قسّم العد على الحجم الموجود في جميع المقاطع التي تم حسابها. انظر المثال تحت الشكل.

      إذا لم يكن 20 CFU ضمن الأجزاء الأربعة من الإسفين ، فاحسب CFU على اللوحة بأكملها. إذا تجاوز عدد المستعمرات 75 في المقطع الثاني أو الثالث أو الرابع ، والذي يحتوي أيضًا على المستعمرة العشرين ، فسيكون العدد التقديري للكائنات الحية الدقيقة منخفضًا بشكل عام بسبب خطأ المصادفة المرتبط بازدحام المستعمرات. في هذه الحالة ، قم بحساب كل مقطع متجاور محيطيًا في جميع الأوتاد الثمانية ، بحساب 50 مستعمرة على الأقل ، على سبيل المثال ، إذا كان الجزءان الأولان من الإسفين يحتويان على 19 مستعمرة وكان المقطع الثالث يحتوي على العشرين والسادس والسبعين (أو أكثر) ، فاحسب المستعمرات في جميع الأجزاء الأولى والثانية متجاورة محيطيًا في جميع الأوتاد الثمانية. احسب الحجم المحتوي في أجزاء معدودة من الأوتاد وقسمه إلى عدد من المستعمرات.

      عندما يتم حساب أقل من 20 مستعمرة على اللوحة الكلية ، قم بالإبلاغ عن النتائج على أنها "أقل من 500 مستعمرة تقديرية لكل مل." إذا تجاوز عدد المستعمرات 75 في الجزء الأول من الإسفين ، فقم بالإبلاغ عن النتائج على أنها "أكبر من 500000 SPLC تقديري لكل مل". لا تحسب الصفائح الحلزونية ذات التوزيع غير المنتظم للمستعمرات الناتجة عن أخطاء الاستغناء. تقرير نتائج لوحات مثل حادث المختبر (LA). إذا كانت الموزعة تغطي اللوحة بأكملها ، فتجاهل اللوحة. إذا كان الموزع يغطي نصف مساحة اللوحة ، فاحسب فقط تلك المستعمرات الموزعة جيدًا في المناطق الخالية من الموزعات.

      حساب SPLC ما لم يتم تقييده عن طريق الكشف عن المواد المثبطة في العينة ، أو النمو المفرط للموزعات ، أو حوادث المختبر. عدد الدورات كما هو موضح في I-D أعلاه. يُحسب التقرير على أنه SPLC أو SPLC مقدر لكل مل.

      مراجع

        جمعية الصحة العامة الأمريكية. 1984. خلاصة وافية لطرق الفحص الميكروبيولوجي للأغذية ، الطبعة الثانية. APHA، Washington، DC American Public Health Association. 1993. الطرق القياسية لفحص منتجات الألبان ، الطبعة السادسة عشر. APHA ، واشنطن العاصمة. رابطة الكيميائيين التحليليين الرسميين. 1990. طرق التحليل الرسمية ، الطبعة 15. AOAC ، أرلينغتون ، فيرجينيا. دونلي ، سي بي ، جي إي جيلكريست ، جي تي. بيلر وجيه إي كامبل. 1976. طريقة عد الصفيحة الحلزونية لفحص الحليب الخام والمبستر. تطبيق بيئة. ميكروبيول.32: 21-27. جيلكريست ، جي إي ، سي بي دونلي ، جيه تي. بيلر وجيه إي كامبل. 1977. دراسة تعاونية تقارن بين طرق عد الصفيحة الحلزونية وطريقة عد الألواح الهوائية. J. Assoc. اطفء. شرجي. تشيم.60: 807-812. الاتحاد الدولي لمنتجات الألبان. 1987. الحليب ومنتجات الألبان: تعداد الكائنات الحية الدقيقة - عدد المستعمرات عند 3 درجات مئوية. معيار جيش الدفاع الإسرائيلي المؤقت 100 أ. جيش الدفاع الإسرائيلي ، بروكسل ، بلجيكا. جارفيس ، ب ، في إتش لاش ، وجي إم وود. 1977. تقييم صانع الألواح الحلزونية لتعداد الكائنات الدقيقة في الأطعمة. J. أبل. باكتيريول.43: 149-157. Niemela، S. 1983. التقييم الإحصائي لنتائج الفحوصات الميكروبيولوجية الكمية. تقرير رقم 1 ، الطبعة الثانية. لجنة الشمال الأوروبي لتحليل الغذاء ، أوبسالا ، السويد. توماسيفيتش ، دي إم ، دي كيه. هوتشكيس ، جي دبليو. رينبولد ، آر بي ريد ، الابن ، وب. هارتمان. 1980. أنسب عدد من المستعمرات على لوحات للعد. J. الغذاء بروت.43: 282-286. Zipkes و M.R. و J.E. Gilchrist و J.T. مقشرة. 1981. مقارنة بين عدد الخميرة والعفن بطرق اللولب والصب والخط. J. Assoc. اطفء. شرجي. تشيم.64:1465-1469.

      Hypertext Source: Bacteriological Analytical Manual، Edition 8، Revision A، 1998. الفصل 3.


      الاعتبارات الميكروبيولوجية في تنفيذ أنظمة سلامة الأغذية وجودتها

      الهوائية العد لوحة

      يُعرف عدد الألواح الهوائية (APC) أيضًا باسم عدد الصفائح القياسي ، أو العد الهوائي للوضع المتوسط ​​، أو إجمالي عدد الصفائح أو عدد المستعمرات الهوائية. يستخدم APC لتقدير عدد البكتيريا في عينة الغذاء. إنه ليس تقييمًا لمجموعة البكتيريا بأكملها ولا يشير إلى الاختلافات بين أنواع البكتيريا في منتج غذائي. يوفر تقديرًا لعدد الكائنات الحية الدقيقة التي يمكن أن تنمو بشكل هوائي في درجات حرارة متوسطة. يمكن استخدام APC للحكم على الجودة الصحية ، والقبول الحسي ، والتوافق مع ممارسات التصنيع الجيدة (GMPs). يمكن أن تزود نتائج APC معالج الطعام بمعلومات عن جودة أو تاريخ التعامل مع المواد الخام ، وتجهيز الأغذية وظروف التخزين ، والتعامل مع المنتج النهائي. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدامه لتحديد العمر الافتراضي أو التغيير الحسي القادم في منتج غذائي (Silliker ، 1963). تحدث التغييرات التي يمكن الكشف عنها في خصائص جودة الغذاء بسبب النمو الميكروبي وإنتاج الإنزيم بشكل عام عندما تصل زيادات APC إلى حوالي 10 6-10 7 لكل جرام أو مل.

      إن APC هو مؤشر غير موثوق به لسلامة الأغذية الميكروبية لأنه ليس له علاقة مباشرة بحدوث مسببات الأمراض أو السموم. لا يشير انخفاض APC إلى عدم وجود مسببات الأمراض في المنتج أو مكوناته. ومع ذلك ، إذا لوحظ ارتفاع غير معتاد في APC في منتج أو مكون غذائي ، فيمكن الافتراض بشكل معقول أن هناك خطرًا على الصحة العامة في انتظار نتائج اختبار العوامل الممرضة. عند تفسير نتائج APC ، يجب على المرء أن يأخذ في الاعتبار نوع المنتج الغذائي وما إذا كان معدل APC المرتفع هو نموذجي لهذا المنتج أم لا. على سبيل المثال ، من المتوقع أن يحتوي الطعام المخمر مثل الزبادي على نسبة عالية من APC.


      يستخدم عدد اللوحات الهوائية (APC) كمؤشر على التجمعات البكتيرية في العينة. ويسمى أيضًا عدد المستعمرات الهوائية ، أو عدد الصفائح المعيارية ، أو العد الوسطي أو إجمالي عدد الصفائح.

      يعتمد الاختبار على افتراض أن كل خلية ستشكل مستعمرة مرئية عند مزجها بأجار يحتوي على العناصر الغذائية المناسبة. إنه ليس مقياسًا لكامل السكان البكتيريين ، إنه اختبار عام للكائنات الحية التي تنمو هوائيًا في درجات حرارة متوسطة (25 إلى 40 درجة مئوية 77 إلى 104 درجة فهرنهايت).

      لا يفرق APC بين أنواع البكتيريا.

      يمكن استخدام APC لقياس جودة الصرف الصحي ، والقبول الحسي ، والالتزام بممارسات التصنيع الجيدة ، وبدرجة أقل ، كمؤشر على السلامة. قد تقدم APC أيضًا معلومات بشأن العمر الافتراضي أو التغيير الحسي الوشيك في الطعام.

      تُعد ناقلات الخلايا المُقدّمة من المؤشرات الضعيفة للسلامة في معظم الحالات ، لأنها لا ترتبط ارتباطًا مباشرًا بوجود مسببات الأمراض أو السموم. لا تعني النتيجة المنخفضة لـ APC أن المنتج أو المكون خالٍ من مسببات الأمراض. ومع ذلك ، فإن بعض المنتجات أو المكونات التي تظهر بشكل مفرط أو مرتفع بشكل غير عادي قد يُفترض بشكل معقول أنها مخاطر صحية محتملة ، في انتظار نتائج فحص العوامل الممرضة. يجب أن يأخذ تفسير نتائج APC في الاعتبار معرفة المنتج وما إذا كان من المتوقع ارتفاع APC.

      اعتمادًا على الموقف ، يمكن أن تكون APC ذات قيمة في تقييم جودة الغذاء. قد تكون الأعداد الكبيرة من البكتيريا مؤشراً على سوء الصرف الصحي أو مشاكل في التحكم في العملية أو المكونات. تحتوي بعض المنتجات ، مثل تلك التي يتم إنتاجها من خلال التخمير ، بشكل طبيعي على نسبة عالية من APC. مرة أخرى ، لا تعني الأرقام المنخفضة لـ APC عدم وجود مسببات الأمراض. في كثير من الأحيان ، من الضروري فحص الأطعمة لمسببات الأمراض أو الكائنات الحية المسببة للتلف قبل الحكم على سلامة الأغذية أو جودة الغذاء.

      غالبًا ما يتم تطبيق إرشادات أو مواصفات الجودة والسلامة على المواد الخام والسلع النهائية. قد يكون استخدام APC للمكونات مناسبًا أو غير مناسب كمؤشر للجودة. يجب أن يعتمد قرار الشركة المصنعة للأغذية بتطبيق إرشادات APC على المكونات على تأثير المكون على المنتج النهائي. على سبيل المثال ، في الأطعمة المجففة ، يمكن استخدام APC كوسيلة لتقييم مدى كفاية التحكم في الرطوبة أثناء عملية التجفيف. بالنسبة للحوم ، يمكن استخدام APC للتحقق من حالة الذبائح الواردة لتحديد الموردين الذين يثبتون أولئك الذين لديهم أعداد كبيرة جدًا. يمكن أيضًا استخدام APC لتقييم الظروف الصحية للمعدات والأواني. يمكن القيام بذلك أثناء المعالجة لمراقبة التراكم وبعد الصرف الصحي لقياس فعاليته.

      يقدم الجدول أدناه بعض الإرشادات العامة لعدد الألواح الهوائية المتوقعة على المكونات والمنتجات النهائية. ضع في اعتبارك أن مواصفات APC ليست مناسبة دائمًا. على سبيل المثال ، يمكن أن يكون للسلع الزراعية الخام تقلبات كبيرة في عدد اللوحات. في هذه الحالات ، يمكن لـ APC توفير بيانات مفيدة للمعالج الذي لديه فهم أفضل للعوامل التي قد تؤثر على العد ، ولكنها لا تقدم قيمة تذكر فيما يتعلق بمعايير القبول.

      الجدول 1 التعداد النموذجي للوحة الهوائية للسلع الأساسية (CFU / g)


      الفصل 1: أخذ عينات الطعام / تحضير عينة متجانس

      تعتبر كفاية وحالة العينة أو العينة المستلمة للفحص ذات أهمية قصوى. إذا تم جمع العينات بشكل غير صحيح وسوء التعامل معها أو لم تكن ممثلة للدُفعة المأخوذة من العينات ، فستكون النتائج المعملية بلا معنى. نظرًا لأن التفسيرات المتعلقة بشحنة كبيرة من المواد الغذائية تستند إلى عينة صغيرة نسبيًا من الدفعة ، يجب تطبيق إجراءات أخذ العينات المعمول بها بشكل موحد. تعتبر العينة التمثيلية ضرورية عندما يتم توزيع مسببات الأمراض أو السموم بشكل ضئيل داخل الغذاء أو عندما يعتمد التخلص من شحنة الغذاء على المحتوى البكتيري الظاهر فيما يتعلق بمعيار قانوني.

      يجب أن يكون عدد الوحدات التي تشتمل على عينة تمثيلية من دفعة معينة من منتج غذائي ذا دلالة إحصائية. يؤثر تكوين وطبيعة كل دفعة على تجانس وتوحيد كتلة العينة الإجمالية. يجب تحديد الإجراء المناسب لأخذ العينات الإحصائية ، وفقًا لما إذا كان الطعام صلبًا أو شبه صلب أو لزجًا أو سائلًا ، من قبل المجمع في وقت أخذ العينات باستخدام دليل عمليات التحقيقات (5). تمت مناقشة خطط أخذ العينات والعينة بالتفصيل في المرجع. 6.

      كلما أمكن ، أرسل العينات إلى المختبر في الحاويات الأصلية غير المفتوحة. إذا كانت المنتجات سائبة أو في حاويات كبيرة جدًا بحيث لا يمكن تقديمها إلى المختبر ، فقم بنقل الأجزاء التمثيلية إلى حاويات معقمة في ظل ظروف معقمة. لا يمكن أن يكون هناك حل وسط في استخدام معدات أخذ العينات المعقمة واستخدام تقنية التعقيم. قم بتعقيم الملاعق والملقط والملاعق والمقصات المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ من قطعة واحدة في الأوتوكلاف أو فرن التسخين الجاف. يعد استخدام مشعل البروبان أو غمس الجهاز في الكحول والإشعال أمرًا خطيرًا وقد لا يكون مناسبًا لتعقيم المعدات.

      استخدم حاويات نظيفة وجافة ومانعة للتسرب وذات فوهة واسعة ومعقمة وذات حجم مناسب لعينات المنتج. قد تكون الحاويات مثل الجرار البلاستيكية أو العلب المعدنية المانعة للتسرب محكمة الإغلاق. كلما أمكن ، تجنب العبوات الزجاجية ، والتي قد تتكسر وتلوث المنتج الغذائي. بالنسبة للمواد الجافة ، استخدم الصناديق أو العلب أو الأكياس أو العبوات المعدنية المعقمة ذات الإغلاق المناسب. الأكياس البلاستيكية المعقمة (للمواد الجافة وغير المجمدة فقط) أو الزجاجات البلاستيكية هي حاويات مفيدة لعينات الخطوط. احرص على عدم ملء الأكياس أو السماح بالثقب بإغلاق السلك. حدد كل وحدة عينة (يتم تحديدها لاحقًا) بشريط محدد بشكل صحيح من شريط التقنيع. لا تستخدم قلم لباد على البلاستيك لأن الحبر قد يخترق الحاوية. كلما أمكن ، احصل على 100 جرام على الأقل لكل وحدة عينة. إرسال ضوابط مفتوحة ومغلقة للحاويات المعقمة مع العينة.

      تسليم العينات إلى المختبر على وجه السرعة مع الحفاظ على ظروف التخزين الأصلية قدر الإمكان. عند جمع عينات سائلة ، خذ عينة إضافية كعنصر تحكم في درجة الحرارة. تحقق من درجة حرارة عينة التحكم في وقت الجمع وعند الاستلام في المختبر. عمل سجلاً لجميع العينات بأوقات وتواريخ الجمع والوصول إلى المختبر. لا يلزم تبريد الأطعمة الجافة أو المعلبة غير القابلة للتلف والتي يتم تجميعها في درجات حرارة محيطة. نقل المنتجات المجمدة أو المبردة في حاويات معزولة معتمدة من البناء الصلب بحيث تصل إلى المختبر دون تغيير. جمع العينات المجمدة في حاويات مبردة مسبقًا.

      ضع الحاويات في الفريزر لفترة كافية لتبريدها جيدًا. احتفظ بالعينات المجمدة مجمدة في جميع الأوقات. تبريد العينات المبردة ، باستثناء المحار ومخزون القواقع ، في ثلج بدرجة حرارة 0-4 درجة مئوية ونقلها في صندوق عينات مزود بمبرد مناسب قادر على الحفاظ على العينة في درجة حرارة 0-4 درجة مئوية حتى وصولها إلى المختبر. لا تجمد المنتجات المبردة. ما لم ينص على خلاف ذلك ، لا ينبغي تحليل العينات المبردة أكثر من 36 ساعة بعد الجمع. تطبق شروط خاصة على جمع وتخزين المحار المقشر وغير المجمد والمخزون الصدفي (1). قم بتعبئة عينات من المحار المقشور على الفور في ثلج مجروش (لم يتم تحديد درجة حرارة محددة) حتى يتم تحليلها ، أبقِ مخزون الصدفة أعلى من درجة التجمد ولكن أقل من 10 درجة مئوية. افحص المحار المبرد ومخزون الصدفة خلال 6 ساعات من التجميع ولكن لا تزيد بأي حال من الأحوال عن 24 ساعة بعد التجميع. يمكن العثور على مزيد من التفاصيل حول مناولة العينات والشحن في دليل عمليات التحقيقات (5) و دليل إجراءات المختبر (3). ال دليل عمليات التحقيقات (5) يحتوي على خطط أخذ العينات لمختلف الكائنات الحية الدقيقة. يتم عرض بعض من تلك شائعة الاستخدام هنا.

      خطط أخذ العينات

      بسبب استمرار حدوث السالمونيلا في الأطعمة ، حظيت خطط أخذ العينات لهذه الكائنات باهتمام لجان المنظمات الوطنية والدولية (6،7). أوصت كل من هذه اللجان بتغيير عدد العينات من دفعة معينة من الطعام وفقًا لفئة أخذ العينات التي تم تخصيص الغذاء لها. بشكل عام ، يعتمد التخصيص لأخذ العينات أو فئة الطعام على 1) حساسية مجموعة المستهلكين (على سبيل المثال ، كبار السن ، والعجزة ، والرضع) 2) إمكانية أن يكون الطعام قد خضع لخطوة قاتلة من أجل السالمونيلا أثناء عملية التصنيع أو في المنزل و 3) تاريخ الطعام. يعتمد اختيار خطة أخذ العينات بشكل أساسي على أول معيارين تم الاستشهاد بهما. سيكون تاريخ الطعام مهمًا في تقرير ما إذا كان سيتم أخذ عينة ، أي ما إذا كان هناك تاريخ سابق من التلوث. بالنسبة إلى السالمونيلا تمت مناقشة خطة أخذ العينات هنا ، تم تحديد 3 فئات من الأطعمة.

      فئة الغذاء الأول. - الأطعمة التي لا تخضع عادة لعملية قاتلة السالمونيلا بين وقت أخذ العينات والاستهلاك والمخصصة للاستهلاك من قبل كبار السن والعجزة والرضع.

      فئة الغذاء الثانية. - الأطعمة التي لا تخضع عادة لعملية قاتلة السالمونيلا بين وقت أخذ العينات والاستهلاك.

      الفئة الغذائية الثالثة. - الأطعمة التي عادة ما تخضع لعملية قاتلة السالمونيلا بين وقت أخذ العينات والاستهلاك.

      في حالات معينة ، قد لا يكون من الممكن التوافق التام مع خطة أخذ العينات. ومع ذلك ، لا يزال من المهم التأكد مما إذا كانت السالمونيلا موجودة أم لا في الطعام المشتبه فيه. لذلك ، لا يزال يتعين على المحلل محاولة تحليل أكبر عدد ممكن من الوحدات التحليلية للأغذية محل الاهتمام ، أي 60 وحدة تحليلية للأطعمة من الفئة الأولى ، و 30 وحدة تحليلية للأغذية من الفئة الثانية ، و 15 وحدة تحليلية للأغذية من الفئة الثالثة. يمكن دمج الوحدات التحليلية الفردية التي يبلغ وزنها 25 جرامًا في 375 جرامًا من المركبات كما هو موصوف أعلاه ما لم يرد خلاف ذلك في الفصل 5 ، OMA ، أو إذا كانت العينات المركبة غير قابلة للبلل تمامًا. فيما يلي أمثلة على المواقف التي قد تواجه المحلل.

      1) صحة عدد وأوزان وحدات العينة.

      يجب خلط كل عينة لضمان التجانس قبل سحب 25 جم وحدة تحليلية. يمكن تركيب الوحدات التحليلية (خمس عشرة وحدة 25 جم في مركب 375 جم) ، ما لم يذكر خلاف ذلك في الفصل 5 أو في OMA. يجب إثراء العينات مسبقًا بنسبة 1: 9 عينة إلى مرق.

      2) عدد وحدات العينة صحيح ، لكن العديد من وحدات العينة تالفة وغير صالحة للاستعمال.

      على سبيل المثال ، وصل خمسة عشر كيسًا من المعكرونة 1 رطل للاختبار ، ولكن 5 من الأكياس ممزقة وغير صالحة للاستعمال. في هذه الحالة ، يجب على المحلل أخذ عينات فقط من الأكياس العشرة السليمة. يجب خلط محتويات كل كيس سليم لضمان التجانس قبل سحب الوحدات التحليلية. نظرًا لأن المحلل يحتاج إلى مركب 375 جم ، يجب استخدام عشر وحدات تحليلية 37.5 جم ، من الأكياس العشر المتبقية السليمة ، لتشكيل المركب. يجب أن يتم دمج المركب مع وسط التخصيب الخاص به بنسبة 1: 9 عينة إلى مرق (375 جم عينة / 3375 مل من التخصيب المسبق) كما هو محدد في الفصل 5 أو OMA.

      3) عدد وحدات العينة غير صحيح ، لكن الوزن الإجمالي لوحدة (وحدات) العينة أكبر مما هو ضروري لإجراء تحليل العينة.

      على سبيل المثال ، وصلت عجلة واحدة من الجبن بسعة 10 أرطال للاختبار. نظرًا لأن الجبن عبارة عن غذاء من الفئة الثانية ، يجب تحليل ثلاثين وحدة تحليلية تبلغ 25 جم. يجب أن تؤخذ هذه الوحدات التحليلية بشكل عشوائي من مجموعة متنوعة من المواقع حول العجلة. لو السالمونيلا موجود في الطعام ، ثم ستتعزز احتمالات اكتشافه إذا تم تحليل مركبين 375 جم بدلاً من وحدة تحليلية واحدة 25 جم ، كما هو الحال إذا كان المحلل سيعامل العجلة بأكملها كعينة واحدة.

      4) تتوفر عينة أقل مما هو ضروري لتكوين العدد المطلوب من المركبات.

      على سبيل المثال ، وصل كيس من اللوز 8 أونصات (226.8 جم) للاختبار. اللوز هو طعام من الفئة الثانية. تتطلب الأطعمة من الفئة الثانية ثلاثين 25 جرامًا من الوحدات التحليلية (750 جرام) ، لذلك من المستحيل تحليل كمية اللوز التي تتطلبها خطة أخذ العينات. في هذه الحالة ، يجب على المحلل تحليل كل اللوز بنسبة 1: 9 عينة إلى مرق (226.8 جم عينة / 2041 مل وسط إثراء مسبق).

      إذا كان الوزن الإجمالي للوز ، في المثال أعلاه ، أقل من مركبين (750 جم) ، ولكن أكثر من مركب واحد ، فيجب على المحلل تحليل كل من المركب الكلي والجزئي. يجب أن تؤخذ الوحدات التحليلية التي تشتمل عليها هذه المركبات بشكل عشوائي من مجموعة متنوعة من المواقع في الكثير من اللوز. يجب إثراء كلا المركبين بنسبة 1: 9 عينة إلى مرق.

      تنطبق خطة أخذ العينات هذه على جمع المنتجات النهائية تحت المراقبة و / أو لتحديد الامتثال لاعتبارات تنظيمية. كما ينطبق أيضًا على جمع عينات المصنع من المواد الخام في مجموعات محددة من الوحدات المعالجة و / أو المنتجات النهائية حيثما يكون الإجراء التنظيمي ممكنًا. لا ينطبق ذلك على جمع وحدات عينات المعالجة المباشرة في مراحل مختلفة من التصنيع لأن هذه العينات لا تمثل بالضرورة الكمية الكاملة من الأغذية قيد الإنتاج. التقنيات الفعلية المشاركة في أخذ العينات مغطاة في دليل عمليات التحقيقات (5).

      تتكون وحدة العينة من 100 جرام كحد أدنى وعادة ما تكون حاوية المنتج بحجم المستهلك. خذ وحدات العينة بشكل عشوائي للتأكد من أن العينة تمثل الدفعة. عند استخدام حاويات العينات ، قم بتقديم عنصر تحكم يتكون من حاوية عينة واحدة فارغة تعرضت لنفس الظروف التي تم فيها جمع العينة. جمع أكثر من وحدة عينة واحدة من حاويات مؤسسية كبيرة أو حاويات سائبة عندما يتجاوز عدد وحدات العينة المطلوبة عدد الحاويات في الدفعة. تتكون وحدة العينة من أكثر من حاوية واحدة عندما تكون الحاويات أصغر من 100 جم (على سبيل المثال ، يمكن أن تشكل أربع حاويات سعة 25 جم وحدة عينة).

      إن أعداد وحدات العينة التي سيتم جمعها في كل فئة غذائية هي كما يلي: الفئة الغذائية الأولى ، 60 وحدة عينة فئة الغذاء الفئة الثانية ، 30 وحدة عينة فئة الغذاء الفئة الثالثة ، 15 وحدة عينة. إرسال جميع العينات التي تم جمعها إلى المختبر لتحليلها. إبلاغ المختبر مسبقًا بشحنات العينات القابلة للتلف.

      سيقوم المختبر بتحليل كل عينة لوجود السالمونيلا وفقًا للطرق الموضحة في هذا الدليل ، أو في طرق التحليل الرسمية (2). خذ 25 جم وحدة تحليلية عشوائيا من كل 100 جم وحدة عينة. عندما تتكون وحدة العينة من أكثر من حاوية واحدة ، قم بخلط محتويات كل حاوية بطريقة معقمة قبل أخذ الوحدة التحليلية سعة 25 جم. لتقليل عبء العمل التحليلي ، يمكن تكوين الوحدات التحليلية. الحد الأقصى لحجم الوحدة المركبة هو 375 جم أو 15 وحدة تحليلية. الحد الأدنى لعدد الوحدات المركبة التي سيتم اختبارها لكل فئة غذائية هو كما يلي: الفئة الغذائية الأولى ، 4 وحدات مركبة فئة الأغذية الثانية ، وحدتان مركبتان من فئة الأغذية الثالثة ، وحدة مركبة واحدة. لكل 375 جم مركب ، يتم تحليل الكمية الكاملة البالغة 375 جم من أجل السالمونيلا.

      احتفظ ببقية وحدة العينة في حاوية معقمة لمتطلبات الامتثال وفقًا للمادة 702 (ب) من القانون الفيدرالي للأغذية والأدوية ومستحضرات التجميل المعدل حتى فبراير 1993. قم بتبريد العينات والعينات القابلة للتلف التي تدعم نمو الميكروبات. مطلوب تحكم تحليلي لكل عينة تم اختبارها. الدفعة التي تم أخذ عينات منها تكون مقبولة فقط إذا كانت تحليلات جميع الوحدات المركبة سلبية بالنسبة لـ السالمونيلا. إذا كانت واحدة أو أكثر من الوحدات المركبة موجبة لـ السالمونيلا، يتم رفض الدفعة بشرط أن تكون الضبط التحليلي سلبيًا السالمونيلا. لن يتم إعادة أخذ عينات الكثير ما لم يتم إجراء الرقابة البيئية السالمونيلا هو إيجابي. لجميع العينات الموجبة ل السالمونيلا، تحديد المجموعة الجسدية. انظر الفصل 5 للحصول على معلومات حول التعامل مع هذه الثقافات. قد تستند توصيات الإجراءات التنظيمية إلى تحديد السالمونيلا مجموعة جسدية ولن تتطلب نمطاً مصلياً نهائياً قبل الشروع في الإجراء التنظيمي.

      تنطبق خطط أخذ العينات هذه على المنتجات الغذائية المستوردة المعدة للاستهلاك البشري.

      تصنيف المنتجات الغذائية لأغراض أخذ العينات

      يتم سرد الأطعمة التي تم تصنيفها إلى الفئات الثلاث الموضحة أعلاه لأخذ العينات التنظيمية في الفئات وفقًا لتسلسل رمز المنتج الصناعي والتسمية (4). الإدراج لا يعني بالضرورة أن هذه المنتجات هي مصادر محتملة السالمونيلا. فئة الغذاء الأول. - الأطعمة التي لا تخضع عادة لعملية قاتلة السالمونيلا بين وقت أخذ العينات والاستهلاك والمخصصة للاستهلاك من قبل كبار السن والعجزة والرضع. فئة الغذاء الثانية. - الأطعمة التي لا تخضع عادة لعملية قاتلة السالمونيلا بين وقت أخذ العينات والاستهلاك. الأمثلة هي كما يلي:

      كود المنتج الصناعي

      2 منتجات الحبوب المطحونة غير المطبوخة قبل الاستهلاك (النخالة وجنين القمح)
      3 الخبز واللفائف والكعك والخبز المحلى والمقرمشات والسلع الحلوة المليئة بالكاسترد والكريمة والمثلجات
      5 حبوب الإفطار وأطعمة الإفطار الأخرى الجاهزة للأكل
      7 المعجنات والرقائق والأطعمة الخفيفة الأخرى
      9 منتجات الزبدة والزبدة والحليب المبستر والحليب السائل الخام ومنتجات الألبان السائلة للاستهلاك المباشر ومنتجات الألبان السائلة المركزة المبسترة وغير المبسترة للاستهلاك المباشر والحليب المجفف ومنتجات الألبان المجففة للاستهلاك المباشر والكازين وكازينات الصوديوم ومصل اللبن
      12 منتجات الجبن والجبن
      13 آيس كريم من الحليب المبستر والمنتجات ذات الصلة المبسترة ومزيج الآيس كريم الخام والمنتجات غير المبسترة ذات الصلة للاستهلاك المباشر
      14 منتجات الألبان المقلدة المبستر وغير المبستر للاستهلاك المباشر
      15 البيض المبستر ومنتجات البيض من البيض المبستر والبيض غير المبستر ومنتجات البيض من البيض غير المبستر للاستهلاك دون مزيد من الطهي
      16 الأسماك والفقاريات وغيرها من المنتجات السمكية المعلبة والمعالجة المحار الخام ومنتجات القشريات الطازجة والمجمدة للاستهلاك المباشر الأسماك المدخنة والمحار والقشريات للاستهلاك المباشر
      17 اللحوم ومنتجاتها والدواجن ومنتجاتها والجيلاتين (بكميات كبيرة منكهة وغير منكهة)
      20-22 الفواكه الطازجة والمجمدة والمعلبة والعصائر والمركزات والنكتار والفواكه المجففة للاستهلاك المباشر المربيات والهلام والمعلبات والزبدة
      23 المكسرات ومنتجات الجوز والبذور الصالحة للأكل ومنتجات البذور الصالحة للأكل للاستهلاك المباشر
      24 عادة ما تؤكل عصائر الخضروات وبراعم الخضروات والخضروات نيئة
      26 تستهلك الزيوت مباشرة دون مزيد من المعالجة الأوليومارجرين
      27 الصلصات والبهارات (بما في ذلك المايونيز) ، تتبيلة السلطة والخل
      28 بهارات ونكهات ومقتطفات
      29 المشروبات الغازية والمياه
      30 قواعد المشروبات
      31 القهوة والشاي
      33 حلوى (مع وبدون شوكولاتة مع وبدون مكسرات) وعلكة
      34 منتجات الشوكولاته والكاكاو
      35 خلطات البودينغ غير المطبوخة قبل الاستهلاك ومنتجات الجيلاتين
      36 شراب وسكريات وعسل
      37 السندويشات واليخنات والمرق والصلصات الجاهزة للأكل
      38 الحساء
      39 سلطات جاهزة
      54 المكملات الغذائية مثل الفيتامينات والمعادن والبروتينات والخميرة الجافة غير النشطة

      الفئة الغذائية الثالثة: الأطعمة التي عادة ما تخضع لعملية قاتلة السالمونيلا بين وقت أخذ العينات والاستهلاك. الأمثلة هي كما يلي:

      كود المنتج الصناعي

      2 الحبوب الكاملة ومنتجات الحبوب المطحونة المطبوخة قبل الاستهلاك (دقيق الذرة وجميع أنواع الدقيق) ومنتجات النشا للاستخدام البشري
      3 خلطات جافة محضرة للكعك والبسكويت والخبز واللفائف
      4 منتجات المعكرونة والنودلز
      16 فقاريات الأسماك الطازجة والمجمدة (باستثناء تلك التي تؤكل نيئة) المحار والقشريات الطازجة والمجمدة (باستثناء المحار والقشريات النيئة للاستهلاك المباشر) الحيوانات المائية الأخرى (بما في ذلك أرجل الضفادع والقواقع البحرية والحبار)
      18 منتجات البروتين النباتي (اللحوم المحاكاة) تُطهى عادة قبل الاستهلاك
      24 الخضار الطازجة والخضروات المجمدة والخضروات المجففة ومنتجات الخضروات المعالجة والمعالجة المطبوخة عادة قبل الاستهلاك
      26 الزيوت النباتية ومخزون الزيت والسمن النباتي
      35 خلطات الحلوى الجافة وخلطات البودينغ ومنتجات المنفحة المطبوخة قبل الاستهلاك

      تعداد الصفائح الهوائية ، القولونيات الكلية ، القولونيات البرازية ، الإشريكية القولونية (بما في ذلك السلالات الممرضة المعوية) ، المكورات العنقودية النيابة. ، فيبريو النيابة. ، شيغيلا النيابة. ، كامبيلوباكتر النيابة. ، يرسينيا النيابة. ، بكتيريا سيريوس العصويه، و المطثية بيرفرينجنز

      من أي كمية كبيرة من الطعام ، اجمع عشر عينات فرعية سعة 8 أوقية (أو عبوات البيع بالتجزئة) بشكل عشوائي. لا تكسر أو تقطع عبوات البيع بالتجزئة الأكبر حجمًا للحصول على عينة فرعية سعة 8 أوقية. اجمع وحدة البيع بالتجزئة السليمة كعينة فرعية حتى لو كانت أكبر من 8 أوقية.

      تحليل العينات كما هو مبين في برامج الامتثال الحالية.

      المعدات والمواد

      1. خلاط ميكانيكي. تتوفر عدة أنواع. استخدم خلاطًا به سرعات تشغيل متعددة أو مقاومة مقاومة متغيرة. يشير مصطلح "الخلاط عالي السرعة" إلى الخلاط المزود بـ 4 شفرات من الفولاذ المقاوم للصدأ ذات حواف حادة ومثبتة تدور في قاع الدورق ذي 4 فصوص عند 10000-12000 دورة في الدقيقة أو بعمل قص مكافئ. يتم تقليل المواد الصلبة المعلقة إلى عجينة دقيقة من خلال عمل الشفرات والحاويات المفصصة ، والتي تقوم بتدوير المواد الصلبة العالقة إلى شفرات. خلاط وارنج ، أو ما يعادله ، يلبي هذه المتطلبات.
      2. إناء زجاجي معقم أو معدني عالي السرعة ، 1000 مل ، مع غطاء ، مقاوم للتعقيم لمدة 60 دقيقة عند 121 درجة مئوية
      3. ميزان بأوزان بسعة 2000 جرام وحساسية 0.1 جرام
      4. أكواب معقمة ، 250 مل ، منخفضة الشكل ، مغطاة بورق الألمنيوم
      5. ماصات مدرجة معقمة ، 1.0 و 10.0 مل
      6. ماء التخفيف المخزن بالفوسفات من Butterfield (Rll) ، المعقّم في زجاجات للحصول على الحجم النهائي 90 ± 1 مل
      7. السكاكين المعقمة ، والشوك ، والملاعق ، والملقط ، والمقص ، وملاعق الطعام ، وخافضات اللسان (لمناولة العينات)

      استلام العينات

      1. يتم جمع عينة الغذاء الرسمية من قبل مفتش أو محقق إدارة الغذاء والدواء. بمجرد وصول العينة إلى المختبر ، يجب على المحلل ملاحظة حالتها البدنية العامة. إذا تعذر تحليل العينة على الفور ، فيجب تخزينها كما هو موضح لاحقًا. سواء كان سيتم تحليل العينة لأغراض تنظيمية ، أو للتحقيق في تفشي مرض منقول عن طريق الأغذية ، أو لإجراء مسح جرثومي ، فإن الالتزام الصارم بالتوصيات الموضحة هنا يعد أمرًا ضروريًا.
      2. حالة حاوية أخذ العينات. افحص حاويات أخذ العينات بحثًا عن عيوب جسدية جسيمة. افحص بعناية الأكياس البلاستيكية والزجاجات بحثًا عن الدموع والثقوب وعلامات الثقب. إذا تم جمع وحدات العينة في زجاجات بلاستيكية ، فتحقق من وجود كسور وأغطية مفكوكة في الزجاجات. إذا تم استخدام الأكياس البلاستيكية لأخذ العينات ، فتأكد من أن الأسلاك الملتوية لم تثقب الأكياس المحيطة. أي تلوث متبادل ناتج عن واحد أو أكثر من العيوب المذكورة أعلاه من شأنه أن يبطل العينة ، ويجب إخطار منطقة الجمع (ارى C-5 أدناه)
      3. وضع العلامات والسجلات. تأكد من أن كل عينة مصحوبة بنسخة كاملة من تقرير المجموعة (نموذج FD-464) ومختومة رسميًا بشريط (FD-415a) يحمل رقم العينة واسم المسؤول وتاريخه. خصص لكل وحدة عينة رقم وحدة فردية وقم بتحليلها كوحدة منفصلة ما لم يتم تكوين العينة كما هو موضح سابقًا في هذا الفصل.
      4. الالتزام بخطة أخذ العينات. يتم جمع معظم الأطعمة بموجب خطة أخذ عينات مصممة خصيصًا في واحد من عدة برامج امتثال مستمرة. الأطعمة التي سيتم فحصها السالمونيلا، ومع ذلك ، يتم أخذ العينات وفقًا لخطة أخذ العينات المبنية على الإحصاء والمصممة حصريًا للاستخدام مع هذا العامل الممرض. اعتمادًا على الطعام ونوع التحليل الذي سيتم إجراؤه ، حدد ما إذا كان قد تم أخذ عينات من الطعام وفقًا لخطة أخذ العينات الأكثر ملاءمة.
      5. تخزين. إذا أمكن ، افحص العينات فور استلامها. إذا كان يجب تأجيل التحليل ، فقم بتخزين العينات المجمدة عند -20 درجة مئوية حتى الفحص. قم بتبريد العينات القابلة للتلف غير المجمدة عند 0-4 درجة مئوية ولا تزيد عن 36 ساعة. قم بتخزين الأطعمة غير القابلة للتلف أو المعلبة أو منخفضة الرطوبة في درجة حرارة الغرفة حتى التحليل.
      6. إشعار حي التحصيل. إذا فشلت العينة في تلبية المعايير المذكورة أعلاه وبالتالي لم يتم تحليلها ، قم بإخطار منطقة الجمع حتى يمكن الحصول على عينة صالحة وتقليل احتمالية التكرار.

      الذوبان

      استخدم تقنية التعقيم عند التعامل مع المنتج. قبل التعامل مع العينة أو تحليلها ، قم بتنظيف مناطق العمل المباشرة والمحيطة. بالإضافة إلى ذلك ، امسح منطقة العمل الفورية بعامل مبيد للجراثيم تجاري. يفضل عدم إذابة العينات المجمدة قبل التحليل. إذا لزم الأمر لتلطيف عينة مجمدة للحصول على جزء تحليلي ، قم بإذابه في الحاوية الأصلية أو في الحاوية التي تم استلامها فيها في المختبر. كلما أمكن ، تجنب نقل العينة إلى وعاء آخر لإذابة الجليد. عادة ، يمكن إذابة عينة من 2-5 درجة مئوية خلال 18 ساعة. إذا كان الذوبان السريع مطلوبًا ، فقم بإذابة العينة عند درجة حرارة أقل من 45 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن 15 دقيقة. عند إذابة عينة في درجات حرارة مرتفعة ، قم بتحريك العينة باستمرار في حمام مائي يتم التحكم فيه حراريًا.

      خلط

      من المتوقع وجود درجات مختلفة من التوزيع غير المنتظم للكائنات الدقيقة في أي عينة غذائية. لضمان توزيع أكثر عدالة ، رج العينات السائلة جيدًا ، وإذا كان ذلك عمليًا ، امزج العينات المجففة بالملاعق المعقمة أو أدوات أخرى قبل سحب الوحدة التحليلية من عينة بحجم 100 جم أو أكثر. استخدم وحدة تحليلية سعة 50 جم من الطعام السائل أو الجاف لتحديد قيمة عدد الصفائح الهوائية والعدد الأكثر احتمالًا للبكتيريا القولونية. أحجام الوحدات التحليلية الأخرى (على سبيل المثال ، 25 جم لـ السالمونيلا) ، اعتمادًا على تحليل محدد يتم إجراؤه. استخدم حجم الوحدة التحليلية وحجم المادة المخففة الموصى بها لملاءمة الدليل التحليلي البكتريولوجي الطريقة المستخدمة. إذا كانت محتويات العبوة غير متجانسة (على سبيل المثال ، عشاء مجمد) ، فقم بنقع محتويات العبوة بالكامل واسحب الوحدة التحليلية ، أو ، على نحو مفضل ، قم بتحليل كل جزء طعام مختلف على حدة ، اعتمادًا على الغرض من الاختبار.

      وزن

      جرة الخلاط الفارغة عالية السرعة ثم تعقيم وبدقة (± 0.1 جم) تزن الطعام غير الممزوج (إذا كان مجمداً) في البرطمان. إذا كانت العينة بأكملها تزن أقل من الكمية المطلوبة ، فقم بوزن جزء يعادل نصف العينة واضبط كمية المادة المخففة أو المرق وفقًا لذلك. يجب أن يغطي الحجم الإجمالي في الخلاط الشفرات تمامًا.

      مزج وتخفيف العينات التي تتطلب تعداد الكائنات الحية الدقيقة

      1. جميع الأطعمة ما عدا المكسرات والنصف والقطع الأكبر حجمًا ووجبة الجوز. أضف 450 مل من الماء المخفف المخزن بالفوسفات من Butterfield إلى وعاء الخلاط الذي يحتوي على 50 جم من الوحدة التحليلية واخلط لمدة 2 دقيقة. ينتج عن هذا تخفيف بنسبة 10-1. قم بعمل تخفيفات من المتجانس الأصلي على الفور ، باستخدام الماصات التي تقدم الحجم المطلوب بدقة. لا تقدم أقل من 10٪ من الحجم الإجمالي للماصة. على سبيل المثال ، لا تستخدم الماصة بسعة أكبر من 10 مل لتوصيل 1 مل من الأحجام لتوصيل 0.1 مل من الأحجام ، ولا تستخدم الماصة بسعة أكبر من 1.0 مل. قم بإعداد جميع التخفيفات العشرية باستخدام 90 مل من المادة المخففة المعقمة بالإضافة إلى 10 مل من التخفيف السابق ، ما لم ينص على خلاف ذلك. رج جميع التخفيفات بقوة 25 مرة في 30 سم (1 قدم) قوس في 7 ثوان. يجب ألا ينقضي أكثر من 15 دقيقة من وقت مزج العينة حتى تصبح جميع التخفيفات في الوسط المناسب.
      2. بندق لحم أنصاف وقطع أكبر. تزن 50 جم من الوحدة التحليلية بطريقة معقمة في جرة معقمة ذات غطاء لولبي. أضف 50 مل من المادة المخففة (G-l ، أعلاه) ورج بقوة 50 مرة خلال 30 سم قوس للحصول على 10 0 تخفيف. دعه يقف من 3-5 دقائق ويهز 5 مرات خلال 30 سم قوسًا لإعادة التعليق قبل إجراء التخفيفات المتسلسلة والتلقيح.
      3. وجبة البندق. وزن 10 جم من الوحدة التحليلية بطريقة معقمة في جرة معقمة ذات غطاء لولبي. أضف 90 مل من المادة المخففة (G-l ، أعلاه) ورج بقوة 50 مرة خلال 30 سم قوس للحصول على 10-1 تخفيف. دعه يقف من 3-5 دقائق ويهز 5 مرات خلال 30 سم قوسًا لإعادة التعليق قبل إجراء التخفيفات المتسلسلة والتلقيح.

      مراجع

      1. جمعية الصحة العامة الأمريكية. 1985. إجراءات المختبر لفحص مياه البحر والمحار ، الطبعة الخامسة. APHA ، واشنطن العاصمة.
      2. AOAC الدولية. 1995. طرق التحليل الرسمية ، الطبعة 16. AOAC INTERNATIONAL، Arlington، VA.
      3. إدارة الغذاء والدواء. 1989. دليل إجراءات المختبر. إدارة الغذاء والدواء ، روكفيل ، دكتوراه في الطب.
      4. إدارة الغذاء والدواء. دليل رموز بيانات EDRO. رموز المنتج: أغذية بشرية. إدارة الغذاء والدواء ، روكفيل ، دكتوراه في الطب.
      5. إدارة الغذاء والدواء. 1993. دليل عمليات التحقيقات. إدارة الغذاء والدواء ، روكفيل ، دكتوراه في الطب.
      6. الهيئة الدولية للمواصفات الميكروبيولوجية للأغذية. 1986. الكائنات الحية الدقيقة في الأطعمة. 2. أخذ العينات للتحليل الميكروبيولوجي: المبادئ والتطبيقات المحددة ، الطبعة الثانية. مطبعة جامعة تورنتو ، تورنتو ، أونتاريو ، كندا.
      7. الأكاديمية الوطنية للعلوم. 1969. تقييم ل السالمونيلا مشكلة. الأكاديمية الوطنية للعلوم ، واشنطن العاصمة.

      Hypertext Source: Bacteriological Analytical Manual، Edition 8، Revision A، 1998. الفصل 1.


      توجد البكتيريا في عينة عن طريق طريقة طلاء أجار التخفيف التسلسلي أو طريقة إجمالي عدد الصفائح (TPC)

      يعتمد مدى النشاط البكتيري في عينة معينة في مجموعة محددة من الظروف بشكل أساسي على العدد الإجمالي للبكتيريا الموجودة فيها بغض النظر عن نوعها.

      لذلك ، غالبًا ما يكون مطلوبًا معرفة العدد الإجمالي للبكتيريا الموجودة في عينات الطعام والماء والتربة والهواء والأنسجة أثناء تحليلها الميكروبيولوجي. يشمل هذا العدد الإجمالي للبكتيريا كلاً من البكتيريا الحية والميتة. & # 8217 البكتيريا الميتة لا يمكنها النمو والتكاثر.

      إنها فقط البكتيريا الحية (البكتيريا القابلة للحياة) ، التي يمكنها النمو والتكاثر مما يؤدي إلى نشاط بكتيري محدد. لذلك ، غالبًا ما يكون مطلوبًا تعداد خلايا البكتيريا القابلة للحياة في عينات مختلفة. ومع ذلك ، فإن معظم طرق العد مثل العد المجهري المباشر وعدد الخلايا الإلكترونية والطرق الكيميائية وطريقة القياس الطيفي تحسب الخلايا الحية والميتة.

      لا يمكن لهذه الأساليب التمييز بين الخلايا الحية والميتة. لذلك ، فإن طريقة تصفيح أجار التخفيف المتسلسل ، والتي تعدد فقط الخلايا البكتيرية القابلة للحياة ، هي الطريقة المستخدمة عالميًا لحساب الخلايا الحية القابلة للحياة في عينات مختلفة.

      مبدأ:

      يتم تجانس وزن محدد للعينة الصلبة بطريقة معقمة في تسعة مجلدات من المحلول الملحي المعقم للحصول على معلق متجانس للبكتيريا. يتم استخدام العينة السائلة مباشرة كمعلق متجانس للبكتيريا. يتم تخفيف معلقات البكتيريا التي تم الحصول عليها بشكل متسلسل (10 مرات ، 100 مرة ، 1000 مرة وما إلى ذلك). هنا 10-1 ، 10-2 ، 10 -3 إلخ تسمى التخفيفات.

      تسمى معاملاتهم المتبادلة (10 1 ، 10 2 ، 10 3 وما إلى ذلك) عوامل التخفيف. يتم تلقيح حجم محدد من تعليق البكتيريا من كل مخفف على ألواح أجار وينتشر بشكل صحيح ، وذلك لإبعاد خلايا البكتيريا الفردية عن بعضها البعض وعزلها عن بعضها البعض.

      يتم تلقيح البكتيريا لتعدادها بطريقتين على النحو التالي:

      1. تقنية صب لوحة

      2. تقنية لوحة الانتشار

      1. تقنية صب لوحة:

      في هذه التقنية ، يتم إسقاط 1 مل من المعلق البكتيري في طبق بتري معقم ثم يُسكب وسط أجار المغذيات المسال فوقه. يتم تحريك طبق بتري برفق ، للسماح للمعلق بالاختلاط مع الوسط بشكل موحد. يُسمح له بالتبريد والتصلب.

      2. تقنية لوحة الانتشار:

      في هذه التقنية ، يتم إسقاط 0.1 مل من معلق البكتيريا على صفيحة أجار محضرة. بعد ذلك ، يتم نشر قطرة التعليق بشكل موحد على لوحة أجار بواسطة رشاش زجاجي معقم.

      لتقليل الخطأ ، يتم طلاء كل معلق مخفف على 2-5 لوحات مكررة. يتم تحضين الصفائح الملقحة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. خلال هذه الفترة ، تنمو كل خلية بكتيرية فردية معزولة على صفيحة الأجار وتتكاثر بسرعة لإنتاج كتلة مرئية مجهرية من خلايا البكتيريا تسمى a & # 8216colony & # 8217. وبالتالي ، فإن عدد المستعمرات الموجودة على اللوحة يمثل عدد البكتيريا في العينة.

      ومع ذلك ، في كثير من الأحيان ، أثناء الانتشار ، قد لا تنفصل بعض الخلايا بشكل صحيح وقد يؤدي عدد قليل من هذه الخلايا غير المنفصلة إلى ظهور مستعمرة واحدة. علاوة على ذلك ، هناك عدد قليل من الخلايا التي تميل إلى البقاء في أزواج أو سلاسل أو عناقيد.

      هنا ، ينتج كل زوج أو سلسلة أو عنقود مستعمرة. وبالتالي ، فإن كل مستعمرة ، بالمعنى الدقيق للكلمة ، لا تمثل بكتيريا واحدة. لهذا السبب ، بدلاً من التعبير عن أعداد البكتيريا كـ & # 8216No. من البكتيريا / جم أو مل من العينة & # 8217 ، يتم التعبير عنها غالبًا بعدد وحدات تكوين المستعمرة لكل جم أو مل (CFU / جم أو مل).

      يتم حساب إجمالي عدد اللوحات (TPC) في العينة الأصلية بضرب عدد وحدات المعالجة المركزية مع عوامل التخفيف ذات الصلة. يتم اتباع قواعد التعداد & # 8216 & # 8217 أثناء حساب عدد البكتيريا في العينة الأصلية.

      المواد المطلوبة:

      أطباق بتري (15 عددًا) ، ماصات 2 مل (عدد 10) ، ماصة 10 مل (رقم واحد) ، أنابيب اختبار (عدد 10) ، قوارير مخروطية (500 مل و 1 لتر - عدد 1) ، دورق سعة 500 مل (عددان) ، مفرشة زجاجية ، علبة ماصة من الفولاذ المقاوم للصدأ ، ورق كرافت ، خيط (أو شريط مطاطي) ، قطن غير ماص ، كحول إيثيلي ، كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) ، 0.1 ن حمض الهيدروكلوريك (HCI) ، 0.1N هيدروكسيد الصوديوم (هيدروكسيد الصوديوم) ، الماء المقطر ، أجار المغذيات ، العينة السائلة (مثل مياه البركة / مياه الصرف الصحي) ، العينة الصلبة (مثل التربة / لحوم الأسماك / لحم المحار / الطعام المعالج) ، ورق الأس الهيدروجيني (أو مقياس الأس الهيدروجيني) ، المدقة وقذائف الهاون (أو المجانسة) ، موقد بنسن ، فرن الهواء الساخن ، الأوتوكلاف ، الحاضنة ، غرفة التدفق الصفحي ، عداد مستعمرات كيبيك.

      إجراء:

      1. يتم تعقيم عشر ماصات (في علبة ماصة من الفولاذ المقاوم للصدأ) و 15 طبق بتري وزوج من المدقة والملاط (أو كوب واحد للمجانسة) في فرن يعمل بالهواء الساخن بدرجة حرارة 180 درجة مئوية لمدة 3 ساعات. بدلاً من ذلك ، يمكن تغطيتها بورق حرفة ، وربطها بخيط أو شريط مطاطي وتعقيمها في الأوتوكلاف جنبًا إلى جنب مع الوسط (الشكل 6.6).

      يتم حساب عدد أطباق بتري وبالتالي كمية الوسط المطلوب استخدامها اعتمادًا على عدد المضاعفات والتخفيفات المطلوبة. هنا ، تم أخذ الأواني الزجاجية والوسيط للتكرار الفردي والتخفيف حتى 10-6. عدد الأواني الزجاجية وكمية الوسيط المأخوذ للتعقيم أكثر قليلاً لتجنب أي خطأ عرضي ، لأن التعقيم عملية طويلة.

      2. يذاب 4.25 جم من كلوريد الصوديوم في 500 مل من الماء المقطر للحصول على محلول فسيولوجي (0.85٪). يُسكب 225 مل من هذا المحلول الملحي في دورق مخروطي سعة 500 مل. فمه مسدود بالقطن ومغطى بورق حرفة ومربوط بخيط أو شريط مطاطي. يتم استخدامه كأول مواد مخففة لتخفيف العينة الصلبة.

      3. يتم أيضًا ضخ 9.0 مل من المحلول الملحي المتبقي في كل من أنابيب الاختبار العشرة. أفواههم مسدودة بالقطن ومغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي. هذه تستخدم كمخففات للتخفيف التسلسلي.

      4.يتم وزن مكونات وسط أجار المغذي أو مسحوقه الجاهز المطلوب ل 500 مل من الوسط ويذوب في 500 مل من الماء المقطر في دورق مخروطي سعة 1 لتر عن طريق الاهتزاز والدوران.

      يتم تحديد الأس الهيدروجيني باستخدام ورق الأس الهيدروجيني أو مقياس الأس الهيدروجيني وتعديله إلى 7.0 باستخدام 0.1N HC1 إذا كان أكثر أو يستخدم 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة لإذابة الأجار في الوسط تمامًا. بعد ذلك ، يتم توصيلها بالقطن ، ومغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

      5. الدورق المخروطي سعة 500 مل الذي يحتوي على 225 مل من المحلول الملحي ، و 10 أنابيب اختبار تحتوي على 9 مل من المحلول الملحي ، ودورق مخروطي سعة 1 لتر يحتوي على 500 مل من وسط أجار المغذيات ، يتم تعقيمها عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

      6. بعد التعقيم ، يتم إزالة المواد المعقمة من الأوتوكلاف وتترك لتبرد لبعض الوقت ، دون السماح للوسط بالتصلب. يمنع تبريد الوسط التكثيف وتراكم قطرات الماء داخل الألواح. إذا كان الوسيط قد تم تحضيره وتصلبه بالفعل أثناء التخزين ، فيجب تسييله عن طريق التسخين بعناية حتى يذوب تمامًا.

      7. لتحضير أطباق الآجار ، قبل أن يبرد وسط أجار المغذيات المعقم ويتصلب ، في حالة منصهرة دافئة ، يتم سكبه بطريقة معقمة في أطباق بتري الستة المعقمة (حوالي 20 مل لكل منها) ، بحيث يغطي الوسط المنصهر قاع البتري أطباق تماما.

      بعد ذلك ، تُغطى الألواح بأغطية وتُترك لتبرد ، وذلك لتصلب الوسط الموجود فيها. يتبخر بخار الماء الذي قد يتكثف على السطح الداخلي للألواح والأغطية عن طريق الحفاظ على الألواح والأغطية في وضع مقلوب في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة تقريبًا.

      8. 25 جم من العينة الصلبة (مثل لحم السمك / لحم المحار / الطعام المعالج) وزن ومتجانسة في 225 مل من محلول ملحي معقم (مخفف) معقم (الشكل 6.7). هذا يعطي تخفيف 10 مرات (التخفيف = 10-1). بالنسبة للعينة السائلة ، يتم ضخ 1 مل من العينة بطريقة معقمة في أنبوب ملحي معقم سعة 9 مل. يؤدي هذا أيضًا إلى تخفيف 10 مرات (التخفيف = 10-1).

      9. يتم نقل 1 مل من التخفيف 10-1 إلى محلول ملحي معقم 9 مل في أنبوب اختبار آخر. هذا يعطي تخفيف 100 مرة (التخفيف = 10 -2). من التخفيف 10-2 ، يتم إسقاط 1 مل في طبق بتري معقم و 0.1 مل على طبق أجار ، من نفس الماصة. لكل تخفيف يتم استخدام ماصة معقمة منفصلة. بعد الاستخدام ، يتم غمسه في وعاء التخلص منه.

      10. يتم نقل 1 مل من التخفيف 10 -2 إلى محلول ملحي معقم 9 مل في أنبوب اختبار آخر. هذا يعطي تخفيف 1000 مرة (التخفيف = 10 -3). من التخفيف 10 -3 ، يتم إسقاط 1 مل في طبق بتري معقم و 0.1 مل على طبق أجار ، من نفس الماصة. بطريقة مماثلة ، يستمر التخفيف حتى 10-6 بشكل متسلسل ، في كل مرة يتم نقل 1 مل إلى طبق بتري معقم و 0.1 مل إلى طبق أجار من نفس الماصة.

      11. بعد ذلك ، يتم نشر قطرات التعليق على ألواح الأجار بطريقة معقمة بواسطة رشاش زجاجي معقم. بعد أن تنتشر في كل طبق ، يتم تعقيمها باللهب عن طريق غمسها في الكحول وظهورها فوق اللهب. هذا هو & # 8216 تقنية لوحة الانتشار & # 8217.

      12. تؤخذ أطباق بتري التي تحتوي على 1 مل من البكتريا المعلقة ويتم سكب أجار المغذيات المسال المعقم فيها. يتم تحريكها برفق ، للسماح للمعلق بالاختلاط مع الوسط بشكل موحد. يُسمح للألواح بالتبريد حتى يصلب الوسط. هذا هو & # 8216 تقنية لوحة السكب & # 8217.

      13. بعد ذلك ، يتم تحضين الأطباق في وضع مقلوب ، من أعلى إلى أسفل ، عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في حاضنة (الشكل 6.7).

      14. يتم تحضين لوحة أجار غير الملقحة كعنصر تحكم لضمان التعقيم المناسب كما يتضح من عدم وجود نمو عليها.

      ملاحظات:

      يتم حساب عدد مستعمرات البكتيريا الموجودة على الأطباق مباشرة أو بمساعدة عداد مستعمرات كيبيك. من هذا ، يتم حساب عدد البكتيريا الموجودة لكل جرام أو مل من العينة الأصلية. هذا يسمى العد.

      1. يجب أخذ أطباق بتري مع 30 إلى 300 مستعمرة بعين الاعتبار.

      2. متوسط ​​عدد التكرارات والثلاثية (R1، ر2 ص3& # 8230) فقط إذا كان أحدهما لا يزيد عن ضعف الآخر. إذا كان أحدهما أكثر من ضعف القيمة الأقل الأخرى ، فسيتم أخذها.

      3. لتقنية لوحة الصب ، العد البكتيري هو رقم X 10 c / gm ، حيث c = عامل التخفيف. لتقنية لوحة الانتشار ، عدد البكتيريا هو رقم X10 ج + 1 / جم ، حيث ج = عامل التخفيف. يتم تحويل الرقم إلى منزلتين عشريتين على شكل (x.yz X 10 m). على سبيل المثال ، يتم التعبير عن 288 × 10 4 على أنها 2.88 × 10 6.

      4. إذا كان عدد المستعمرات ، في جميع التخفيفات ، أكثر من 300 ، يتم احتساب أعلى تخفيف وإذا كان أقل من 30 في جميع التخفيفات ، فيؤخذ في الاعتبار حساب أقل تخفيف. في كلتا الحالتين يتم تمثيل العدد على النحو التالي: الرقم التقديري X 10 c / gm أو ml لتقنية لوحة الصب والعدد المقدر X 10 c + 1 / gm أو ml لتقنية لوحة الانتشار.

      5. في حالة عدم ملاحظة أي مستعمرة في أي تخفيف تم تناوله ، يتم تمثيلها على النحو التالي: التخفيف المقدّر & lt1 x الأقل تخفيف.

      6. نظرًا لأن التخفيف المتسلسل يحدث على أساس 10 مرات ، فمن الواضح رياضيًا أنه لا يمكن أن يحتوي التخفيفان على مستعمرات بين 30 و 300. على سبيل المثال ، إذا كان 10 -3 يحتوي على 50 مستعمرة ، فيجب أن يحتوي 10-2 على 500 (أي & gt300 ) و10-4 يجب أن تحتوي على 5 مستعمرات (ie & lt30).

      ومع ذلك ، لا يحدث هذا في الواقع ، لأن البكتيريا لا تحدث كمحلول متجانس بل تحدث كتعليق في المخففات. إذا كان هناك تخفيفان بهما مستعمرات قابلة للعد (بين 30 و 300) ، فاحسب أولاً عدد وحدات تكوين المستعمرات / جم أو مل باستخدام كل تخفيف.

      إذا كانت إحدى القيمتين أكبر من ضعف الأخرى ، فقم بالإبلاغ عن القيمة الأقل. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فاخذ متوسط ​​القيمتين وأبلغ عن هذه القيمة.


      كيفية اكتشاف الكائنات الدقيقة في الغذاء: الأساليب والتقنيات | التكنولوجيا الحيوية

      يعمل الطعام كركيزة ممتازة لنمو أنواع مختلفة من الكائنات الحية الدقيقة. تدخل الكائنات الدقيقة في الغذاء وتنمو كملوثات أو إضافات مقصودة. قد يؤدي نمو الكائنات الدقيقة في الغذاء إلى إفساد جودة الغذاء ، كما أن استهلاك مثل هذه الأطعمة يؤدي إلى آثار صحية خطيرة على الإنسان والحيوان.

      يتم تقييم جودة الغذاء من حيث الخصائص الفيزيائية والكيميائية والحسية والميكروبيولوجية. يتم تقييم الخصائص الميكروبيولوجية من حيث الكائنات الحية الدقيقة - العفن ، والخميرة ، والبكتيريا ، والأوليات والفيروسات - الموجودة في الغذاء ، وخصائصها ، والقدرة على تغيير الجودة ، وتأثيرها على صحة المستهلك.

      من الضروري أن يتعرف علماء الأحياء الدقيقة على الكائنات الحية الدقيقة المهمة في الغذاء على الأقل إلى الحد الذي سيمكنهم من تحديد الأنواع الرئيسية بخصائصها. تعد معرفة الشخصيات العامة وطرق التعريف الأولية ضرورية للأشخاص الذين يعملون في علوم وتكنولوجيا الأغذية.

      حصر واكتشاف الكائنات التي تنقلها الأغذية:

      الكشف عن البكتيريا- الإشريكية القولونية ، السالمونيلا ، المطثية الوشيقية و Vibrio cliolerae

      هناك عدد من الخطوات المستخدمة لاكتشاف الفلورا الميكروبية ، وخاصة البكتيريا الموجودة في الطعام.

      أهم طرق الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة من الغذاء هي:

      1. الدراسات المجهرية - مورفولوجيا وتفاعلات تلطيخ

      3. الخصائص الثقافية

      5. تقنيات البيولوجيا الكيميائية والجزيئية

      6. تقنيات المناعة.

      طرق الثقافة والميكروسكوب وأخذ العينات :

      يعد فحص الغذاء لمعرفة وجود الكائنات الدقيقة وأنواعها وأعدادها ومنتجاتها هو الإجراء الأساسي في علم الأحياء الدقيقة الغذائي. يبحث اكتشاف الكائنات الحية الدقيقة بشكل أساسي عن العدد الإجمالي لنوع معين من الكائنات الحية الدقيقة في وزن جرام معين من الطعام.

      أهم الطرق الميكروبيولوجية القياسية المستخدمة في الكشف عن العدد الإجمالي للكائنات الحية الدقيقة في الغذاء هي: 1. العد المجهري المباشر (DMC) 2. عدد الألواح الهوائية (APC) أو عدد الصفائح القياسية (SPC) 3. الأرقام الأكثر احتمالًا (MPN) 4. عد مستعمرة المجهر 5. قطرات أجار 6. فيلم جاف 7. تقليل الصبغة & # 8211 اختبار MBRT 8. أنابيب لفة.

      1. العد المجهري المباشر (DMC):

      هذه الطريقة هي طريقة بسيطة وسريعة للغاية لتحديد الشكل المورفولوجي الأولي وعد البكتيريا والعفن. تصنف البكتيريا شكليا إلى مجموعات مختلفة.

      هذه هي كائن حي على شكل دائري.

      الأنواع المختلفة من الكوتشي هي:

      Cocci في زوج على سبيل المثال النيسرية البنية (الكائن المسبب لمرض السيلان) ، النيسرية السحائية (الكائن المسبب لالتهاب السحايا).

      مرتبة Cocci في مجموعة من أربع خلايا ، على سبيل المثال Micrococcus sps ، Pediococcns sps.

      مرتبة Cocci في مجموعة من ثماني خلايا ، مثل Methanosarcina sps.

      يكون مستوى انقسام الخلية دائمًا في اتجاه واحد ، على سبيل المثال العقدية البرازية.

      بسبب مستوى انقسام الخلايا لديهم أكثر من اتجاه واحد على سبيل المثال المكورات العنقودية.

      هذه هي بكتيريا على شكل قضيب.

      العصيات في زوج ، على سبيل المثال الكلبسيلة الرئوية

      يتم ترتيب العصيات في سلاسل طويلة ، على سبيل المثال عصيات الجمرة الخبيثة

      C. البكتيريا متعددة الأشكال:

      ليس للبكتيريا شكل محدد فهي تفتقر إلى جدار الخلية ، على سبيل المثال. الميكوبلازما الرئوية

      د. سبيريلوم (حلزوني الشكل):

      هي بكتيريا سميكة ، بطيئة ، قصيرة لولبية الشكل ، على سبيل المثال Azospirillum sps.

      وهي عبارة عن بكتيريا رقيقة وطويلة الحلزونية أو حلزونية الشكل ، على سبيل المثال. & # 8211 اللولبية الشاحبة ، Helicobacter pylori ، Leptospira icterohaemorrhagiae.

      هذه هي قضبان منحنية ، على سبيل المثال ضمة الكوليرا

      يتكون DMC من عمل مسحات من عينات الطعام أو الثقافات على شريحة مجهرية ، وتلطيخ بصبغة مناسبة ، وعرض الخلايا وعدها بمساعدة المجهر (هدف الغمر بالزيت). تعتبر البقع البسيطة مع أي صبغات أساسية هي أبسط طريقة للكشف عن الكائنات الحية الدقيقة وتعدادها وخاصة البكتيريا والخميرة.

      لكن التلوين التفاضلي مثل صبغة الجرام ، والبقع الحمضية السريعة ، وتلطيخ الكبسولة ، وتلطيخ جدار الخلية ، وما إلى ذلك ، هي طريقة أكثر موثوقية لأنها لا تعطي فقط عدد الميكروبات ولكنها تعطي أيضًا أنواعًا من البكتيريا الموجودة في الطعام.

      في حالة الفطريات ، يعد تلطيخ قطن اللاكتوفينول باللون الأزرق هو أبسط طريقة مناسبة للكشف عن القوالب وتعدادها. تُستخدم DMCs على نطاق واسع في صناعة الألبان لتقييم الجودة الميكروبية للحليب الخام ومنتجات الألبان الأخرى.

      هناك ثلاثة أنواع رئيسية من طرق العد المجهري المباشر:

      تم تطويره بواسطة R. السلالة (عدد السلالات). يتم فرد العينة (حوالي 0.0 1 مل) على 1 سم 2 من شريحة مجهرية. يتم تجفيف مسحة الحليب وتلطيخها بصبغة نيومان لامبيرت لطخة حليب الميثيلين الأزرق. تعمل هذه البقعة على إصلاح اللطاخة ، وتذيب كريات الدهون وتلطخ البكتيريا بأزرق الميثيلين. ثم يتم ملاحظة الانزلاق تحت عدة حقول مجهرية مغمورة بالزيت.

      يتم تحديد عدد الكائنات الحية في الحليب بناءً على الحسابات التالية ، وهي تتم على النحو التالي:

      مساحة مجال مجهر واحد = 0.02 مم 2.

      المساحة التي تنتشر عليها عينة الحليب على الشريحة = 1 سم 2 أو 100 مم 2

      بعد ذلك ، عدد الحقول الممكنة تحت العدسة = 100 مم 2 /0.02 مم 2 = 5000 حقل

      هذا العدد من الحقول هو 0.01 مل من الحليب. ومع ذلك ، يتم التعبير عن العد النهائي كرقم بكتيري لكل مل من العينة. وبالتالي ، يجب ضرب العامل في 100 ، أي 5000 × 100 = 500000

      هذا هو عامل المجهر.

      على سبيل المثال & # 8211 20 حقلاً أنتجت متوسط ​​0.4 بكتيريا لكل حقل. بعد ذلك ، سيكون العد البكتيري النهائي 0.4 × 500000 (عامل المجهر) = 200000 بكتيريا لكل مل من عينة الحليب.

      2. طريقة الشرائح باستخدام INT:

      تم تطوير طريقة الشرائح لاكتشاف وتعداد الخلايا القابلة للحياة. تستخدم الطريقة استخدام ملح التيرازوليوم (p-iodophenyl-3-p-nitrophenyl) -5-phenyl tetrazolium chloride (INT). في هذه الطريقة ، يتم تعريض الخلايا لـ INT المعقم بالفلتر لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية في حمام مائي متبوعًا بالترشيح على أغشية 0.45 ميكرومتر. بعد تجفيف الأغشية لمدة 10 دقائق عند 50 درجة مئوية ، يتم تثبيت الأغشية الخاصة في زيت بذرة القطن ويتم عرضها مع وضع الغطاء في مكانه. تم العثور على هذه الطريقة لتكون فعالة للمزارع النقية من البكتيريا والخمائر.

      هذه طريقة شريحة مجهرية تم تطويرها بواسطة BJ Howard في عام 1911 بشكل أساسي لغرض مراقبة منتجات الطماطم. تتضمن هذه الطريقة الكشف عن الفطريات وخاصة العفن. تتطلب الطريقة استخدام غرفة خاصة (شريحة) مصممة لتعداد الفطريات الفطرية. من خلال هذه الطريقة يمكننا تحديد جميع القوالب المسؤولة عن تلف الفواكه والخضروات.

      مزايا DMC هي أنها سريعة وبسيطة ، ويمكن تقييم مورفولوجيا الخلية وتفسح المجال لمجسات الفلورسنت لتحسين الكفاءة.

      يحتوي DMS على العديد من العيوب أيضًا. إنها طريقة مجهرية ، وبالتالي فهي مجهد للمحلل ، يتم تعداد كل من الخلايا القابلة للحياة وغير القابلة للحياة ، ولا يمكن دائمًا تمييز جزيئات الطعام عن الكائنات الحية الدقيقة ، ولا يتم توزيع الخلايا الميكروبية بشكل موحد بالنسبة للخلايا الفردية والكتل ، وبعض الخلايا لا تأخذ البقعة جيدًا وقد لا يتم احتسابها وتكون أعداد DMC أعلى دائمًا من أعداد SPC.

      في هذه الطريقة ، يتم مزج أجزاء من عينات الطعام أو تجانسها ، وتخفيفها بشكل متسلسل في مواد مخففة مناسبة ، ومطلية في أو على وسط أجار مناسب وتحضينها عند درجة حرارة مناسبة لفترة زمنية معينة ، وبعد ذلك يتم عد جميع المستعمرات المرئية باستخدام عداد مستعمرة . تعد SPC أهم طريقة لتحديد عدد الخلايا القابلة للحياة أو وحدات تكوين المستعمرات (CFU) في منتج غذائي.

      تحدد SPC العوامل التالية:

      (ط) طريقة أخذ العينات والطلاء.

      (2) طبيعة ونوع وتوزيع الكائنات الحية الدقيقة في عينة الغذاء.

      (3) طبيعة ونوع المواد الغذائية.

      (4) نتائج التقييم المسبق للمنتج الغذائي.

      (5) المحتويات الغذائية لوسط الطلاء.

      (6) درجة حرارة الحضانة والوقت.

      (7) الرقم الهيدروجيني ، النشاط المائي (أث) ، وإمكانية اختزال الأكسدة (Eh) لوسط الطلاء.

      (8) نوع المخففات المستخدمة في تحضير عينات الطعام.

      (9) العدد النسبي للكائنات الحية في عينة الغذاء.

      (10) الوجود والتنافس بين الكائنات الحية الدقيقة في الغذاء.

      يمكن إجراء SPC بطريقتين:

      (ط) طريقة لوحة الانتشار:

      في طريقة لوحة الانتشار ، يتم استخدام ألواح أجار مسبقة الصب ومصلبة ذات أسطح جافة. يتم تخفيف عينات الطعام بشكل متسلسل ويتم أخذ اللقاح 0.1 مم باستخدام ماصة معقمة وتوزيعها بالتساوي على سطح أجار. يتم توزيع اللقاح على سطح أجار بمساعدة قضيب زجاجي مثني.

      تتطور الخلايا المشتتة إلى مستعمرات معزولة تسمى وحدات تكوين المستعمرات (CFU). لأن عدد المستعمرات يجب أن يساوي عدد الكائنات الحية في عينة الغذاء ويمكن استخدام لوحات الانتشار لحساب السكان الميكروبيين في عينة الغذاء.

      يوفر الطلاء السطحي مزايا في تحديد عدد العوامل النفسية الحساسة للحرارة في منتج غذائي لأن الكائنات الحية لا تتلامس مع الأجار الذائب. إنها طريقة الاختيار عندما تكون ميزات المستعمرة مهمة لتعريفها المفترض ولأغلب الوسائط الانتقائية. من الواضح أن الأيروبس الصارم يفضله الطلاء السطحي ، لكن الكائنات الحية الدقيقة تميل إلى النمو بمعدل أبطأ.

      عيوب طلاء السطح هي مشكلة الموزعات (خاصة عندما لا يكون سطح الآجار جافًا بشكل كافٍ قبل الطلاء) وازدحام المستعمرات ، مما يجعل العد أكثر صعوبة.

      يتم تخفيف عينة الطعام الأصلية عدة مرات لتقليل عدد الميكروبات بدرجة كافية للحصول على مستعمرات منفصلة عند الطلاء. ثم يتم خلط كميات صغيرة ، حوالي 1 مل من عدة عينات مخففة مع أجار سائل تم تبريده إلى حوالي 45 درجة مئوية ، وتصب المخاليط على الفور في أطباق ثقافة معقمة.

      بعد تصلب الأجار ، يتم إصلاح كل خلية في مكانها وتشكل مستعمرة فردية (CFU). يتم عد اللوحات التي تحتوي على ما بين 30 و 300 مستعمرة. إجمالي عدد المستعمرات يساوي عدد الكائنات الحية الدقيقة القابلة للحياة في العينة المخففة. يمكن أيضًا استخدام المستعمرات التي تنمو على السطح لتلقيح وسط جديد وإعداد ثقافات نقية.

      الخطوات الأساسية لإعداد عينات الطعام للكشف عن الكائنات الحية الدقيقة هي التجانس.

      أهم أنواع أجهزة تجانس الغذاء هي:

      تم تطويره في إنجلترا بواسطة Sharpe and Jackson ويعتبر هذا الجهاز من أفضل الطرق لمجانسة الطعام للطلاء والتعداد. جهاز Stomacher هو جهاز بسيط يعمل على تجانس العينات في كيس بلاستيكي خاص عن طريق الضرب القوي لمجاديف. تؤدي تأثيرات القصف على قص عينات الطعام إلى إطلاق الكائنات الحية الدقيقة في المواد المخففة.

      (2) خلاط عالي السرعة:

      يساعد على تجانس المواد الغذائية بشكل فعال عن طريق الخلاط عالي السرعة ويتم إطلاق الكائنات الحية الدقيقة من الطعام.

      إنها الطريقة الشائعة لمجانسة الطعام. يؤدي اهتزاز عينات الطعام إلى إطلاق الكائنات الدقيقة في مواد مخففة.

      إنه جهاز ميكانيكي يوزع اللقاح السائل على سطح صفيحة دوارة تحتوي على وسط أجار مناسب مصبوب ومتصلب. يتم تعداد المستعمرات على لوحات محضرة بطبق حلزوني باستخدام شبكة عد خاصة. اعتمادًا على الكثافة النسبية للمستعمرات ، يتم حساب المستعمرات التي تظهر في منطقة محددة أو أكثر من الشبكة المتراكبة.

      أغشية ذات حجم مسام ستحتفظ بالبكتيريا (بشكل عام 0.45 و ميكرومتر) ولكنها تسمح بمرور الماء أو المادة المخففة. يتم ترشيح حجم معين من عينة الطعام من خلال الغشاء ويوضع الغشاء على صفيحة أجار أو وسادة ماصة مشبعة بوسط المزرعة.

      يتم تحضين الأغشية جنبًا إلى جنب مع الصفائح ويتم تعداد المستعمرات. يتم عرض الكائنات الحية التي تم جمعها على الغشاء وحسابها مجهريًا بعد تلطيخ الغشاء وغسله ومعالجته بشكل مناسب لجعله شفافًا. هناك نوعان من الأغشية يمكن استخدامهما في المرشحات متعددة الأسطح والمرشحات ميليبور.

      هذه الطرق مناسبة بشكل خاص للعينات التي تحتوي على عدد قليل من البكتيريا. على الرغم من أنه يمكن تمرير كميات كبيرة نسبيًا من الماء عبر غشاء دون انسداده ، يمكن استخدام عينات صغيرة فقط من متجانسات مخففة من أطعمة معينة لغشاء واحد.

      تم تحسين الكفاءة الكلية لطرق الترشيح الغشائي لتحديد أعداد الميكروبات عن طريق العد المجهري المباشر عن طريق إدخال الأصباغ الفلورية. استخدام الأصباغ الفلورية والمجاهر epifluorescent لتعداد البكتيريا الموجودة في المياه التي تم إدخالها مؤخرًا. يتكون الغشاء من مرشحات النيتروسليلوز أو مرشحات النواة من البولي كربونات. يوفر الثاني ميزة الاحتفاظ بجميع البكتيريا فوق الفلتر. هناك أنواع عديدة من تقنيات الترشيح الغشائي التي تم تطويرها لتعداد البكتيريا.

      أهم الأنواع موضحة أدناه:

      تستخدم تقنية مرشح Epifluorescent المباشر (DEFT) الأصباغ الفلورية والفحص المجهري الفلوري وهي طريقة سريعة لتعداد الكائنات الحية الدقيقة في الطعام. في هذه الطريقة ، يتم أولاً تجانس عينة الطعام وتخفيفها وتصفيتها من خلال مرشح نايلون 5 ميكرومتر ، ثم يتم جمع المرشح ومعالجته بـ 2 مل من Triton X-100 و 0.5 مل من التربسين.

      سوف يكسر التربسين الخلايا الجسدية ويمنع انسداد المرشحات. يتم تمرير المرشح المعالج من خلال غشاء بولي كربونات بحجم 0.6 ميكرومتر ويكون المرشح ملطخًا ببرتقال أكريدين. بعد التجفيف ، يتم تعداد الخلايا الملطخة بواسطة الفحص المجهري epifluorescence ويتم حساب عدد الخلايا لكل جرام بضرب متوسط ​​العدد لكل حقل بواسطة عامل المجهر.

      Microcolony-DEFT هو نوع مختلف من DEFT يسمح للشخص بتحديد الخلايا القابلة للحياة فقط. يتم ترشيح متجانسات الطعام من خلال أغشية DEFT ، وتوضع على سطح وسط استنبات مناسب ويتم تحضينها لتطوير المستعمرات الدقيقة. يمكن استخدام الحضانة لمدة ثلاث ساعات للبكتيريا سالبة الجرام وحضانة لمدة 6 ساعات لإيجابيات الجرام. يجب أن ينظر إلى المستعمرات الدقيقة التي تتطور بالمجهر.

      في شكل آخر ، تم ابتكار طريقة ميكروسكوبية مستعمرة متناهية الصغر تجمع بين DEFT ومرشح غشاء شبكي كاره للماء (HGMF). بهذه الطريقة ، يتم ترشيح العينات المعالجة بالمنظفات غير الإنزيمية من خلال أغشية البولي كربونات النوكليوبوري ، والتي يتم نقلها إلى سطح وسط أجار انتقائي ويتم تحضينها لمدة 3 أو 6 ساعات للبكتيريا سالبة الجرام أو إيجابية الجرام كما هو الحال بالنسبة للبكتيريا المستعمرة الدقيقة. يتم تلطيخ الأغشية بعد ذلك ببرتقال أكريدين ويتم تعداد المستعمرات الدقيقة بواسطة الفحص المجهري epifluorescence.

      تم تطوير تقنية مرشح غشاء الشبكة الكارهة للماء (HGMF) بواسطة Sharpe و Michaud وتستخدم لتعداد الكائنات الحية الدقيقة من مجموعة متنوعة من المنتجات الغذائية. تستخدم الطريقة نوعًا خاصًا من المرشحات يتكون من 1600 شبكة شمعية على مرشح غشاء واحد يقيد النمو وحجم المستعمرة بالشبكات الفردية. باستخدام مرشح واحد من 10 إلى 9 × 10 4 خلايا يمكن تعدادها بواسطة إجراء MPN ويمكن أن يكون التعداد آليًا.

      يمكن استخدامه لتعداد جميع وحدات CFU أو مجموعات محددة مثل الكائنات الحية المؤشر وأنواع أخرى من البكتيريا والفطريات. في تطبيق نموذجي ، يتم ترشيح 1 مل من عينة طعام متجانسة 1:10 من خلال غشاء ويتم وضع الغشاء على وسط أجار مناسب للحضانة بين عشية وضحاها لتنمية المستعمرة. يتم تعداد الشبكات التي تحتوي على المستعمرات ويتم حساب MPN. تسمح هذه الطريقة بترشيح ما يصل إلى 1 غرام من الطعام لكل غشاء.

      يعد رصد وكشف الكائنات الدقيقة المسببة للأمراض والكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض جزءًا رئيسيًا من علم الأحياء الدقيقة الصحية. تنجم مجموعة واسعة من الأمراض الفيروسية والبكتيرية والأولية عن تلوث المياه بمخلفات البراز البشرية. على الرغم من أنه يمكن الكشف عن العديد من هذه العوامل الممرضة بشكل مباشر ، فقد استخدم علماء الأحياء المجهرية البيئية بشكل عام كائنات مؤشرة كمؤشر لتلوث المياه المحتمل بواسطة مسببات الأمراض البشرية.

      تُعرَّف القولونيات على أنها بكتيريا سالبة الجرام ، وغير مبوغة ، ولا هوائية اختيارية ، على شكل قضيب تخمر اللاكتوز بتكوين غاز في غضون 48 ساعة عند 35 درجة مئوية.

      فيما يلي من بين المعايير المقترحة لكائنات المؤشر:

      (ط) يجب أن تكون بكتيريا المؤشر مناسبة لتحليل جميع أنواع المياه & # 8211 صنبور ، نهر ، أرض ، محجوز ، ترفيهي ، مصب ، بحر ، ونفايات.

      (2) يجب أن تكون هذه الكائنات موجودة حيثما توجد مسببات الأمراض المعوية.

      (3) يجب أن تعيش البكتيريا المؤشر لفترة أطول من أصعب مسببات الأمراض المعوية.

      (4) لا ينبغي أن تتكاثر البكتيريا المؤشر في المياه الملوثة وتنتج قيمة متضخمة.

      (5) يجب أن يكون لإجراء الفحص للمؤشر خصوصية كبيرة بمعنى آخر ، يجب ألا تعطي البكتيريا الأخرى نتائج إيجابية. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يكون للإجراء حساسية عالية وأن يكتشف المستويات المنخفضة من المؤشر.

      (6) يجب أن تكون طريقة الاختبار سهلة التنفيذ.

      (7) يجب أن يكون المؤشر غير ضار بالبشر.

      (8) يجب أن يكون لمستوى البكتيريا المؤشر في المياه الملوثة علاقة مباشرة بدرجة التلوث البرازي.

      اختبار MPN هو الطريقة الأكثر استخدامًا لمعرفة مدى صلاحية الماء للشرب عن طريق اختبار عدد البكتيريا القابل للحياة. تم تقديم هذه الطريقة بواسطة مكرادي في عام 1915.

      تضمن الاختبار الأصلي لبكتيريا القولونيات الذي تم استخدامه لتلبية هذا التعريف الاختبارات الافتراضية والمؤكدة والمكتملة. يتم تنفيذ الخطوة الافتراضية عن طريق أنابيب مُلقحة بثلاثة أحجام مختلفة من العينات لإعطاء تقدير للعدد الأكثر احتمالية (MPN) من القولونيات في الماء.

      تتطلب العملية الكاملة ، بما في ذلك الاختبارات المؤكدة والمكتملة ، ما لا يقل عن 4 أيام من الحضانات والتحويلات. لذلك ، يجب اختبار الماء لمعرفة وجود القولونيات البرازية. هذه القولونيات مشتقة من أمعاء الحيوانات ذوات الدم الحار ، والتي يمكن أن تنمو عند درجة حرارة أكثر تقييدًا تبلغ 44.5 درجة مئوية.

      يتم بعد ذلك زرع ثلاث قسامات أو تخفيفات متسلسلة في 9 أو 15 أنبوبًا من وسط مناسب لطريقة الأنابيب الثلاثة أو الخمسة ، على التوالي. يتم تحديد عدد الكائنات الحية في العينة الأصلية باستخدام جداول MPN القياسية. إنها ليست طريقة دقيقة لتحليل فترات الثقة 95٪ لنطاق اختبار ثلاثي الأنابيب من 21 إلى 395.

      4. حساب مستعمرة المجهر:

      إنها طريقة بسيطة لاكتشاف عدد الميكروبات في مجموعة متنوعة من الأطعمة التي تتضمن عد المستعمرات التي تطورت عبر شريحة ميكروية تتكون من طبقة رقيقة من وسط المزرعة. يتم دهن 0.1 مل من خليط الحليب أجار على مساحة 4 سم 2 على شريحة زجاجية.

      بعد الحضانة والتجفيف والتلطيخ ، يتم عد المستعمرات الدقيقة بمساعدة المجهر. في طريقة أخرى ، يتم خلط 2 مل من الآجار المذاب مع 2 مل من الحليب الدافئ و 0.1 مل من الآجار الملقح يتم توزيعه على مساحة 4 سم 2. ثم يتم عرض الشريحة بهدف 16 ملم من المجهر بعد التلوين.

      يتم تخفيف تجانس الطعام في أنابيب من أجار ذائب. لكل عينة طعام ، يتم استخدام ثلاثة أنابيب من أجار ، يتم تلقيح الأنبوب الأول بـ 1 مل من الطعام المتجانس. بعد الخلط الصحيح ، انقل خطًا من 5 × 0.1 مل قطرات إلى قاع طبق بتري فارغ بواسطة ماصة شعيرية معقمة.

      باستخدام نفس الماصة الشعرية ، يتم نقل ثلاث قطرات (0.1 مل) من الأنبوب الأول سعة 9 مل إلى الأنبوب الثاني ، بعد خلط خط آخر من 5 × 0.1 مل قطرات توضع بجوار الأول. تتكرر هذه الخطوة للأنبوب الثالث من أجار. يتم تحضين أطباق بتري التي تحتوي على قطرات أجار لمدة 24 ساعة ويتم تعداد المستعمرات.

      هذه الطريقة موثوقة في تعداد الكائنات الحية الدقيقة الموجودة في اللحوم والخضروات مقارنة بأعداد الألواح التقليدية الأخرى التي كانت تعداد القطيرات من اللحم المفروم أعلى قليلاً من عدد الأطباق. كانت الطريقة أسرع بنحو ثلاث مرات وأعطت الحضانة لمدة 24 ساعة أعدادًا مساوية لتلك التي تم الحصول عليها بعد 48 ساعة من خلال عدد الصفائح التقليدية.

      تتضمن طريقة الفيلم الجاف استخدام غشاءين بلاستيكيين مثبتين معًا على جانب واحد ومغلفين بمكونات وسط استزراع وعامل جل قابل للذوبان في الماء البارد لفيلم بيتريفيلم محدد. للاستخدام ، يتم وضع 1 مل من المادة المخففة بين الغشاءين وتوزع على منطقة المغذيات بالضغط بجهاز خاص ذو سطح مستو. بعد الحضانات ، تظهر المستعمرات الدقيقة باللون الأحمر على الفيلم غير الانتقائي بسبب وجود صبغة تترازوليوم في مرحلة المغذيات. توجد طرق بيتريفيلم للكشف عن مجموعات معينة وتعدادها ، مثل القولونيات.

      7. تقليل الصبغة & # 8211 اختبار MBRT:

      اختبار تقليل الصبغة هو تقنية شائعة تستخدم للكشف عن الكائنات الحية الدقيقة من الطعام. يتم استخدام صبغتين بشكل شائع في هذا الإجراء لتقدير عدد الكائنات الحية القابلة للحياة في المنتجات المناسبة: الميثيلين الأزرق وريسازورين. لإجراء اختبار تقليل الصبغة ، يتم تحضير المادة الطافية للطعام وإضافتها إلى المحاليل القياسية لأي صبغة للاختزال من الأزرق إلى الأبيض لأزرق الميثيلين ومن الأزرق الأردواز إلى الوردي أو الأبيض للريسازورين. يتناسب وقت حدوث تقليل الصبغة عكسياً مع عدد الكائنات الحية في العينة.

      في دراسة لتقليل resazurin كطريقة سريعة لتقييم تلف اللحم البقري المفروم ، والتقليل إلى الحالة عديمة اللون ، ودرجات الرائحة ، و SPC. تتمثل إحدى مشكلات استخدام تقليل الصبغة في بعض الأطعمة في وجود مواد مختزلة متأصلة.

      اختبارات تقليل الصبغة لها تاريخ طويل من الاستخدام في صناعة الألبان لتقييم الجودة الميكروبية الشاملة للحليب الخام. يسمى هذا الاختبار MBRT (اختبار تقليل الميثيلين الأزرق). في هذا الاختبار ، نكتشف عدد البكتيريا المسؤولة عن تقليل الصبغة. إذا كانت العينة تحتوي على عدد أكبر من الكائنات الحية الدقيقة. سوف يقلل من معدل الميثيلين الأزرق بشكل أسرع. يتغير لون أزرق الميثيلين من الأزرق إلى الأبيض يشير إلى نتيجة إيجابية. إذا تم تقليل الصبغة ببطء شديد ، فهذا يشير إلى أن عدد الكائنات الحية الدقيقة المختزلة يكون أقل في هذه العينة.

      تتمثل مزايا هذا الاختبار في أنها بسيطة وسريعة وغير مكلفة ، والخلايا القابلة للحياة هي الوحيدة التي تعمل على تقليل الأصباغ بشكل فعال. العيوب هي أن الكائنات الحية لا تقلل الصبغات بالتساوي ، ولا تنطبق على عينات الطعام التي تحتوي على إنزيمات مختزلة.

      الدرجة 1 & # 8211 ممتازة ، لم يتم إزالة اللون خلال 8 ساعات.

      الدرجة 2 & # 8211 جيد ، إزالة اللون في أقل من 8 ساعات ولكن ليس أقل من 6 ساعات.

      الدرجة 3 & # 8211 عادل ، إزالة اللون في أقل من 6 ساعات ولكن ليس أقل من ساعتين.

      فئة 4 & # 8211 رديئة ، زوال اللون في أقل من ساعتين.

      تستخدم الأنابيب أو الزجاجات ذات الأحجام المختلفة في هذه الطريقة. يتم إضافة كمية معروفة من الأجار المذاب والمُلقح إلى الأنبوب ويتم ترسيخه كطبقة رقيقة داخل الوعاء. بعد الحضانة المناسبة ، تحسب المستعمرات عن طريق تدوير الوعاء. لقد وجد أنه طريقة ممتازة لتعداد اللاهوائيات الصعبة.

      تقنيات البيولوجيا الكيميائية والجزيئية :

      يعتمد الاكتشاف الإشعاعي للكائنات الدقيقة على دمج مستقلب يحمل علامة C 14 في وسط نمو بحيث عندما تستخدم الكائنات الحية هذا المستقلب ، فإن 14 CO2 يتم إطلاقه وقياسه باستخدام النشاط الإشعاعي.

      ثلاثي فوسفات الأدينوزين (ATP) هو المصدر الأساسي للطاقة في جميع الخلايا الحية. يختفي في غضون ساعتين بعد موت الخلية ، وتكون الكمية لكل خلية ثابتة بشكل عام ، بقيم تتراوح من 10 -18 إلى 10 -17 مولًا لكل خلية بكتيرية. يمكن معادلة الاستخراج الكامل والقياس الدقيق لـ ATP الخلوي بمجموعات فردية من الكائنات الحية الدقيقة بنفس الطريقة العامة مثل السموم الداخلية للبكتيريا سالبة الجرام.

      واحدة من أبسط الطرق لقياس ATP هي عن طريق استخدام نظام لوسيفيرين لوسيفيراز اليراع. في وجود ATP ، ينبعث لوسيفيراز الضوء ، والذي يتم قياسه باستخدام مقياس اللمعان. كمية الضوء التي تنتجها اليراع لوسيفيراز تتناسب طرديا مع كمية ATP المضافة.

      تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن السمية المعوية E. coli و Vibrio و Clostridium وما إلى ذلك ، وهذه الطريقة هي تقنية أنيقة لتحديد العامل الممرض عن طريق تضخيم الحمض النووي الخاص به باستخدام مادة أولية محددة.

      يتكون مسبار الحمض النووي من تسلسل الحمض النووي للكائن الحي محل الاهتمام والذي يمكن استخدامه للكشف عن تسلسل الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي المتماثل. يجب أن يتم تهجين الحمض النووي للمسبار مع الحمض النووي للسلالة.

      يجب تسمية المسبار بالنظائر المشعة أو الأصباغ الفلورية. في هذه الطريقة يتم تحضير جزء من الحمض النووي لكائنات مجهولة باستخدام إنزيمات التقييد. يتم فصل الأجزاء بواسطة الرحلان الكهربي لهلام الاغاروز ونقلها إلى مرشح نترات السليلوز وتهجينها إلى المسبار ذي العلامات الإشعاعية. بعد الغسيل ، يمكن الكشف عن وجود الحمض النووي المشع إشعاعيًا عن طريق التصوير الشعاعي الذاتي.

      التفاعلات المصلية هي طريقة فعالة للكشف عن الكائنات الدقيقة المسببة للأمراض أو سمومها.

      تتم مناقشة الطرق المصلية الأكثر استخدامًا أدناه:

      يتم جعل الجسم المضاد لمستضد معين متوهجًا عن طريق اقترانه بمركب الفلوريسنت وعندما يتفاعل الجسم المضاد مع مستضده ، ينبعث معقد المستضد والجسم المضاد مضانًا ويمكن اكتشافه باستخدام مجهر مضان. العلامات الفلورية المستخدمة هي رودامين ب ، وفلورسين أيزوسيانات ، وفلورسين أيزوثيوسيانات ، وآخرها هو الأكثر استخدامًا.

      يمكن تنفيذ تقنية الأجسام المضادة الفلورية (FA) باستخدام أي من الطريقتين الأساسيتين. تستخدم الطريقة المباشرة مستضدًا وجسمًا مضادًا محددًا مقترنًا بالمركب الفلوري (مستضد مغطى بجسم مضاد محدد مع ملصق الفلورسنت).

      مع الطريقة غير المباشرة ، لا يقترن الجسم المضاد المتماثل مع ملصق الفلورسنت ، ولكن بدلاً من ذلك يتم تحضير جسم مضاد لهذا الجسم المضاد وإقرانه بطريقة غير مباشرة ، يكتشف المركب المسمى وجود الجسم المضاد المتماثل في الطريقة المباشرة ، ويكشف عن وجود المستضد.

      يعد استخدام علم الأمصال التخصيب (ES) طريقة أسرع لاستعادة السالمونيلا من الأطعمة من طريقة الاستزراع التقليدية. يتم إجراؤه في أربع خطوات: التخصيب المسبق في وسط غير انتقائي لمدة 18 ساعة تخصيب انتقائي في مرق سيلينيت-سيستين و / أو مرق رباعي التراثيونات لمدة 24 ساعة من التخصيب الاختياري في مرق M لمدة 6-8 ساعات أو 24 ساعة والتراص مع متعدد التكافؤ H antisera عند 50 درجة مئوية لمدة ساعة.

      اختبار Oxoid Salmonella السريع (OSRT) هو أحد أشكال ES. يتكون من وعاء استنبات يحتوي على أنبوبين ، يحتوي كل منهما على وسائط إثراء مجففة في الأجزاء السفلية ووسائط انتقائية مجففة في الأجزاء العلوية.

      يتم ترطيب الوسائط بالماء المقطر المعقم ويضاف وسط اختياري خاص من السالمونيلا إلى وعاء الاستزراع مع قرص مضاد حيوي نوفوبيوسين ، متبوعًا بـ 1 مل من ثقافة ما قبل التخصيب للعينة. بعد الحضانة عند 41 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، يتم فحص الوسائط في المقصورة العلوية (الوسائط الانتقائية) لكل أنبوب لتغيير اللون ، مما يشير إلى وجود السالمونيلا.

      ثالثا. اختبار السالمونيلا 1-2:

      يستخدم اختبار السالمونيلا 1-2 مرحلة شبه صلبة. يتم إجراء الاختبار في جهاز بلاستيكي مصمم خصيصًا يحتوي على غرفتين ، إحداهما للمرق الانتقائي والأخرى لوسط حركي غير انتقائي. بالإضافة إلى المكونات الانتقائية ، يحتوي الوسط غير الانتقائي على الأحماض الأمينية L-Serine ، والتي تعتبر انتقائية للسالمونيلا.

      بعد تلقيح الغرفة المتوسطة الانتقائية ، يتم تحضين الجهاز ، وخلال هذه الفترة تنتقل السالمونيلا المتحركة إلى الغرفة المتوسطة غير الانتقائية. يحتوي الوسط غير الانتقائي على أجسام مضادة سوطية ، وعندما تدخل الكائنات الحية المتحركة منطقة الجسم المضاد ، يتطور نطاق مناعي ، مما يشير إلى تفاعل الجسم المضاد مع المستضد.

      تتكون هذه التقنية من إضافة ملصق إشعاعي إلى مستضد ، مما يسمح للمستضد المسمى بالتفاعل مع الجسم المضاد الخاص به ، وقياس كمية المستضد التي تتحد مع الجسم المضاد عن طريق استخدام عداد لقياس النشاط الإشعاعي. تشير المقايسة المناعية الإشعاعية ذات المرحلة الصلبة (RIA) إلى الطرق التي تستخدم المواد الصلبة أو الأسطح التي ترتبط بها جزيئات أحادية الطبقة من الجسم المضاد كهربائياً.

      وتشمل المواد الصلبة المستخدمة البولي بروبلين والبوليسترين والبروماسيتيل سلولوز. تعد قدرة البوليمرات المطلية بالجسم المضاد على الارتباط بشكل خاص مع مستضدات التتبع المشعة أمرًا ضروريًا للمبدأ الأساسي لـ RIA في المرحلة الصلبة. عندما يتم غسل المستضد المسمى الحر ، تكون قياسات النشاط الإشعاعي كمية.

      إن مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA ، إنزيم im & shymunoassay ، أو EIA) هي طريقة مناعية مشابهة لـ RIA ولكنها تستخدم إنزيمًا مقترنًا بمولد ضد أو بجسم مضاد. يتم إجراء ELISA النموذجي مع مرحلة صلبة (بوليسترين) مغلفة بمستضد ومحتضنة بمضاد. بعد فترة الحضانة والغسيل ، تتم إضافة مادة بريبا موصوفة بالإنزيم وتخفيف الغلوبولين المناعي.

      بعد الغسل اللطيف ، يُقاس الإنزيم المتبقي في الأنبوب أو بئر الميكروتير لتحديد كمية الأجسام المضادة المحددة في الحالة الأولية. الإنزيم الشائع الاستخدام هو بيروكسيداز الفجل ويتم قياس وجوده عن طريق إضافة ركيزة البيروكسيديز.

      يتم التأكد من كمية الإنزيم الموجودة من خلال التحديد اللوني لركيزة الإنزيم. يتكون أحد أشكال ELISA الأساسية من & # 8220sandwich & # 8221 ELISA حيث يلزم أن يحتوي المستضد على موقعي ربط على الأقل. يتفاعل المستضد أولاً مع الجسم المضاد ذو المرحلة الصلبة الزائدة ، وبعد الحضانة والغسيل ، تتم معالجة مولد الضد المرتبط بجسم مضاد زائد. تُستخدم تقنية ELISA على نطاق واسع لاكتشاف وتحديد الكائنات الحية و / أو منتجاتها في الأطعمة

      تم استخدام طرق انتشار الهلام على نطاق واسع للكشف عن السموم البكتيرية والسموم المعوية وتقديرها. الطرق الأربعة الأكثر استخدامًا هي الأنبوب أحادي الانتشار (Oudin) ، والانتشار الميكروسليدي المزدوج ، وشريحة الأوتشرلونية الدقيقة ، والانتشار المناعي الكهربي. لقد تم استخدامها لقياس السموم المعوية للمكورات العنقودية و C. perfringens وسموم المطثية الوشيقية.

      تتطلب طرق نشر الهلام عمومًا ما لا يقل عن 24 ساعة للحصول على النتائج ولكن هذه الطريقة تؤدي إلى 2-4 ساعات. هناك نوعان من تراص الهيم: تثبيط التراص الدموي (HI) والتراص الدموي السلبي العكسي (RPH). على عكس طرق انتشار الهلام ، لا يلزم أن تكون المستضدات في شكل سريع التعجيل لهذين الاختبارين.

      في اختبار HI ، يتم الاحتفاظ بجسم مضاد محدد ثابتًا ويتم تخفيف السم المعوي (المستضد). بعد الحضانة لمدة 20 دقيقة ، تتم إضافة خلايا الدم الحمراء للأغنام المعالجة (SRBCs). يحدث التراص الدموي (HA) فقط عندما لا يكون الجسم المضاد مرتبطًا بمستضد. يتم منع (تثبيط) HA حيث يوجد السم في النسب المثلى مع الجسم المضاد. في

      يتم ربط الجلوبيولين المضاد للسموم RPH مباشرة بـ SRBCs ويستخدم للكشف عن السموم. عند إضافة مستحضرات التوكسين المخفف ، تتم قراءة اختبار HA بعد فترة الحضانة لمدة ساعتين. يحدث HA فقط عندما تحدث مستويات الأجسام المضادة المثلى للمستضد. لا يحدث HA في حالة عدم وجود سم أو سم معوي.


      حقوق النشر

      طرق العد الميكروبيولوجي هي الطرق المختبرية المقبولة المستخدمة لتقدير السكان الميكروبيين للمادة المختبرة. يتم استخدام هذه الإجراءات في جميع أنحاء صناعة الألبان ووكالات إنفاذ القانون لتحديد الجودة والكشف عن التلوث الجرثومي في الحليب الخام والمعالج. يتم تحقيق ذلك عن طريق اختبار عينات المنتجين والعينات المضمنة وعينات البيع بالتجزئة. منتجات الألبان المزروعة (على سبيل المثال ، اللبن الخاثر ، والحمض المخمر ، وما إلى ذلك) ، ومنتجات الألبان التي تضاف إليها الثقافات البكتيرية ، والمنتجات المحمضة لا يتم اختبارها عادةً لمعرفة المحتوى الميكروبي الكلي للتلف.

      طريقة العد الميكروبيولوجي الأكثر شيوعًا هي طريقة آجار العداد القياسية (SPC). تستخدم صناعة الألبان هذه الطريقة لتقدير التجمعات الميكروبية في معظم أنواع منتجات الألبان وعيناتها ولتحديد جودة ومصادر التلوث في مراحل متتالية من المعالجة. تقدر SPC ، وهي الطريقة المرجعية المعترف بها من قبل NCIMS والمحددة في قانون الحليب المبستر من الدرجة A ، عدد الميكروبات (البكتيريا الوسيطة والهوائية والاختيارية) للحليب الخام والمبستر ومنتجات الألبان.


      عدد اللوحات القياسية

      يقيّم اختبار تعداد الصفائح المعياري كلاً من البكتريا الهوائية والعفن الكلي والخمائر. يمكن إجراء عدد الصفائح عن طريق الترشيح الغشائي أو صب الألواح أو طرق نشر الألواح. هذا الاختبار مناسب لجميع المنتجات غير المعقمة ويوفر وسيلة معيارية لتحديد كثافة البكتيريا غيرية التغذية أو المحتوى الميكروبي للعينة.

      لاختبار العد الصفائح المعياري ، اعرض التعريفات الميكروبية للمنتجات الصيدلانية غير المعقمة أو المنتج Bioburden & # 8211 Medical Device للأجهزة الطبية.

      المعايير المعمول بها

      مواقع الاختبار

      مخطط الدراسة

      يجب أن تكون نتائج عدد الصفائح الخام لألواح الأجار القياسية في حدود 25 إلى 250 وحدة تشكيل مستعمرة (CFU) أو يتم الإبلاغ عنها كتقدير. يتراوح نطاق العد الموصى به لـ Aspergillus niger والمستعمرات الخيطية الأخرى بين 8 و 80 CFU لكل لوح. إذا لم يتم العثور على مستعمرات على اللوحات ، فيجب الإبلاغ عن النتيجة على أنها أقل من تخفيف العينة.

      تعرض جميع شاشات الاختبار التحكم البيئي والاختبار كما هو محدد بواسطة مستويات التنبيه والإجراءات الموضحة في الإجراء.تتم مقارنة أي مستعمرات تم العثور عليها على لوحات مراقبة الاختبار السلبي مع لوحات الاختبار لمعرفة ما إذا كان هناك تلوث موجود في نظام الاختبار. يتم ملاحظة جميع الملاحظات مع البيانات (على سبيل المثال ، المستعمرات التمثيلية). يراقب الاختبار الإيجابي ، عند الاقتضاء ، النمو.

      إجراء: يتم طلاء جزء من العينة أو التخفيف المناسب (التخفيضات) في ثلاث نسخ على فول الصويا كازين هضم أجار للفطريات. يتم نشر العينات بالتساوي بقضيب زجاجي معقم وثني. تُترك الألواح لتجف في درجة حرارة الغرفة ثم تُقلب وتُحضن.

      إذا كانت لديك أسئلة إضافية حول خدمات اختبار Standard Plate Count ، أو ترغب في استشارة الخبراء في Nelson Labs ، فما عليك سوى إرسال طلب إلينا أو الاتصال بنا على +1 (801) 290-7500.


      المؤلفون)

      سيرة شخصية

      Neusely da Silva هي باحثة علمية في معهد تكنولوجيا الأغذية (ITAL) ، وهي وكالة أبحاث حكومية في ولاية ساو باولو ، البرازيل. تخرجت في الهندسة الغذائية وحصلت على درجة الدكتوراه في علوم الأغذية من جامعة ولاية كامبيناس (UNICAMP ، البرازيل). مديرة المختبر المرجعي لعلم الأحياء الدقيقة في معهد تكنولوجيا الأغذية من 1995 إلى 2007 ، كانت مسؤولة عن اعتماد الفحوصات المخبرية وفقًا لمعيار ISO 17025. وهي مؤلفة أكثر من 70 منشورًا في مجال علم الأحياء الدقيقة للأغذية ومجالات أبحاثها الرئيسية هي علم وظائف الأعضاء البكتيرية وطرق الكشف عن البكتيريا المسؤولة عن الأمراض التي تنقلها الأغذية والبكتيريا المسؤولة عن فساد الغذاء.

      مارتا هيرومي تانيواكي ، دكتوراه ، باحثة علمية في معهد تكنولوجيا الأغذية (ITAL) في مركز الجودة وعلوم الغذاء في كامبيناس ، البرازيل. تخرجت في علم الأحياء وحصلت على درجة الدكتوراه في علوم وتكنولوجيا الأغذية من جامعة نيو ساوث ويلز بأستراليا. وهي مؤلفة لأكثر من 100 منشور في مجال علم الفطريات الغذائية والسموم الفطرية وعلم الأحياء الدقيقة للأغذية. وهي عضوة في الهيئة الدولية لعلم الفطريات الغذائية (ICFM) منذ عام 1997 وعضو الوفد البرازيلي في Codex Contaminants in Food (CCCF) منذ عام 2006 عضو الهيئة الدولية للمواصفات الميكروبيولوجية للأغذية (ICMSF) منذ عام 2010 وافتتاحيتها. مجلس أبحاث Myco¬toxin منذ عام 2012. مجالات بحثها الرئيسية هي: الفطريات والسموم الفطرية في الأغذية التنوع البيولوجي للفطريات السامة في الأطعمة ، وعلم وظائف الأعضاء الفطري وإنتاج السموم الفطرية ، والنهج متعدد الأطوار للنظم الحيوية لأنواع الرشاشيات.

      كانت Valéria Christina Amstalden Junqueira باحثة علمية في معهد تكنولوجيا الأغذية (ITAL) في مركز الجودة وعلوم الأغذية (CCQA) في كامبيناس ، SP ، البرازيل من عام 1988 إلى عام 2016 ومدير المختبر المرجعي للأحياء الدقيقة في ITAL من 2011 إلى 2015 تخرجت في علم الأحياء وحصلت على درجة الدكتوراه في تكنولوجيا الأغذية من جامعة ولاية كامبيناس (UNICAMP ، البرازيل) في مجال النظافة والتشريعات الخاصة بالأغذية. كانت عضوًا في الوفد البرازيلي في لجنة الدستور الغذائي المعنية بنظافة الأغذية (CCFH) منذ عام 2002. وتتركز أنشطتها البحثية الرئيسية على التحكم في الجودة الميكروبيولوجية للأغذية مع التركيز على البكتيريا اللاهوائية والكائنات الدقيقة المسببة للتلف للأطعمة المصنعة والميكروبيولوجية. جودة المياه والمشروبات غير الكحولية.

      نيليان فيراز دي أرودا سيلفيرا باحثة علمية في معهد تكنولوجيا الأغذية (ITAL) في مركز الجودة وعلوم الغذاء في كامبيناس بالبرازيل. وهي عالمة أحياء حاصلة على درجة الدكتوراه في تكنولوجيا الأغذية من جامعة ولاية كامبيناس (UNICAMP ، البرازيل) ، في مجال النظافة والتشريعات الخاصة بالأغذية. تتمثل مجالات بحثها الرئيسية في التحكم في الجودة الميكروبيولوجية للأغذية مع التركيز على الأسماك ومنتجاتها والخضروات المعالجة بالحد الأدنى والأطعمة المقدمة في الوجبات الجماعية ومنتجات اللحوم والجودة البكتريولوجية لمياه الشرب.

      مارغريت ميدوري أوكازاكي باحثة علمية في معهد تكنولوجيا الأغذية (ITAL) ، في مركز الجودة وعلوم الغذاء في كامبيناس ، البرازيل. تخرجت في الهندسة الغذائية وحصلت على درجة الماجستير في العلوم (ماجستير) في تكنولوجيا الأغذية من جامعة ولاية كامبيناس (UNICAMP ، البرازيل). وهي نائبة مدير المختبر المرجعي لعلم الأحياء الدقيقة في معهد تكنولوجيا الأغذية وتركز أنشطتها على مراقبة الجودة الميكروبيولوجية للأغذية والمياه والتدريب الفني الذي يركز على طرق الفحص الميكروبيولوجي.

      ريناتو أبيلار روميرو جوميز باحث علمي في معهد تكنولوجيا الأغذية (ITAL) ، كامبيناس ، البرازيل. تخرج في الهندسة الزراعية وحصل على درجة الماجستير في الهندسة الزراعية من جامعة فيكوسا الفيدرالية ، مع تخصص ماجستير في إدارة الأعمال. وهو حاليًا باحث في مركز تكنولوجيا الألبان التابع لمعهد تكنولوجيا الأغذية.


      شاهد الفيديو: تقدير الاحياء بطريقة التخفيف والعد بالاطباق (كانون الثاني 2022).