معلومة

11.7: تقييد طول جزء تعدد الأشكال - علم الأحياء


تقوم إنزيمات التقييد بقطع الحمض النووي في نقاط محددة منتجة مجموعة من أجزاء الحمض النووي ذات الطول المحدد بدقة. يمكن فصلها عن طريق الرحلان الكهربائي ، مع انتقال الأجزاء الأصغر إلى مسافة أبعد من الأجزاء الأكبر. يمكن تصور جزء أو أكثر من الشظايا باستخدام "مسبار" - جزيء من الحمض النووي أحادي السلسلة مكمل لسلسلة من النيوكليوتيدات في جزء أو أكثر من أجزاء التقييد ويكون مشعًا (أو فلورسنت). إذا واجهت المجسات تسلسلًا مكملًا للنيوكليوتيدات في عينة اختبار من الحمض النووي ، فإنها ترتبط به عن طريق الاقتران بقاعدة Watson-Crick وبالتالي تحددها. تعدد الأشكال هي اختلافات موروثة توجد بين الأفراد في السكان.

قدمت تعدد الأشكال لطول جزء التقييد (RFLPs) معلومات قيمة في العديد من مجالات علم الأحياء ، بما في ذلك فحص الحمض النووي البشري لوجود الجينات التي قد تكون ضارة ("الحالة 1") وتقديم أدلة لإثبات براءة أو احتمال ذنب ، المشتبه به في جريمة "بصمات" الحمض النووي ("القضية 3").

الحالة 1: فحص جين الخلية المنجلية

مرض الخلايا المنجلية هو اضطراب وراثي يقوم فيه كلا الجينين في المريض بتشفير الحمض الأميني فالين (Val) في الموضع السادس من سلسلة بيتا (betaس) من جزيء الهيموجلوبين. سلاسل بيتا "العادية" (إصدار تجريبيأ) لديك حمض الجلوتاميك في هذا الموقف. الاختلاف الوحيد بين الجينين هو استبدال T بـ A في الموضع الأوسط للكودون 6. وهذا يحول كودون GAG (لـ Glu) إلى كودون GTG لـ Val ويلغي التسلسل (CTGAGG ، الذي يمتد على الكودونات 5 و 6 و 7) يتعرف عليها ويقطعها أحد إنزيمات التقييد.

عندما عادي الجين (بيتاأ) مع الإنزيم وتفصل الشظايا عن طريق الرحلان الكهربي ، ويرتبط المسبار بـ قصيرة شظية (بين الأسهم الحمراء). ومع ذلك ، فإن الإنزيم لا يمكن أن يقطع جين الخلية المنجلية في هذا الموقع ، لذلك يعلق المسبار على جزء أكبر بكثير (بين الأسهم الزرقاء).

يوضح الشكل ( PageIndex {1} ) نسب عائلة يعاني ابنها الوحيد من مرض فقر الدم المنجلي. كان كل من والده ووالدته متغاير الزيجوت (مربع نصف ممتلئ ودائرة على التوالي) حيث كان لابد من إنتاج طفل مصاب (صندوق صلب). يتم وضع أنماط الرحلان الكهربائي لكل فرد من أفراد الأسرة تحتها مباشرة. لاحظ أن الطفلين متماثلين اللواقح (1 و 3) لديهما نطاق واحد فقط ، لكنهما أكثر كثافة لأنهما يحتويان على ضعف كمية الحمض النووي. في هذا المثال ، أدى تغيير نيوكليوتيد واحد إلى إنتاج RFLP. هذا سبب شائع جدًا لـ RFLPs والآن يُشار إلى هذه الأشكال المتعددة غالبًا باسم النوكليوتيدات المفردة أو النيوكلوتايد. (ومع ذلك ، ليست كل RFLPs تنشأ من SNPs.

كيف يمكن استخدام هذه الأدوات؟

عن طريق اختبار الحمض النووي للآباء المحتملين ، يمكن تحديد التركيب الجيني لهم ويمكن تحديد احتمالات إنجاب طفل مصاب. في حالة مرض فقر الدم المنجلي ، إذا على حد سواء الآباء متغاير الزيجوت بالنسبة للجينات ، هناك احتمال 1 من 4 أن ينجبوا طفلًا مصابًا بالمرض. يسمح بزل السلى وأخذ عينات من خلايا المشيمة بتطبيق نفس الأساليب على الحمض النووي للجنين في وقت مبكر من الحمل. يمكن للوالدين معرفة ما إذا كان الطفل الذي لم يولد بعد سيكون خاليًا من المرض أم لا. قد يختارون إجراء عملية إجهاض بدلاً من إحضار طفل مصاب إلى العالم.

ثلاث مشاكل:

  • تتنوع الطفرات التي تسبب معظم الأمراض الوراثية البشرية أكثر من الطفرة المفردة المرتبطة بمرض الخلايا المنجلية. يمكن أن تسبب أكثر من ألف طفرة مختلفة في جين التليف الكيسي المرض. من المحتمل أن يفشل مسبار أحدهم في تحديد ثانية. يمكن استخدام مزيج من المجسات ، واحد لكل من الطفرات الأكثر شيوعًا. ولكن تظل مشكلة "السلبيات الكاذبة" قائمة: الأشخاص الذين قيل لهم خطأً إنهم لا يحملون جينًا متحورًا.
  • هناك العديد من الأمراض التي تنتج عن عمل العديد من الجينات الطافرة معًا لإنتاج النمط الظاهري للمرض.
  • لا تزال هناك أمراض وراثية لم يتم اكتشاف جين لها بعد. حتى يتم تحديد مكان الجين واستنساخه وتسلسله ، لا يمكن إجراء أي مسبار لاكتشافه مباشرة. ومع ذلك ، فمن الممكن في بعض الأحيان العثور على "علامة" جينية يمكن أن تكون بمثابة بديل للجين نفسه. دعونا نرى كيف.

الحالة 2: فحص "علامة" RFLP

إذا كان RFLP معينًا مرتبطًا عادةً بمرض وراثي معين ، فيمكن استخدام وجود أو عدم وجود هذا RFLP لإرشاد الأشخاص حول مخاطر الإصابة بالمرض أو نقله. الافتراض هو أن الجين الذي يهتمون به حقًا يقع بالقرب من RFLP بحيث يمكن أن يكون وجود RFLP بمثابة بديل لجين المرض نفسه. لكن الأشخاص الذين يريدون الخضوع للاختبار لا يمكنهم ببساطة الخروج من الشارع. بسبب العبور ، قد يرتبط RFLP معين مع الجين الطافرة في بعض الناس ، مع أليله الصحي في الآخرين. وبالتالي ، من الضروري فحص ليس فقط المريض ولكن أكبر عدد ممكن من أفراد أسرة المريض.

ترتبط التحقيقات الأكثر فائدة لمثل هذا التحليل بتسلسل فريد من الحمض النووي ؛ أي ، تسلسل يحدث في مكان واحد فقط في الجينوم. غالبًا ما يكون هذا الحمض النووي غير معروف ، إن وجد. يمكن أن يكون هذا مفيدًا في الواقع لأن هذا الحمض النووي كان أكثر حرية في التحور دون الإضرار بالمالك. سيقوم المسبار بتهجين (الارتباط) أطوال مختلفة من الحمض النووي المهضوم في أشخاص مختلفين اعتمادًا على مكان مواقع قطع الإنزيم التي ورثها كل شخص. وبالتالي قد توجد مجموعة كبيرة ومتنوعة من الأليلات (تعدد الأشكال) في السكان. سيكون بعض الناس متماثلين الزيجوت ويكشفون عن فرقة واحدة ؛ سيكون الآخرون (على سبيل المثال ، جميع أفراد الأسرة الموضحين أدناه) متغاير الزيجوت مع إنتاج كل أليل نطاقه.

يوضح النسب في الشكل ( PageIndex {2} ) وراثة علامة RFLP عبر ثلاثة أجيال في عائلة واحدة. يوجد ما مجموعه 8 أليلات (مرقمة على يسار البقع) في العائلة. يتم وضع RFLPs لكل فرد من أفراد الأسرة مباشرة أسفل رمزه (المربعات) أو رمزها (الدوائر) وأرقام RFLP.

على سبيل المثال ، إذا كان كل من ورث RFLP 2 يعاني أيضًا من اضطراب وراثي معين ، ولا يعاني أي شخص يفتقر إلى RFLP 2 من هذا الاضطراب ، فإننا نستنتج أن جين المرض مرتبط ارتباطًا وثيقًا بهذا الاضطراب. إذا قرر الوالدان إنجاب طفل آخر ، يمكن أن تكشف الاختبارات السابقة للولادة ما إذا كان هذا الطفل عرضة للإصابة بالمرض. لكن لاحظ ، أن العبور أثناء تكوين الأمشاج يمكن أن يحرك RFLP إلى الأليل السليم. لذلك كلما زادت المسافة بين RFLP وموضع الجين ، قلت احتمالية التشخيص الدقيق.

الحالة 3: "كتابة" الحمض النووي

تحتوي كل خلية بشرية على 6 × 109 أزواج قاعدية من الحمض النووي. بعض من هذا يمثل جينات ترميز البروتين (على سبيل المثال ، لسلسلة بيتا من الهيموجلوبين) المتطابقة في نسبة كبيرة من الناس. لكن الامتدادات الطويلة من الحمض النووي لا تُشفِّر لأي شيء وهي حرة في التحور على نطاق واسع. يبدو من المؤكد أنه إذا تمكنا من قراءة التسلسل الكامل للحمض النووي في كل إنسان ، فلن نجد اثنين متطابقين (ما لم تكن العينات من أشقاء متطابقين ؛ أي مشتقة من زيجوت واحد).

لذا فإن الحمض النووي لكل شخص فريد من نوعه مثل بصمة الإصبع. هذه الحقيقة لم تفلت من مهن إنفاذ القانون والمحاماة. تحليل الحمض النووي ، يسمى كتابة الحمض النووي، يستخدم على نطاق واسع لتحديد المغتصبين وغيرهم من المجرمين ، وتحديد الأبوة ؛ أي ، من هو والد الطفل حقًا ، تحديد ما إذا كان المهاجر الذي يأمل فيه هو حقًا ، كما يدعي ، قريبًا مقربًا من السكان المقيمين بالفعل.

مثال ( PageIndex {1} ): اغتصاب مشتبه به

يوضح الشكل ( PageIndex {3} ) نتائج الاختبار في حالة اغتصاب. تم استخدام مجسين: أحدهما يكشف عن العصابات في الأعلى والآخر في الأسفل.

3

تم اختبار الحمض النووي من

  • إزالة السائل المنوي من مهبل ضحية الاغتصاب (الدليل رقم 2) ؛
  • بقعة السائل المنوي على ملابس الضحية (الدليل رقم 1) ؛
  • الحمض النووي للضحية نفسها (VICTIM) للتأكد من أن الحمض النووي لا يأتي من خلاياها ؛
  • الحمض النووي من اثنين من المشتبه بهم (المشتبه به رقم 1 ، المشتبه به رقم 2) ؛
  • مجموعة من أجزاء الحمض النووي ذات الطول المعروف والمتناقص (MARKER). إنها توفر مسطرة مضمنة لقياس المسافة الدقيقة التي تقطعها كل قطعة.
  • خلايا شخص سبق اختباره للتأكد من أن المجسات تعمل بشكل صحيح (CONTROL).

أحد أسس هذا الاختبار ، المشتبه به # 2 يمكن أن يكون بشكل واضح استبعد. لا تتطابق أي من عصاباته مع العصابات الموجودة في السائل المنوي.

يكون المشتبه به # 1 مذنب؟

لا يمكننا أبدا أن نكون متأكدين. أفضل ما يمكننا فعله هو تقدير احتمالية أن شخصًا آخر ، يتم اختياره عشوائيًا ، يمكن أن يوفر نفس بصمة الحمض النووي. كتقدير متحفظ ، يمكن العثور على أليل معين (نطاق) في 25 ٪ من الأشخاص الذين تم اختبارهم. احتمال تطابق عشوائي بين أليلين هو (0.25)2 أو 1 من 16. احتمال تطابق 6 أليلات ، كما في هذه الحالة ، هو (0.25)6 أو 1 في 4096. ومع ذلك ، لم يتم اختيار المشتبه به عشوائياً ، لذلك قد تشعر أن دليل الذنب قوي.

كلما استخدمت المزيد من المجسات ، زادت ثقتك في أنك حصلت على الرجل المناسب. على سبيل المثال ، إذا كشفت مجموعة من التحقيقات عن 14 نطاقًا في الحمض النووي للمشتبه به مطابق لتلك الموجودة في عينة السائل المنوي ، فإن احتمال أن يكون لديك الرجل الخطأ ينخفض ​​إلى أقل من 1 في 268 مليون (0.25)14 = 1 / 268،435،456 ، وهو ما يعادل تقريبًا عدد السكان بالكامل ، ذكورًا وإناثًا ، في الولايات المتحدة.

ابتداءً من عام 1999 ، بدأت وكالات إنفاذ القانون في كل من بريطانيا العظمى والولايات المتحدة في التحول إلى إصدار جديد من تحليل RFLP باستخدام تسلسلات أقصر تسمى تقارير المعاملات المشبوهة ("تكرارات ترادفية قصيرة"). STRS هي تسلسلات متكررة لعدد قليل (عادة أربعة) نيوكليوتيدات ، على سبيل المثال ، TCATTCATTCATTCAT. تحدث غالبًا في الأجزاء غير المترجمة من الجينات المعروفة (التي يمكن استخدام تسلسلها في بادئات PCR). العدد الدقيق للتكرارات (6 ، 7 ، 8 ، 9 ، إلخ) يختلف باختلاف الأشخاص (وغالبًا في الجين الموجود على كل كروموسوم ؛ أي أن الأشخاص غالبًا ما يكونون متغاير الزيجوت بالنسبة للعلامة).

عندما يتم فحص 13 موضعًا STR - متناثرة على كروموسومات مختلفة - ، فإن احتمال أن يكون لدى شخصين تم اختيارهما عشوائيًا نفس النمط أقل من 1 في 1 تريليون. يريد مكتب التحقيقات الفيدرالي الأمريكي (FBI) زيادة عدد المواقع التي تم فحصها إلى 20 موقعًا ، مما يلغي إمكانية الإيجابيات الكاذبة.


التباين الجيني والنشاط البيولوجي لاثنين من فيروسات Alphabaculovirus ذات الصلة الوثيقة أثناء المرور التسلسلي في العوائل غير المتجانسة المتساهلة وشبه المتساهلة

تشير تحليلات علم الوراثة إلى أن Mamestra brassicae multucleopolyhedrovirus (MbMNPV) و Helicoverpa armigera multucleopolyhedrovirus (HearMNPV) قد تكون سلالات من نفس أنواع الفيروسات. تم إجراء معظم الدراسات التي تقارن أنشطتها البيولوجية في مضيفيهم المتماثلين. تم إجراء مقارنة بين نطاق المضيف والاستقرار في المضيفات البديلة. تمت مقارنة النطاق المضيف لهذه الفيروسات باستخدام تركيزات عالية من اللقاح لتلقيح الأعمار الثانية لستة أنواع من Lepidoptera. مضيف واحد شبه متساهل (سبودوبترا ليتوراليس) ومضيف واحد متساهل (س. exigua) ثم تم اختياره واستخدامه لأداء ستة مقاطع متسلسلة تتضمن تركيزًا مطابقًا لـ

25٪ تركيز مميت لكلا الفيروسين. أظهر تحليل نوكلياز التقييد تعدد أشكال طول الشظايا في كل نظام فيروس مضيف تمت دراسته. في س. ليتوراليس، أدى المرور التسلسلي لـ MBMNPV إلى انخفاض الإمراضية وزيادة سرعة القتل ، في حين لم يتم الكشف عن تغييرات كبيرة لـ HearMNPV فيما يتعلق بالتلقيح الأولي. في المقابل ، أظهر كلا الفيروسين اتجاهاً مماثلاً في س. exigua. تسلط هذه النتائج الضوء على التنوع الوراثي المنخفض والاستقرار المظهرى العالي لـ HearMNPV فيما يتعلق بالتلقيح الأصلي بعد ستة مقاطع متتالية في كلا المضيفين من الحشرات. خلصت هذه الدراسة إلى أن تفاعلات المضيف-الباكولوفيروس أثناء المرور المتسلسل معقدة وأن عملية التكيف مع مضيف جديد شبه متسامح بعيدة كل البعد عن التنبؤ بها.

الكلمات الدالة: Spodoptera exigua Spodoptera littoralis مجموعة عوائل الاستقرار الجيني خصائص مبيدات الحشرات ..

بيان تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح. لم يكن لـ Bioinsectis SL أي دور في تصميم الدراسة في جمع البيانات أو تحليلها أو تفسيرها في كتابة المخطوطة ولا في قرار نشر النتائج.


مجالات موضوع ASJC Scopus

  • APA
  • اساسي
  • هارفارد
  • فانكوفر
  • مؤلف
  • BIBTEX
  • RIS

مخرجات البحث: المساهمة في المجلة ›المقال› مراجعة الأقران

T1 - خرائط التقييد وتعدد أشكال طول جزء التقييد لجينات 21 هيدروكسيلاز البشرية

N1 - معلومات التمويل: شكر وتقدير: نشكر الدكتور M.C. كارول من Harvard pK4 clone والسيدة S. F. Fleischnick ، ​​Crigler ، Jr. ، للمساعدة في الحصول على عينات الدم من CAH المرتبط بـ Bw47 ، والسيدة D. (CVD) وجامعة CA-22507 للبقع التقييدية ، L. Key ، و JF مريضان مع HLA- من هذه المخطوطة. هذا (C.J.M.) ، AM-07116 (CJM) ، (PCW).

N2 - تم إنشاء خرائط التقييد للجينين البشريين 21-هيدروكسيلاز (21-OHA و 21-OHB) باستخدام الحمض النووي من الموضوعات متماثلة اللواقح لحذف كل جين. بمقارنة أنماط هذين الجينين ، حدث موقع تقييد KpnI في جين 21-OHA بدلاً من موقع TaqI في جين 21-OHB حوالي 1 كيلو بايت من نهاية 5 ′ للجين ، وكان موقع EcoRI إضافي يقع 500 نقطة أساس 5 إلى موقع EcoRI المشترك. تم هضم الحمض النووي لأربعة عشر شخصًا عاديًا غير ذي صلة بتسعة نوكليازات مقيدة (AccI و BamHI و BglII و EcoRI و HindIII و KpnI و MspI و SacI و TaqI). تم العثور على تعدد الأشكال لطول جزء التقييد باستخدام EcoRI و HindIII و AccI التي نتجت عن مواقع نوكلياز متعددة الأشكال خارج الجينات.

AB - تم إنشاء خرائط التقييد للجينين البشريين 21-hydroxylase (21-OHA و 21-OHB) باستخدام الحمض النووي من الأشخاص المتماثلين الزيجوت لحذف كل جين. بمقارنة أنماط هذين الجينين ، حدث موقع تقييد KpnI في جين 21-OHA بدلاً من موقع TaqI في جين 21-OHB حوالي 1 كيلو بايت من نهاية 5 ′ للجين ، وكان موقع EcoRI إضافي يقع 500 نقطة أساس 5 إلى موقع EcoRI المشترك. تم هضم الحمض النووي لأربعة عشر موضوعًا طبيعيًا غير ذي صلة بتسعة نوكليازات مقيدة (AccI و BamHI و BglII و EcoRI و HindIII و KpnI و MspI و SacI و TaqI). تم العثور على تعدد الأشكال لطول جزء التقييد باستخدام EcoRI و HindIII و AccI التي نتجت عن مواقع نوكلياز متعددة الأشكال خارج الجينات.


11.7: تقييد طول جزء تعدد الأشكال - علم الأحياء

لقد طلبت ترجمة آلية لمحتوى محدد من قواعد البيانات الخاصة بنا. يتم توفير هذه الوظيفة لراحتك فقط ولا يُقصد بها بأي حال من الأحوال أن تحل محل الترجمة البشرية. لا تقدم BioOne ولا مالكو وناشر المحتوى ، وهم يتنصلون صراحةً من مسؤوليتهم ، أي تعهدات أو ضمانات صريحة أو ضمنية من أي نوع ، بما في ذلك ، على سبيل المثال لا الحصر ، الإقرارات والضمانات فيما يتعلق بوظيفة ميزة الترجمة أو دقة أو اكتمال الترجمات.

لا يتم الاحتفاظ بالترجمات في نظامنا. يخضع استخدامك لهذه الميزة والترجمات لجميع قيود الاستخدام الواردة في شروط وأحكام استخدام موقع BioOne.

تحديد علامات تعدد الأشكال لطول جزء التقييد المتضخم المرتبطة بالجينات التي تتحكم في قدرة الخنازير على بقاء الحيوانات المنوية بعد الحفظ بالتبريد

Lisa M. Thurston ، 1،2،3 ، * Ken Siggins ، 4 Alan J. Mileham ، 4 Paul F. Watson ، 3 William V. Holt 2

1 أ قسم الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية ، كلية الطب الملكية الحرة وكلية الطب الجامعية ، إل
2 ب معهد علم الحيوان ، جمعية علم الحيوان في لندن ، ريجنت آند # 39s بارك ، لندن NW1 4RY ، المملكة المتحدة
3 العلوم البيطرية الأساسية ، الكلية الملكية البيطرية ، كامدن ، لندن NW1 0TU ، المملكة المتحدة
4 dPIC International Group، Department of Pathology، Cambridge University، Cambridge CB2 1QP، United K

* المراسلات: الفاكس: 44 20 7388 1027 [email protected]

يتضمن PDF و HTML ، عند توفره

هذه المقالة متاحة فقط لـ مشتركين.
انها ليست متاحة للبيع الفردي.

بحثت هذه الدراسة في فرضيتين: 1) وجود تباين ثابت بين الخنازير في جودة السائل المنوي المجمد ويتم تحديده وراثيًا ، و 2) يمكن تحديد العلامات الجزيئية المرتبطة بالجينات التي تتحكم في تجميد السائل المنوي باستخدام تقنية تعدد الأشكال المتضخم لشظية القيد (AFLP). تم جمع خمس قذفات من كل من الخنازير الـ 129. تم تخفيف السائل المنوي في محلول تجميد تجاري (700 ملي أسمول / كغ ، 3٪ جلسرين) وخمس قش (0.5 مل) لكل قذفة تم حفظها بالتبريد (حتى -5 درجة مئوية عند 6 درجات مئوية / دقيقة ، ثم -5 درجة مئوية إلى -80) درجة مئوية عند 40 درجة مئوية / دقيقة). تم تقييم السائل المنوي بالنسبة المئوية للخلايا المتحركة ، وخصائص الحركة (تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر CASA) ، وسلامة غشاء البلازما (إيجابي SYBR-14) ، وسلامة أكروسوم (إيجابية للفلورسين المسمى الفول السوداني agglutinin PNA). تم اكتشاف تباين ثابت بين الخنازير لحركة الحيوانات المنوية بعد الذروة (ص & lt 0.01) ، سلامة الغشاء (ص & lt 0.01) ، سلامة أكروسوم (ص & lt 0.01) ، وجميع خصائص CASA (ص & lt 0.05). لم يكن هناك فرق كبير بين السائل المنوي (ص & GT 0.05) أو القش (ص & GT 0.05) لأي تقييم جدوى. سلط تحليل الأنماط متعددة المتغيرات لمجموعة بيانات الجدوى الضوء على ثلاث مجموعات من الخنازير التي تنتج حيوانات منوية مع انتعاش ضعيف ومتوسط ​​وجيد بعد الذروة (42 ، 63 ، و 24 خنزيرًا ، على التوالي). تم فحص الحمض النووي من الخنازير البيضاء الكبيرة (ن = 22) المصنفة سابقًا على أنها مجمدات جيدة وفقيرة لعلامات AFLP. أنتجت ثمانية وعشرون توليفة أولية من تفاعل البوليميراز المتسلسل 2182 نطاق شظية تقييدية ، منها 421 مجموعة متعددة الأشكال. ستة عشر علامة وراثية مرشح (ص & lt 0.005) من خلال مقارنة ملف AFLP مع تجميد السائل المنوي باستخدام تحليل الانحدار اللوجستي. تدعم هذه النتائج الفرضية القائلة بوجود أساس وراثي للاختلاف في جودة السائل المنوي بعد الصدمة بين الأفراد ، وأن تقنية AFLP قد تكون قادرة على تحديد العلامات الجزيئية المرتبطة بالجينات التي تؤثر على هذا الاختلاف.

ليزا إم ثورستون ، كين سيغينز ، آلان جي ميلهام ، بول إف واتسون ، وويليام ف.هولت "تحديد علامات تعدد الأشكال المتضخمة لطول جزء التقييد المرتبطة بالجينات التي تتحكم في بقاء الحيوانات المنوية للخنزير بعد الحفظ بالتبريد ،" بيولوجيا التكاثر 66 (3) ، 545-554، (1 مارس 2002). https://doi.org/10.1095/biolreprod66.3.545

تم الاستلام: 7 آب (أغسطس) 2001 تاريخ القبول: 1 تشرين الأول (أكتوبر) 2001 تاريخ النشر: 1 آذار (مارس) 2002

هذه المقالة متاحة فقط لـ مشتركين.
انها ليست متاحة للبيع الفردي.


طول جزء التقييد تحليل تعدد الأشكال للمناطق الجينية للحمض النووي الريبوزومي مفيد لتمييز سلالات من داء المشعرات

تين. 1. سابقة بمعنى البيئةخريطة تقييد RI لـ rDNAs من الفطريات الجلدية. الشظية بين مواقع التقييد سابقة بمعنى البيئة(ن ′) و سابقة بمعنى البيئة(n + 1) يمثل الفواصل التي تتضمن منطقة NTS. التفسير الأكثر ترجيحًا لتعدد الأشكال الطول القابل للاكتشاف هو وجود عناصر متكررة (تكرار) في منطقة NTS. لم يتم بعد تحديد هياكل ETSs في الفطريات الجلدية. تين. 2. أنماط RFLP لمناطق ITS 1 و 2 من rDNA التي تم تضخيمها بواسطة PCR والتي تم هضمها باستخدام إنزيم التقييد Mvaتم عزل جميع المنتجات في هلام بولي أكريلاميد 5٪ وملطخة ببروميد إيثيديوم. الممرات: إف ، E. floccosum CBS 358.93 Tr ، T. روبروم SM 8818 Av ، A. vanbreuseghemii RV 27960، Ab (Am-Eu) أ. benhamiae، سباق أمريكي أوروبي ، RV 26680 Ab (Af) أ. benhamiae، العرق الأفريقي ، RV 30001 Te ، ت فار. إريناتشي CBS 344.79 Tc ، T. مركزية CBS 448.61 As (448.65) ، أ. simii CBS 448.65 As (520.75) ، أ. simii سي بي اس 520.75 تك ، ت فار. كوينكينوم NCPF 309 Ti ، ت فار. interdigitale SM 8796 EK 4836 ، EN 6349 ، EP 0585 ، و P31 ، العزلات التمثيلية لـ ت من البشر المصابين بالفطريات الجلدية المستخدمة في الدراسة M ، علامة الحجم الجزيئي. العزلات مثل EK 4836 و EN 6349 ، والتي أظهرت أنماطًا مختلفة عن تلك الخاصة بـ ت فار. interdigitale العزلات من دراسة تصنيف الحمض النووي اللاحقة بناءً على مناطق NTS. تين. 3. النشاف الجنوبي سابقة بمعنى البيئةالحمض النووي الجيني المهضوم من RI من 12 مجموعة فرعية (أنواع الحمض النووي P-1 إلى P-12) من المجموعة P للإنسان ت العزلات ، التي كان يوجد فيها نطاق 2.5 كيلو بايت. يتم تحديد المجموعات الفرعية بواسطة أنماط النطاقات للنطاقات بين 5 و 10 كيلو بايت. الممرات M ، علامات الحجم الجزيئي. تين. 4. النشاف الجنوبي سابقة بمعنى البيئةالحمض النووي الجيني المهضوم من RI من 11 مجموعة فرعية (أنواع الحمض النووي A-1 إلى A-11) من المجموعة A من البشر ت عزلات ، حيث كان النطاق 2.5 كيلو بايت غائبًا. الممرات M ، علامات الحجم الجزيئي.

سكوت دي إل ، وولف إف ، هويزينجا تي دبليو (2010) التهاب المفاصل الروماتويدي. لانسيت 376: 1094-1108

Floss DM، Schroder J، Franke M، Scheller J (2015) نظرة ثاقبة في بيولوجيا IL-23: من الهيكل إلى الوظيفة. عامل النمو السيتوكيني القس 26: 569-578

Zaky DS، El-Nahrery EM (2016) دور انترلوكين 23 كمؤشر حيوي في مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي وعلاقته بنشاط المرض. إنت إمونوفارماكول 31: 105-108

Moens E و Brouwer M و Dimova T و Willems F و Vermijlen D (2011) تعمل إشارات IL-23R و TCR على توليد خلايا جاما دلتا تي الوليدية التي تعبر عن مستويات عالية من الوسطاء السامة للخلايا وتنتج IFN-gamma و IL-17. ي لوكوك بيول 89: 743-752

Paradowska-Gorycka A ، Grzybowska-Kowalczyk A ، Wojtecka-Lukasik E ، Maslinski S (2010) IL-23 في التسبب في التهاب المفاصل الروماتويدي. سكاند جي إمونول 71: 134 - 145

Steinman L (2007) تاريخ موجز لـ T (H) 17 ، أول مراجعة رئيسية في فرضية T (H) 1 / T (H) 2 لتلف الأنسجة بوساطة الخلايا التائية. نات ميد 13: 139-145

Gravallese EM ، Schett G (2018) تأثيرات مسار IL-23-IL-17 على العظام في التهاب المفاصل الفقاري. Nat Rev Rheumatol 14: 631–640

Shukla P ، Mansoori MN ، Singh D (2018) فعالية العلاج الأحادي ضد IL-23 مقابل العلاج المركب مع مضاد IL-17 في حالات فقدان العظام التي يسببها نقص هرمون الاستروجين. العظام 110: 84-95

Duvallet E ، Semerano L ، Assier E ، Falgarone G ، Boissier MC (2011) Interleukin-23: سيتوكين رئيسي في الأمراض الالتهابية. آن ميد 43: 503-511

Nunez C، Dema B، Cenit MC، Polanco I، Maluenda C، Arroyo R et al (2008) IL23R: موضع القابلية للإصابة بمرض الاضطرابات الهضمية والتصلب المتعدد؟ مناعة الجينات 9: 289 - 293

Rong C، Hu W، Wu F، Cao X، Chen F (2012) Interleukin-23 كهدف علاجي محتمل لالتهاب المفاصل الروماتويدي. مول الخلية الحيوية 361: 243-248

Song GG، Bae SC، Choi SJ، Ji JD، Lee YH (2012) الارتباطات بين تعدد أشكال مستقبلات إنترلوكين 23 وقابلية الإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي: تحليل تلوي. مول بيول ، ممثل 39: 10655-10663

Aletaha D، Neogi T، Silman AJ، Funovits J، Felson DT، Bingham CO et al (2010) 2010 معايير تصنيف التهاب المفاصل الروماتويدي: الكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم / الرابطة الأوروبية لمبادرة تعاونية ضد الروماتيزم. التهاب المفاصل الرومات 62 (9): 2569-2578

Peterson CM ، Thomas DM ، Blackburn GL ، Heymsfield SB (2016) معادلة عالمية لتقدير وزن الجسم المثالي ووزن الجسم في أي مؤشر كتلة جسم. Am J Clin Nutr 103: 1197-1203

van Riel PL (2014) تطوير درجة نشاط المرض (DAS) ودرجة نشاط المرض باستخدام 28 تعدادًا للمفاصل (DAS28). كلين إكسب روماتول. 32 (5 ملحق 85): 65-74

Zhai Y، Xu K، Huang F، Peng H، Feng CC، Zhu KK et al (2012) Association of interleukin 23 receptor gene polymorphisms (rs10489629، rs7517847) مع التهاب المفاصل الروماتويدي في سكان أوروبا: التحليل التلوي. ممثل مول بيول 39: 8987-8994

حمدي ج ، درويش ح ، خطاب EA ، فوزي س ، فوزي إي ، شتا م (2015) دليل على ارتباط تعدد الأشكال الجيني لمستقبلات إنترلوكين 23 مع مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي المصري. هموم إمونول 76: 417-420

Zou Q و Zhao Y و Wang Y و Fang Y و Liu Y (2019) الارتباطات بين تعدد الأشكال الجيني IL-23R وقابلية التهاب المفاصل الروماتويدي: تحليل تلوي. خلايا Artif Nanomed Biotechnol 47: 951-956

Orozco G ، Blanca Rueda B ، Gema Robledo G ، Antonio García A ، Javier Martín J (2007) التحقيق في جين IL23R في مجموعة التهاب المفاصل الروماتويدي الإسبانية. هموم إمونول 68 (8): 681-684

Stahl EA و Raychaudhuri S و Remmers EF و Xie G و Eyre S و Thomson BP et al (2010) يحدد التحليل التلوي لدراسة الارتباط على مستوى الجينوم سبعة مواقع جديدة لخطر الإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي. نات جينيه 42 (6): 508-514

Lubberts E (2015) محور IL-23-IL-17 في التهاب المفاصل الالتهابي. نات القس Rheumatol 11 (7): 415-429

Yuan N ، Yu G ، Liu D ، Wang X ، Zhao L (2019) دور ناشئ للإنترلوكين 23 في التهاب المفاصل الروماتويدي. إمونوفارماكول إمونوتوكسيكول 41 (2): 185-191

Fatemeh SM، Aslani S، Mostafaei S، Jamshidi A، Riahi P، Mahmoudi M (2019) هل الاختلافات الجينية في محور السيتوكينات IL-21-IL-23R-IL-17A تشارك في مسار مُمْرِض لالتهاب المفاصل الروماتويدي؟ التحليل التلوي الهرمي بايزي. J Cell Physiol 234 (10): 17159-17171

Koyun B و Ozalp E و Acet O و Erbaş O (2018) طرق العلاج الفعالة الحالية لمسار خلية من نوع interleukin-23 / T المساعد في أمراض الروماتيزم وأمراض المناعة الذاتية. FNG & amp Demiroğlu Bilim Tıp Transplantasyon Dergisi 3 (1-2): 25-30

Hazlett J، Stamp LK، Merriman T، Highton J، Hessian PA (2012) IL-23R rs11209026 يعدل تعدد الأشكال تعبير IL-17A في مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي. مناعة الجينات 13 (3): 282-287

ميليس إل ، فاندورين ب ، كرويثوف إي ، جاك بي ، دي فوس إم ، ميلانتس إتش وآخرون (2010) ترتبط المستويات الجهازية لإنترلوكين 23 ارتباطًا وثيقًا بنشاط المرض في التهاب المفاصل الروماتويدي ولكن ليس التهاب المفاصل الفقاري. آن روم ديس 69: 618-623

Ruyssen-Witrand A، Constantin A، Cambon-Thomsen A، Thomsen M (2012) رؤى جديدة في علم الوراثة للاستجابات المناعية في التهاب المفاصل الروماتويدي. مستضدات الأنسجة 80 (2): 105-118


الكشف الجزيئي والتوصيف الوراثي لمقوسات التوكسوبلازما جوندي في الطيور المائية البرية في مقاطعة جيلين ، شمال شرق الصين

يمكن أن تصيب التوكسوبلازما جوندي الحيوانات ذوات الدم الحار تقريبًا ، بما في ذلك البشر. تتوفر معلومات محدودة عن عدوى T. gondii في الطيور المائية البرية في الصين. أجريت الدراسة الحالية لتحديد مدى انتشار العدوى بالنمط الجيني T. gondii في 11 نوعًا من الطيور المائية البرية في مقاطعة جيلين ، شمال شرق الصين. تم أخذ عينات من إجمالي 249 من الطيور المائية البرية بين أبريل ويوليو 2013 من مقاطعة جيلين ، وتم جمع عينات الأنسجة للكشف عن T. gondii بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل شبه المتداخل الذي يستهدف الجين B1. تم التنميط الجيني للعينات الإيجابية في 11 علامة وراثية (SAG1 ، 5'- و 3'-SAG2 ، بديل SAG2 ، SAG3 ، BTUB ، GRA6 ، L358 ، PK1 ، c22-8 ، c29-2 ، و Apico) باستخدام تفاعل متعدد البلمرة المتسلسل - تقنية تعدد الأشكال (PCR-RFLP). كان معدل انتشار T. gondii في الطيور المائية البرية 7.2٪ (18/249 ، فاصل ثقة 95٪ [CI] 4.0-10.4) ، مع أعلى انتشار (22.0٪ ، 95٪ CI 10.5-33.5) في أنس فورموزا ، يليه Anas platyrhynchos (20.0٪ ، 95٪ CI 6.0-44.0) ، البط البري المتقشر (12.5٪ ، 95٪ CI 0.0-35.4) ، Fulica atra (4.0٪ ، 95٪ CI 0.0-11.7). من بين 18 عينة موجبة ، تم توصيف عينتين فقط (TgWfjl1 و TgWfjl2) بالكامل ، وتم الكشف عن نمط وراثي واحد وهو ToxoDB # 9. نتائج هذا المسح لها آثار على فهم أفضل للتنوع الوراثي لبكتيريا T. gondii في الصين. هذا هو التقرير الأول عن انتشار T. gondii في الطيور المائية البرية في شمال شرق الصين والتوصيف الوراثي لها.

الكلمات الدالة: التوصيف الوراثي شمال شرق الصين Toxoplasma gondii الطيور المائية البرية.


هل هناك أي علاقة بين تعدد الأشكال والمستقبلات الشبيهة بـ Toll 3 c.1377C / T و 7C / A والقابلية للإصابة بحمى القرم النزفية؟

حمى القرم والكونغو النزفية (CCHF) هي مرض معد يسببه فيروس CCHF. عائلة من المستقبلات الغشائية تسمى مستقبلات Toll-like (TLRs) تعمل بشكل انتقائي في التعرف على مجموعة واسعة من المكونات الميكروبية والجزيئات الذاتية التي تطلقها الأنسجة التالفة والتي تم الحفاظ عليها طوال التطور. تستهل المستقبلات TLRs بعض سلاسل الإشارات التي تنشط جهاز المناعة الفطري. تعمل أربعة TLRs بشكل أساسي في الحماية من العدوى الفيروسية TLR3 واحدة منها. يحدد TLR3 دسرنا. من خلال إنتاج السيتوكينات الالتهابية والإنترفيرون من النوع الأول ، فإنه يولد استجابة مناعية مضادة للفيروسات. قد تتأثر الاستجابة المناسبة لروابط TLR بسبب تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNPs) داخل جينات TLR في بعض الأفراد ، وهذا يمكن أن يسبب قابلية متنوعة للإصابة بالعدوى. في العمل الحالي ، يتم استخدام تعدد الأشكال لطول جزء تقييد سلسلة البوليميراز القائم على التفاعل لتحليل ترددات تعدد الأشكال TLR3 (c.1377C / T و 7C / A) في 149 مريضًا CCHF و 171 من البالغين الأصحاء كعناصر تحكم ، في جامعة جمهوريت ، سيواس / تركيا. لقد بحثنا أيضًا في العلاقة بين هذه الأشكال المتعددة وشدة أو وفيات مرض CCHF. هذه هي الدراسة الأولى التي تبحث في TLR3 SNPs في المرضى الذين يعانون من CCHF. في هذه الدراسة ، كان تواتر الأنماط الجينية TLR3 (c.1377C / T و −7A / C) في الحالات المميتة وغير المميتة قابلة للمقارنة ، ومع ذلك ، فإن تردد النمط الجيني متحولة متماثل (TT) لـ TLR3 c.1377C / T في مرضى CCHF كان أعلى بكثير من الضوابط الصحية. في الختام ، قد يكون لوجود التركيب الوراثي TLR3 c.1377 TT دور في القابلية للإصابة بـ CCHF. جيه ميد. فيرول. 88: 1690–1696 ، 2016. © 2016 Wiley Periodicals، Inc.


الإجراءات التجريبية

المواد

أجسام الفاكهة الطازجة والمجففة Agaricus bisporus و بلوروتوس فلابيلاتوس تم الحصول عليها من الأسواق المحلية ، وتم تخزينها في الثلاجة لحين الاستخدام. تم الحصول على ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3 ′) و ITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATGATGC-3) من أوليغنوكليوتيدات المتكاملة (كورالفيل ، IA). تم الحصول على حبات ReadyToGo ™ PCR من شركة Amersham Pharmacia Biotech Inc. (بيسكاتواي ، نيوجيرسي). تم الحصول على بادئات PCR Core ™ المنبع / المصب ، و DNA البلازميد ذي التحكم الإيجابي ، و HaeIII ، و MboI ، و λHIII ، و 100-bp DNA من Promega (Madison ، WI). تم الحصول على جميع المحاليل والكواشف من شركة Sigma Biochemical Co. (سانت لويس ، MO).

أساليب

استخراج الحمض النووي-

تم استخلاص إجمالي الحمض النووي من 50 مجم من الأنسجة الطازجة أو المجففة عن طريق إجراء مقتبس من Gardes and Bruns [8] على النحو التالي. تم تعقيم الأنسجة يدويًا باستخدام مادة البولي بروبيلين Kontes micropestle (Fisher Scientific ، Pittsburgh ، PA) في أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 1.5 مل في 500 ميكرولتر من محلول الاستخلاص (100 م M Tris ، 1.4 M NaCl ، 20 م M EDTA ، 2٪ وزن / حجم CTAB) ، تليها الحضانة لمدة 10 دقائق عند 65 درجة مئوية. تم توضيح المطحنة بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 14000 دورة في الدقيقة ، وتم استخلاص المادة الطافية بكمية متساوية من الكلوروفورم. تم فصل الأطوار المائية والعضوية بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 14000 دورة في الدقيقة. تم ترسيب الحمض النووي من الطبقة المائية العلوية بإضافة مجيدين من الأيزوبروبانول عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تم جمع الحمض النووي بالطرد المركزي عند 14000 دورة في الدقيقة ، وتم غسل الحبيبات مرتين باستخدام 70٪ من الإيثانول. تم تجفيف الحبيبات النهائية بالهواء عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10-20 دقيقة ، ثم تم إذابتها في 50 ميكرولتر من TE (10 م M Tris-HCl pH 8.0 ، 1 م M EDTA).

تضخيم PCR—

لتضخيم منطقة rDNA ITS ، تمت إضافة 1 ميكرولتر من إجمالي الحمض النووي إلى أنبوب تفاعل يحتوي على حبة Amersham ReadyToGo ™ PCR ، 1 ميكرولتر من 50 نانومتر من ITS1 التمهيدي (إجمالي 50 ميكرولتر) ، 1 ميكرولتر من 50 نانومتر من ITS4 التمهيدي (50 ميكرولتر) المجموع) ، و ddH2O إلى إجمالي 25 ميكرولتر. تم إجراء PCR في جهاز تدوير حراري PE System 24000 مع غطاء ساخن ، أو MJ Research Minicycler مع 30 ميكرولتر من الزيت المعدني متراكب في كل أنبوب. كانت معلمات ركوب الدراجات تمسخًا أوليًا عند 95 درجة مئوية لمدة 3 دقائق ، تليها 35 دورة: خطوة تمسخ عند 95 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة و 20 ثانية ، وخطوة التلدين عند 48 درجة مئوية لمدة 20 ثانية ، وتمديد التمهيدي عند 72 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة 10 س. تمت متابعة خطوة التمديد النهائية لمدة 10 دقائق عند 72 درجة مئوية بالتخزين البارد عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.

الهضم المقيد -

احتوت التفاعلات على 2 ميكرولتر من الحمض النووي المتضخم و 1 ميكرولتر من إنزيم التقييد في المخزن المؤقت المناسب بحجم إجمالي 20 ميكرولتر. تم تحضين الهضم لمدة 45-60 دقيقة عند 37 درجة مئوية وتخزينها عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.

الكهربائي-

تم إجراء الرحلان الكهربائي على 1٪ (مستحضرات DNA الكلية) أو 2٪ (منتجات PCR وتحليل RFLP) agarose gels في TBE (45 م M تريس بورات ، 2 م M EDTA) عند 90 فولت لمدة 30-45 دقيقة. تم تصور العصابات عن طريق تلطيخها بـ 5 ميكروغرام / مل من بروميد الإيثيديوم. تم تسجيل نتائج الجل بإحدى طريقتين. تم الحصول على الصور باستخدام فيلم Polaroid 667 وكاميرا التوثيق الضوئي وغطاء محرك السيارة من FisherBiotech (Fisher Scientific ، Pittsburgh ، PA). Digital image files were collected using a Canon digital camera mounted on a homemade photodocumentation box fitted with an orange filter to reduce background illumination from visible light emissions of the transilluminator.

Safety Measures—

Safety precautions included handling all ethidium bromide (EtBr) solutions and gels with disposable gloves and wearing ultraviolet-protective goggles when viewing gels on the transilluminator. EtBr was removed from contaminated solutions by filtration prior to disposal [ 13 ]. None of the mushrooms species tested was poisonous.


استنتاج

This study did not detect a significant relationship between IL-1β (+ 3954C>T), IL-6 (− 174G>C), and IL-6 (− 597G>A) genetic polymorphisms and SCD phenotypes. However, IL-6 (− 597G>A) polymorphism might predispose to underlying inflammatory process and subsequent complications. Rarity of mutant alleles of the IL-1β and IL-6 polymorphisms among our studied population hampered reaching a definite conclusion on their influence on the disease status. Investigation of larger cohort of patients is recommended to elucidate their proper role in sickle cell disease.


شاهد الفيديو: المحاضرة 29: شرح تمهيدي حول مفهوم تعدد الأشكال Polymorphism (كانون الثاني 2022).