معلومة

8.4: الإمراض الفطرية - علم الأحياء


أهداف التعلم

  • قم بتسمية ثلاثة عوامل على الأقل من عوامل الفوعة الفطرية التي تعزز الاستعمار الفطري.
  • قم بتسمية عاملين على الأقل من عوامل الفوعة الفطرية التي تلحق الضرر بالعائل.

كما هو الحال مع البكتيريا ، يمكن تقسيم عوامل الفوعة الفطرية إلى فئتين: عوامل الفوعة التي تعزز الاستعمار الفطري للمضيف. وعوامل الفوعة التي تضر بالعائل.

عوامل الفوعة التي تعزز الاستعمار الفطري

تشمل عوامل الفوعة التي تعزز الاستعمار الفطري للمضيف القدرة على:

1. تلتزم بالخلايا المضيفة وتقاوم الإزالة الجسدية ؛
2. تغزو الخلايا المضيفة ؛
3. تنافس على المغذيات.
4. مقاومة الدفاعات المناعية الفطرية مثل البلعمة والمكملات. و
5. التهرب من دفاعات المناعة التكيفية.

تتضمن أمثلة عوامل الفوعة التي تعزز الاستعمار الفطري ما يلي:

1. ضعف الجهاز المناعي هو العامل المؤهل الأساسي للعدوى الفطرية الخطيرة. يصبح الشخص الذي يعاني من كبت المناعة بشدة ، مثل الشخص الذي يتناول عقاقير مثبطة للمناعة لقمع رفض الزرع ، أو الشخص المصاب بفيروس نقص المناعة البشرية المتقدم ، أو الشخص المصاب باضطرابات أخرى مثبطة للمناعة ، أكثر عرضة للإصابة بالعدوى بالفطريات التي تعتبر بشكل عام غير ضارة جدًا للشخص السليم المصاب. الدفاعات العادية.

2. كما هو الحال مع البكتيريا ، يبدو أن القدرة على الالتصاق بالخلايا المضيفة التي تحتوي على مواد لاصقة لجدار الخلية تلعب دورًا في الفوعة الفطرية.

3. تنتج بعض الفطريات كبسولات تسمح لها بمقاومة الابتلاع البلعمي ، مثل الخميرة المستخفية الحديثة وشكل الخميرة كبسولات الهستوبلازما (الشكل ( PageIndex {1} )).

4. المبيضات البيض يحفز إنتاج السيتوكين المسمى GM-CSF ويمكن لهذا السيتوكين أن يثبط إنتاج المكمل بواسطة الخلايا الوحيدة والخلايا الضامة. قد يقلل هذا من إنتاج الأوبسونين C3b وكذلك البروتينات التكميلية التي تعزز الانجذاب الكيميائي للخلايا البلعمية.

5. C. البيض يبدو أيضًا أنه قادر على اكتساب الحديد من خلايا الدم الحمراء.

6. البيض ينتج البروتياز الحمضي والفوسفوليباز التي تساعد في اختراق أغشية الخلايا المضيفة وتلفها.

7. بعض الفطريات أكثر مقاومة لتدمير البلعمة ، على سبيل المثال ، المبيضات البيض ، هيستوبلازما كبسولات، و Coccidioides immitis.

8. هناك دليل على أن الخميرة عند شكل الكانديدا يدخل الدم وينشط الجينات مما يسمح له بالانتقال من شكله المتبرعم إلى شكله القوطي. بالإضافة إلى ذلك ، عندما تبتلعها البلاعم ، فإنها تبدأ في إنتاج الأنابيب الجرثومية الأنبوبية التي تخترق غشاء البلاعم مما يتسبب في موتها.

فيلم من الكانديدا قتل الضامة من الداخل من موقع Theriot Lab في كلية الطب بجامعة ستانفورد: المبيضات البيض قتل الضامة من الداخل الى الخارج.

9. تنشط عوامل مثل درجة حرارة الجسم ، والإجهاد التناضحي ، والإجهاد التأكسدي ، وبعض الهرمونات البشرية ، إنزيم هيستيدين كيناز الذي ينظم إزدواج الشكل في قوالب ثنائية الشكل ، مثل هيستوبلازما كابسولاتوم ، Blastomyces dermatitidis، و الكروانيديا إميتيس ، مما جعلهم ينتقلون من شكل العفن الفاسد إلى شكل الخميرة الفتاكة. كما أنه يسبب الخميرة المبيضات البيض للتبديل من شكل الخميرة إلى شكلها الخبيث الأكثر ضراوة.

عوامل الضراوة التي تضر بالمضيف

مثل البكتيريا ، يمكن أن تؤدي PAMP الفطرية المرتبطة بـ PRRs إلى إنتاج مفرط للسيتوكين مما يؤدي إلى استجابة التهابية ضارة تدمر الأنسجة والأعضاء. عندما تنمو الفطريات في الجسم ، يمكنها إفراز إنزيمات لهضم الخلايا. وتشمل هذه البروتياز والفوسفوليباز والإيلاستاز. استجابة لكل من الفطريات وإصابة الخلايا ، يتم إطلاق السيتوكينات. كما رأينا سابقًا في إطار التكاثر البكتيري ، يؤدي هذا إلى استجابة التهابية وقتل خارج الخلية بواسطة الخلايا البلعمية مما يؤدي إلى مزيد من تدمير أنسجة المضيف.

تفرز العديد من أنواع العفن السموم الفطرية ، خاصة عند النمو على الحبوب والمكسرات والفول. قد تسبب هذه السموم مجموعة متنوعة من التأثيرات في البشر والحيوانات إذا تم تناولها بما في ذلك فقدان التنسيق العضلي وفقدان الوزن والرعشة. بعض السموم الفطرية مطفرة ومسببة للسرطان. الأفلاتوكسينات ، التي تنتجها بعض فطر الرشاشيات الأنواع ، مسببة للسرطان بشكل خاص. قالب يسمى مخطط Stachybotrys هو منتج للسموم الفطرية التي تم اعتبارها مشكلة خطيرة محتملة في المنازل والمباني كأحد أسباب "متلازمة المباني المريضة". تشمل أعراض السموم الفطرية لدى البشر التهاب الجلد ، والتهاب الأغشية المخاطية ، والسعال ، والحمى ، والصداع ، والتعب.

مقال Medscape عن العدوى المرتبطة بالكائنات المذكورة في كائن التعلم هذا. التسجيل للوصول إلى هذا الموقع مجاني.

  • المبيضات البيض
  • المستخفية الحديثة
  • المتكيسة الرئوية الجؤجؤية
  • التهابات الجلد (سعفة)
  • Coccidioides immitis
  • كبسولات الهستوبلازما
  • Blastomyces dermatitidis
  • داء الرشاشيات
  • جذمور
  • حساسية العفن

ملخص

العديد من العوامل نفسها التي تمكن البكتيريا من استعمار الجسم تمكن الفطريات أيضًا من الاستعمار. العديد من العوامل نفسها التي تمكن البكتيريا من إيذاء الجسم تمكن الفطريات أيضًا من التسبب في الضرر.


الفطريات المسببة للأمراض

الفطريات المسببة للأمراض تجعل الناس والكائنات الحية الأخرى مرضى ويمكن أن تقتلهم. بالنسبة للبشر ، هناك حوالي 300 نوع من الفطريات المسببة للأمراض معروفة. البعض منهم الكانديدا, فطر الرشاشيات, المستخفية, الهستوبلازما, تكيسات رئوية و Stachybotrys. مثال واحد على المستخفية يكون المستخفية الحديثة الذي يسبب التهاب السحايا الشديد لدى الأشخاص المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية أو المصابين بالإيدز.

الجلد والجهاز الهضمي والجهاز التنفسي والمسالك البولية التناسلية هي مناطق من الجسم غالبًا ما تصاب بالفطريات المسببة للأمراض. الأشخاص الذين لديهم مستويات أعلى من الخلايا الأحادية / الضامة ، والخلايا التائية القاتلة الطبيعية الثابتة (iNK) والخلايا المتغصنة لديهم فرصة أفضل للسيطرة على عدوى الفطريات ومنعها من الانتشار في جميع أنحاء الجسم.


تظهر الصورة أعلاه الرشاشيات الأرضية. تسبب هذه الفطريات المسببة للأمراض التهابات في الأذنين والجلد والأظافر والرئتين للأشخاص الذين يعانون من ضعف في جهاز المناعة.


خلفية

في السنوات ال 25 الماضية ، الممرض الانتهازي للإنسان المبيضات البيض أصبحت مشكلة طبية خطيرة. يحتل هذا الفطر الآن المرتبة الرابعة في قائمة الالتهابات المكتسبة من المستشفيات ، متقدمًا على البكتيريا سالبة الجرام ، وعلى الرغم من إدخال فئة جديدة من مضادات الفطريات مؤخرًا ، لا تزال مقاومة الأدوية تمثل مشكلة [1]. في الخمسة عشر عامًا الماضية ، تم تطبيق التقنيات الجزيئية لفهم الآلية المرضية لهذا الكائن الحي وكذلك للبحث عن أهداف دوائية جديدة. لكن، C. البيض يقدم العديد من الصعوبات لعلماء الأحياء الجزيئية: فهو ثنائي الصبغة فقط جزء من الدورة الجنسية وقد تم إثبات أنه يحتوي على جينوم بلاستيكي للغاية وهو متغاير الزيجوت بشكل كبير. يتم التحقق من كل من هذه الخصائص بشكل أفضل من خلال النهج الجيني. وبالتالي ، كانت معرفة تسلسل الجينوم هدفًا مهمًا خلال السنوات العشر الماضية. في الآونة الأخيرة ، أصبحت بنية الجينوم وديناميكياته ذات أهمية متزايدة في هذا الكائن الحي حيث تم الإبلاغ عن اختلال الصيغة الصبغية على نطاق واسع [2 ، 3] ، ودور الحمض النووي المتكرر في فقدان الكروموسوم [4] ، وإعادة ترتيب الكروموسومات التي تؤدي إلى مقاومة الأدوية [5].

بدأ مشروع تسلسل جينوم الكانديدا في عام 1996 ، وفي عام 2004 ، أنتج مجموعة ثنائية الصبغيات مبنية من تغطية 10.9 × (التجميع 19) ، والتي قدمت كونتيجات مفردة حيث لم يكن تغاير الزيجوت واضحًا ، وكان هناك كونتيجات أليلية حيث كان هناك تغاير كبير للزيجوت [6]. كانت هناك عدة خطوات مهمة على طول الطريق إلى هذا الإصدار تم تفصيلها في مراجعة بواسطة Nantel [7]. الأول كان بناء خريطة مادية لكروموسوم واحد ، كروموسوم 7 [8]. بعد ذلك ، كان الإصداران الأولان من بيانات التسلسل الناشئة ، المسمى Assembly 4 و Assembly 6. هذه التجميعات منخفضة الكثافة سهلت قدرًا كبيرًا من تحليل الجينات ، بما في ذلك بناء العديد من المصفوفات الدقيقة [9 ، 10] ، تحليل الجينات الفردية غير الكافية للتخيط [11] ، وتوضيح العديد من عائلات الجينات ، بما في ذلك عدد مهم في التسبب في المرض. ومن الأمثلة على ذلك بروتينات الأسبارتيل المفرزة (العصارةق) [12] ، المواد الشبيهة بالراصة (ALSق) [13] ، و phospholipases (PLB و PLC) [14 ، 15]. يتوفر حاليًا مكتبتان شاملتان تمامًا للاضطراب. تم إنشاء مكتبة واحدة بشكل منهجي عن طريق التعطيل المستهدف لأليل واحد متبوعًا بإدخال محفز منظم في الأليل الآخر [16]. تم إنشاء مكتبة الاضطراب الأخرى بشكل عشوائي عن طريق طفرات الينقولات ، باستخدام كاسيت UAU كإدخال في أليل واحد ، مما يسهل تعطيل الأليل الثاني عبر خطوتين تلقائيًا من إعادة التركيب الانقسامي [17].

لقد طورت هذه الأدوات بشكل كبير وتيرة التحليل الجزيئي للإمراض وأسلوب حياة C. البيض، لكن التجميع 19 لم يكن تسلسلًا نهائيًا ، حيث احتوى على إجمالي 412 كونتيغ ، منها 266 مجموعة أحادية العدد. من أجل توفير تسلسل نهائي ، استخدمنا تهجين الكروموسومات المنقى جزئيًا عن طريق الرحلان الكهربائي للمجال النبضي بالإضافة إلى خريطة الموقع الموسومة بالتسلسل (STS) استنادًا إلى مكتبة fosmid لتحديد موقع الكروموسومات للعديد من contigs. ثم استخدمنا المعلوماتية الحيوية لتحليل التسلسل الناشئ لـ C. البيض سلالة WO-1 ، الأنواع الشقيقة المبيضات dubliniensis والآثار الأولية المستخدمة لإنشاء التجميع 4 ، واقترن ذلك بخريطة STS وخريطة بصرية كاملة الكروموسوم لبناء التجميع 21. يحتوي هذا التجميع على ثمانية تسلسلات DNA خطية بما في ذلك تسع نسخ من التكرار الوسيط يسمى تسلسل التكرار الرئيسي (MRS ) ، ثلاثة منها تم تسلسلها بالكامل. يتكون MRS من ثلاثة تكرارات فرعية ، تسمى RB2 و RPS و HOK [18]. بالإضافة إلى متواليات MRS السليمة ، هناك 14 تسلسل RB2 و 2 تسلسل HOK. يشكل الحمض النووي الريبوزومي تكرارًا آخر لا يتم تضمينه في التجميع. بالإضافة إلى فائدتها في رسم خرائط الجينات ، تكشف Assembly 21 عن بعض الميزات البيولوجية المثيرة للاهتمام ، بما في ذلك عائلة جينات عامل النسخ المفترضة مع أعضاء أقرب إلى 14 من التيلوميرات الستة عشر ، وتسلسل يشبه التيلومير في منتصف الكروموسوم 1 ، ومعلومات عن العلاقات موقع الكروموسوم لتشابه عائلات الجينات ، وقائمة إطار قراءة مفتوحة منقحة (ORF).


مقدمة

تحدث الالتهابات الفطرية الغازية (IFIs) بسبب الفطريات الانتهازية مثل الخيطية دخان الرشاشيات أو الخمائر المبيضات البيض و المستخفية الحديثة (إينوك وآخرون ، 2006). على الرغم من أن المؤسسات المالية الدولية لا تمثل مصدر قلق عادةً لدى الأفراد الأصحاء ، إلا أنها قادرة على إصابة المرضى المرضى أو الذين يعانون من نقص المناعة بشدة ، بما في ذلك الأفراد المصابين بسرطان الدم ومتلقي الزرع والمصابين بفيروس نقص المناعة البشرية / الإيدز (Comely et al.، 2015 de Oliveira et al.، 2014 Klingspor et al.، 2015 Neofytos et al.، 2013).

يتزايد معدل حدوث المؤسسات المالية الدولية ، ونسبة كبيرة من هذه المؤسسات المالية الدولية (Beck-Sagué and Jarvis، 1993 Lehrnbecher et al.، 2010). يُعتقد أن هذا يرجع إلى زيادة عدد الأفراد الذين يعانون من نقص المناعة (Lehrnbecher et al. ، 2010 Warnock ، 2007). تميل المؤسسات المالية الدولية إلى ارتفاع معدلات الوفيات (Comely et al.، 2015 Lehrnbecher et al.، 2010) ، ونتيجة لذلك ، فإن تحسين العلاجات الوقائية والعلاجية الحالية تحظى باهتمام متزايد. من الضروري أن نفهم التفاعلات البيولوجية الأساسية والديناميكية بين الخلايا المضيفة والخلايا الفطرية من أجل تعزيز رعاية وعلاج المرضى الذين يعانون من IFIs.

يتطلب التسبب في المرض تفاعلًا بين العامل الممرض ومضيفه. هناك العديد من الأمثلة على التفاعلات بين المضيف والفطر في سياق الكائنات الحية التي تسبب IFIs. دخان الرشاشيات ثبت أنه يلتصق بالمصفوفة خارج الخلية للرئة وكذلك سطح الخلايا الظهارية للرئة البشرية (جيل وآخرون ، 1996 ، شيبارد ، 2011). بالإضافة إلى ذلك ، فإن استيعاب A. fumigatus الجراثيم بواسطة الخلايا الظهارية في المختبر تمت ملاحظته عدة مرات (جوميز وآخرون ، 2010 Oosthuizen وآخرون ، 2011 Wasylnka and Moore ، 2003).

المبيضات البيض قد لوحظ أنه يغزو الخلايا المضيفة عن طريق إحداث الالتقام الخلوي (Dalle et al. ، 2010) أو من خلال الغزو النشط ، وهي عملية تخترق بواسطتها الواصلة أغشية الخلايا الظهارية (Dalle et al. ، 2010 ، Wächtler et al. ، 2011). لقد تم إثبات ذلك C. neoformans يصيب مضيفه من خلال آلية استيعاب تعتمد على الأكتين (Guerra et al. ، 2014). غالبًا ما تؤدي هذه التفاعلات الأولية إلى تفاعلات أخرى بين العائل والفطر على مستويات عديدة. تعتبر شبكات التفاعل بين المضيف والفطري معقدة للغاية ، حيث توجد العديد من الاختلافات المتأصلة بين خلايا الثدييات والخلايا الفطرية. إن التحليل الشامل لهذه الشبكات يستلزم استخدام تقنيات "-omics" على مستوى العالم من أجل التقاط الاضطرابات الحيوية الديناميكية الشديدة والدقيقة داخل كل من المضيف والممرض.

تُقسَّم دراسة "-omics" البيولوجية المختلفة عمومًا إلى عدة مجالات رئيسية في علم الأحياء عالي الإنتاجية ، ولا سيما علم الجينوم ، وعلم النسخ ، والبروتيوميات ، وعلم الأيض. يتضمن التحليل الذري المثالي للكائن الحي مجموعة من مجموعات البيانات الكاملة وغير المتحيزة التي تمثل المجموعة الكاملة للجزيئات الحيوية محل الاهتمام. التقنيات التي لا تختار أهدافًا محددة أو مرشحة لها قيمة خاصة لأنها تسمح بتحديد الشبكات البيولوجية الجديدة دون معرفة مسبقة. أصبح استخدام تقنيات الإنتاجية العالية مثل هذه مؤخرًا أكثر شيوعًا حيث يمكنها تقديم صورة أكثر اكتمالاً لتعقيدات استجابة الكائن الحي أو الخلية للظروف التجريبية أو البيئية. إن التقنيات الكمية الأكثر شيوعًا مثل اللطخات الغربية والنسخ العكسي الكمي PCR قادرة فقط على تحليل أهداف محددة وبالتالي فهي غير قادرة على اكتشاف التغييرات غير المتوقعة.

تاريخياً ، ارتبط علم الأحياء عالي الإنتاجية بتكلفة مالية باهظة ، مما جعل العديد من هذه التقنيات غير متاحة لمعظم الباحثين. على الرغم من هذا ، فإن للبيولوجيا عالية الإنتاجية إمكانات لا يمكن إنكارها للتحليل المنهجي لنظام بيولوجي معقد ، مثل التفاعل بين المضيف والممرض (الشكل 1). تم دعم استيعاب الباحث من خلال زيادة القدرة على تحمل تكاليف العديد من تقنيات علم الأحياء عالية الإنتاجية في السنوات الأخيرة. ومن الأمثلة البارزة على ذلك سعر تسلسل الجينوم التجاري ، حيث يصل التسلسل الكامل للجينوم البشري الآن إلى 1000 دولار أمريكي (Veritas Genomics ، 2015).

تين. 1. بيولوجيا أنظمة التفاعلات ثنائية الكائن. يتم تحليل نظام تجريبي محدد للمضيف الممرض باستخدام طرق عالية الإنتاجية. تخضع البيانات المجمعة للتحليل الإحصائي الحسابي ، ويتم تحليل النتائج باستخدام عدد من تقنيات المعلوماتية الحيوية. ينتج عن تحليل البيانات نموذج للتفاعل البيولوجي. ينتج عن النسخ المتماثل نموذج قوي ومحقق للنظام البيولوجي. ثم يتم استخدام هذا النموذج المصادق عليه لتحديد جوانب النظام التي تتطلب مزيدًا من الدراسة والتنقيح.

هناك مراجعات سابقة حول الموضوعات المتعلقة بالتفاعل بين المضيف والفطري (Durmuş et al.، 2015 Horn et al.، 2012 Santamaría et al.، 2011) ، وتستند مراجعتنا إلى هذه من خلال تحديد ودمج كل من الأساليب التجريبية والحسابية في علم الأحياء عالي الإنتاجية. نحن نركز بشكل خاص على الابتكارات الحديثة في التكنولوجيا التي تعد بإعطاء رؤى قيمة في المجال المحدود نسبيًا للتفاعلات بين المضيف والفطريات.


التعرف على مسببات الأمراض الفطرية ومسبباتها المرضية المرتبطة بالتعفن الجذعي لثمار الأفوكادو في كينيا

تم الإبلاغ عن الخسائر المرتبطة بعفن نهاية الساق (SER) من ثمار الأفوكادو في جميع مناطق زراعة الأفوكادو في العالم. في كينيا ، تظهر ثمار الأفوكادو الناضجة أعراض SER أثناء التخزين والتسويق ، ولكن لم يتم تحديد العامل (العوامل) المسببة للمرض. هدفت هذه الدراسة إلى التعرف على مسببات الأمراض الفطرية المرتبطة بـ SER الأفوكادو في كينيا وتقييم قدرتها المرضية. تم جمع العزلات الفطرية من ثمار الأفوكادو التي تظهر عليها الأعراض من البساتين المختارة عشوائياً والأسواق الرئيسية في مقاطعة مورانجا ، وهي منطقة رئيسية لزراعة الأفوكادو في كينيا ، بين سبتمبر 2017 ومارس 2018. ما مجموعه 207 و 125 عزلة فطرية ، تم استعادتها من البساتين والعزلات الرئيسية. الأسواق ، على التوالي ، تم تحديدها شكليًا وتم تأكيدها بشكل أكبر بواسطة التقنيات الجزيئية. كانت العزلات المحددة Lasiodiplodia theobromae (39.8%), Neofusicoccum parvum (24.4%), النكتريا الكاذبة (18.4%), فيوزاريوم سولاني (7.2%), F. oxysporum (5.1%), F. equiseti (3.9٪) و صريح جيوتريكوم (1.2%). صريح جيوتريكوم تم استرداده حصريًا من الفاكهة من السوق. في اختبار الإمراضية ، L. theobromae, ن. بارفوم ، و N. pseudotrichia تسبب في أشد أعراض SER. وبالتالي ، تم اعتبارهم من مسببات الأمراض الرئيسية لـ SER لثمار الأفوكادو في كينيا. على حد علمنا ، هذا هو التقرير الأول عن مسببات الأمراض SER لثمار الأفوكادو في كينيا. نظرًا للمساهمة الكبيرة لثمار الأفوكادو في دخل الأسرة والعملات الأجنبية في كينيا ، فإن هذه المعلومات مهمة لمواصلة تطوير استراتيجيات إدارة فقدان ثمار الأفوكادو بعد الحصاد في كينيا.

1 المقدمة

في كينيا ، الأفوكادو (بيرسي امريكانا Mill.) أحد أهم محاصيل الفاكهة الاستوائية المعمرة ومصدر رئيسي للعملات الأجنبية. في عام 2017 ، استحوذت على حوالي 74٪ من قيمة إجمالي الفاكهة المصدرة من الدولة [1]. حاليًا ، يساهم الأفوكادو "هاس" بحوالي 80٪ من ثمار الأفوكادو المنتجة والمصدرة من كينيا [2]. وتشمل الأصناف الأخرى المنتجة "فويرتي" و "بويبلا" و "ديوك" و "جي 6" [3]. يهيمن المزارعون أصحاب الحيازات الصغيرة (85٪) على إنتاج الأفوكادو في كينيا داخل العديد من المناطق الزراعية الإيكولوجية ، والذين ينتجون بشكل أساسي لسوق التصدير ، ويباع الباقي في الأسواق المحلية. يتم إنتاج سبعين بالمائة (70٪) من ثمار الأفوكادو في المناطق الوسطى والشرقية من البلاد. يتم تصدير الثمار بشكل رئيسي إلى الاتحاد الأوروبي [2 ، 4]. منذ عام 2000 ، زادت المساحة المزروعة بالأفوكادو بشكل كبير ، مما أدى إلى زيادة تصدير ثمار الأفوكادو من كينيا [4]. يعود سبب زيادة الإنتاج إلى ارتفاع الطلب على ثمار الأفوكادو في السوق العالمية بسبب وعي المستهلك بالقيمة الغذائية للفاكهة [5]. على الرغم من زيادة إنتاج وتصدير ثمار الأفوكادو من كينيا ، إلا أن ارتفاع حالات الإصابة بأمراض فطرية ما بعد الحصاد ، بما في ذلك الأنثراكنوز و SER ، يحد من تسويق الفاكهة ويسهم في زيادة خسائر المنتجين [6 ، 7].

تتطور أعراض تعفن نهاية الساق (SER) على ثمار الأفوكادو أثناء نضجها. يتميز بالذبل ، متبوعًا بالتعفن البني إلى الأسود الذي يبدأ عند نهاية جذع الثمرة. مع تقدم التعفن ، قد تحتوي حزم الأوعية الدموية الداخلية على ألوان سوداء إلى بنية اللون ، وفي النهاية يتم استهلاك الفاكهة بأكملها بواسطة العفن [8 ، 9]. الفاكهة بالكاد تظهر أعراض SER قبل الحصاد. علاوة على ذلك ، غالبًا ما يحدث SER في دار التعبئة أثناء النقل أو بعد التسويق.

تم الإبلاغ عن أنواع فطرية مختلفة تسبب SER على ثمار الأفوكادو. في شيلي ، تم الإبلاغ عن مسببات الأمراض الفطرية لتسبب SER في أفراد من عائلة Botryosphaeriaceae ، وهي ديبلوديا موتيلا, D. pseudoseriata, د, Dothiorella iberica, Lasiodiplodia theobromae, Neofusicoccum australe, ن. nonquaesitum، و ن. بارفوم [10]. في ايطاليا، ن. بارفوم, Colletotrichum gloeosporioides ، أو C. fructicola و ديابورثيكولاسيا أو D. Sterilis كانت أكثر مسببات الأمراض SER عزلة [9]. في كاليفورنيا، Neofusicoccum luteum و فوموبسيس بيرسي تم الإبلاغ عنها [8] أثناء وجودها في جنوب إفريقيا ، Thyronectria pseudotrichia, Dothiorella aromatica, Pestalotiopsis المبرقشة, Lasiodiplodia theobromae, Rhizopus stolonifer, سامبوسينوم الفيوزاريوم، و فيوزاريوم سولاني تم الإبلاغ عنها [11].

في كينيا ، ومع ذلك ، لم يتم تحديد العامل الممرض الفعلي الذي يسبب SER ، ولكن من ناحية أخرى ، تم وصف مسببات الأمراض الأنثراكنوز [12]. لذلك ، هدفت هذه الدراسة إلى التعرف على مسببات الأمراض الفطرية المرتبطة بـ SER لثمار الأفوكادو في المرتفعات الوسطى في كينيا واختبار قدرتها المرضية.

2. المواد والأساليب

2.1. منطقة الدراسة وجمع العينات

أجريت الدراسة في مقاطعة مورانجا ، وهي المقاطعة الرائدة في إنتاج وتصدير ثمار الأفوكادو في كينيا [1]. جغرافياً ، تقع المقاطعة بين خطي عرض 0 ° 34 ′ جنوباً و 1 ° 07 جنوباً وخطي طول 36 ° شرقاً و 37 ° 27 شرقاً ، بارتفاع 914 م أسل في الشرق و 3353 م أسل في الغرب. تُزرع ثمار الأفوكادو في المناطق الزراعية الإيكولوجية الثانية والثالثة والرابعة التي يتراوح متوسط ​​درجات الحرارة فيها من 18.0 درجة مئوية إلى 27.2 درجة مئوية ومتوسط ​​هطول الأمطار السنوي من 1600 ملم إلى 900 ملم [13].

بين سبتمبر 2017 ومارس 2018 ، تم استخدام أخذ العينات بشكل منهجي لاختيار 162 بستانًا متضمنة في الدراسة. كانت البساتين تحتوي على أكثر من خمس أشجار فاكهة "هاس". تم حصاد ست ثمار أفوكادو ناضجة عشوائيًا من كل خمس أشجار فاكهة أفوكادو تم اختيارها عشوائيًا في كل بستان تم أخذ عينات منه. بالإضافة إلى ذلك ، تم شراء 10 فواكه "هاس" ، في مراحل مختلفة من النضج ، من تجار مختلفين في ثلاثة أسواق رئيسية (كاندارا ، وكيروارا ، ومراجوا) داخل المحافظة على فترات أسبوعية لمدة شهرين. تم جمع ما مجموعه 453 فاكهة من 4860 فاكهة تم حصادها من البساتين و 240 فاكهة من السوق تم أخذ عينات منها وتعبئتها في علب كرتون ونقلها إلى منظمة البحوث الزراعية والحيوانية الكينية (KALRO) ، كاندارا ، حيث تم تحضينها في درجة حرارة الغرفة (22 درجة مئوية) C – 25 ° C) لمدة 7-14 يومًا للسماح بتطوير SER.

2.2. عزل الفطريات

تم غسل 207 فاكهة من البساتين و 125 فاكهة من السوق التي ظهرت عليها أعراض SER بماء الصنبور النظيف ، وتعقيمها السطحي بـ 2٪ هيبوكلوريت الصوديوم لمدة دقيقة واحدة ، وشطفها بالماء المقطر ، وتجفيفها بالهواء. تم وضع قطع صغيرة من اللحم من حواف اللحم المصحوب بأعراض في جو معقم في أطباق بتري قطرها 9 سم تحتوي على أجار دكستروز البطاطس (PDA) المعدل بكبريتات الستربتومايسين وحضنت في درجة حرارة الغرفة (22 درجة مئوية -25 درجة مئوية) لمدة خمسة أيام. تم الحصول على الثقافات النقية عن طريق نقل أطراف الفطريات على 1.5٪ (وزن / حجم) أجار ماء (WA) وسمح لها بالنمو بين عشية وضحاها. تم نقل أطراف Hyphal لنمو mycelia في WA لاحقًا إلى PDA بعد تعديلها بكبريتات الستربتومايسين. تم استخدام الزجاجة العالمية المائلة للحفاظ على الثقافات النقية للممرض وتخزينها في الثلاجة عند 4 درجات مئوية لاستخدامها لاحقًا.

2.2.1. إعداد تعليق كونيديال

تم غمر الثقافات النقية التي يبلغ عمرها أربعة عشر يومًا في PDA بالماء المقطر المعقم. تم استخدام حلقة سلكية معقمة لكشط الكونيديا وإحضارها إلى التعليق. يرشح المعلق من خلال قطعة قماش موسلين مزدوجة الطبقة ويخفف ناتج الترشيح المجمع بالتسلسل إلى 1 × 10 5. تم استخدام مقياس الدم لضبط تركيز البوغ.

2.3 التوصيف المورفولوجي للعزلة

للحث على إنتاج الكونيديا ، تم نقل قطع صغيرة من الفطريات من العزلات إلى أطباق بتري بقطر 9 سم مع PDA المعدلة برقائق خشب الأفوكادو المعقم وحضنت عند 25 ± 1 درجة مئوية لمدة أربعة أسابيع. تم تحديد العزلات شكليًا بناءً على الخصائص الثقافية والمجهرية كما وصفها فالنسيا وآخرون. [10] ، فيليبس وآخرون. [14] ، وواتانابي [15]. تم استخدام اللاكتوفينول الأزرق في التحديد المجهري. طول وعرض كونيديا (ن = 50) من كل عزلة باستخدام المجهر الضوئي Zeiss-Primo Star ، مقترنًا بكاميرا AxioCam ERc 5s.

2.4 الخصائص الجزيئية
2.4.1. استخراج الحمض النووي

بروتوكول استخراج فطري محسّن وصفه Innis et al. [16] تم استخدامه لاستخراج الحمض النووي من ثلاث عزلات تمثيلية لكل نوع. تم استخدام الثقافات الفطرية النقية المشتقة من الجراثيم المفردة المحتضنة في PDA. تم وضع أربعين مليغرام (ملغ) من الفطريات في أنبوب ميكروسينتريفوجي يحتوي على 300 ميكرومترلتر من المخزن المؤقت للاستخراج (Tris-HCl ، 200 ملي فتاه 8.5 EDTA ، 25 ملي مولار كلوريد الصوديوم 250 مم SDS ، 0.5٪) مع حبات زجاجية. تم وضع الأنابيب في مطحنة genogrinder fastprep®-24 لمدة دقيقة واحدة عند 2000 دورة في الدقيقة. مائتي ميكرولتر (ميكرومترل) من 3 ملي أسيتات الصوديوم pH5.2 وتم تبريده عند -20 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بعد الحضانة ، تم طرد العينات لمدة 10 دقائق عند 13000 دورة في الدقيقة. بعد ذلك ، تم نقل المواد الطافية إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة 1.5 مل. تمت إضافة كميات متساوية من الأيزوبروبانول إلى المواد الطافية وسمح لها بالوقوف لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد خمس دقائق ، تم طرد العينات لمدة 10 دقائق عند 13000 دورة في الدقيقة وتم التخلص من المادة الطافية. خمسمائة ميكرومترثم تمت إضافة لتر من 70٪ من الإيثانول إلى الحبيبات وطرده عند 13000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق لغسل الحبيبات. تم تجفيف كريات الحمض النووي التي تم الحصول عليها بالهواء ثم إعادة تعليقها في 50 ميكرومترلتر من المخزن المؤقت منخفض الملح TE (Tris-HCl ، 1 مم ، الرقم الهيدروجيني 8 EDTA ، 0.1 مم) ويتم تخزينه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية للاستخدام لاحقًا. تم تحديد جودة الحمض النووي عن طريق الرحلان الكهربائي لجيل الاغاروز وقياسها باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop ND-1000. تم توحيد الحمض النووي أو تطبيعه إلى 20 نانوغرام /ميكرومترل لتفاعلات البلمرة المتسلسلة (PCR).

2.4.2. تضخيم وتسلسل الحمض النووي

تم استخدام الحمض النووي المستخرج كقوالب في PCR. مجموعتان من البادئات ، ITS1 (تككجتاجتجاككتجكج) و ITS4 (TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC) ، ITS5 (GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G) و ITS1 ، في تضخيم منطقة النسخ الداخلية rDNA للعزلات الفطرية [16]. أحجام تفاعل PCR من 25 ميكرومترلتر يحتوي على 2.5 ميكرومترلتر من 0.2 ميكرومترΜ من كل جهاز تمهيدي ، 5 × عازلة رد فعل My Taq ، 0.25 ميكرومترl Taq polymerase (Bioline ، Meridian Life Science ، Memphis ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، 40 نانوغرام /ميكرومترل من كل قالب DNA ، و 12.75 ميكرومترتم استخدام لتر من الماء الجزيئي. للتضخيم ، تم استخدام GeneAmp 9700 DNA Cycler (Perkin-Elmer). تضمنت العملية خطوة تغيير طبيعة أولية عند 94 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، تليها 35 دورة ، وتغيير الطبيعة عند 94 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، والتلدين عند 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية متبوعًا بالتمديد لمدة دقيقة واحدة عند 68 درجة مئوية ، و خطوة التمديد النهائية لمدة 5 دقائق عند 68 درجة مئوية. لتأكيد التضخيم ، تم تشغيل منتجات PCR على هلام agarose بنسبة 1.5٪ وتم تصويرها تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية باستخدام ENDURO ™ GDS. تم تنظيف منتجات PCR باستخدام مجموعة تنظيف Qiagen PCR وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة وتم تقديمها لتسلسل Sanger باستخدام بادئات أمامية وعكسية في منصة Inqaba Africa Genomic ، جنوب إفريقيا.

2.4.3. تحليل المعلوماتية الحيوية

تم تحليل بيانات التسلسل من خلال تخصيص قراءات للعينات والفهارس والبادئات والمحولات. تم تمييز البادئات باستخدام Picard (https://broadinstitute.github.io/picard/index.html). تم استخدام Bam2fastq (https://gsl.hudsonalpha.org/information/software/bam2fastq) لتحويل ملفات bam الناتجة إلى fastq. تم تقييم جودة التسلسل الإجمالية للقراءات بصريًا باستخدام برنامج Fast QC (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/). تضمنت معلمات الجودة المستخدمة في تصفية القراءات حدًا أدنى للطول يبلغ 250 نقطة أساس وقيمة QC لا تقل عن 30. تم إجراء التشذيب المطابق للمحولات والتسلسلات منخفضة الجودة من جميع القراءات. تم إجراء التحليل والمعالجة اللاحقة للقراءات في CLC Genomic Workbench 11.0 ، حيث تم دمج القراءات المتداخلة. تم إجراء تجميع de novo للقراءات غير المجمعة ومحاذاة القراءات الأولية باستخدام CLC Genomics Workbench 11.0 مع المعلمات الافتراضية (الحد الأدنى contig = 100 bp ، 23 K-mer ، جزء التشابه = 80٪ ، وكسر الطول = 50٪). تم إجراء تحليل BLAST لتسلسل ITS لدعم التحديد المورفولوجي للعينات في قاعدة بيانات NCBI. تم إيداع تسلسلات ITS في GeneBank باستخدام BankIT.

2.5 اختبار الإمراضية

لتأسيس افتراضات كوخ ، Geotrichum candidum, Fusarium equiseti, أوكسيسبوروم الفيوزاريوم, فيوزاريوم سولاني, Lasiodiplodia theobromae, Neofusicoccum parvum ، و النكتريا الكاذبة تم إخضاعهم لاختبار الإمراضية كما وصفه فريمان وآخرون. [17] وتويزييمانا وآخرون. [8]. تم حصاد ثمار "هاس" الصحية من المزارع المعروف عنها انخفاض معدل حدوث SER في مقاطعة مورانجا. تم غسل الثمار بمياه الصنبور النظيفة لإزالة أي مخلفات من التربة. تم تعقيم الثمار سطحيًا عن طريق غمسها في 75٪ إيثانول لمدة ثلاث دقائق تقريبًا ، وشطفها بالماء المقطر ، ثم تجفيفها بالهواء. تم إخضاع كل عزلة لطريقتين للتلقيح.

تم استخدام حفار فلين معقم (قطره 5 مم) لجرح نهاية ساق كل فاكهة وتم وضع أقراص فطرية بقطر مكافئ تم الحصول عليها من حافة الثقافات النقية التي تنمو بنشاط على الجرح. تم ترتيب ستة ثمار مُلقَّحة لكل مُمْرِض وست فواكه تحكم مُلقَّحة بـ PDA عادي على صواني فردية ومُغطاة بغشاء ملتصق للحفاظ على الرطوبة وتجنب التلوث. تم تحضين الثمار عند درجة حرارة الغرفة 24 درجة مئوية ± 1.

بعد قطع قشرة الفواكه المجففة بالهواء ، تم وضع تعليق كونيدال (5 × 10 −5 كونيدال / مل) على فتحة نهاية الجذع ومغطى بغشاء ملتصق. تم ترتيب ستة فواكه مُلقَّحة لكل مُمْرِض وست ثمار ضابطة مُلقَّحة بالماء المقطر في صواني فردية ومُغطاة بغشاء ملتصق. تم تحضين الثمار الملقحة عند 24 ± 1 درجة مئوية. تم التقييم بعد 12 يومًا عن طريق تقطيع الثمار طوليًا وتصنيف أعراض SER على مقياس تصنيف 0-4 على النحو التالي: 0 = لا يوجد تعفن مرئي 1 = 1-25٪ تعفن 2 = 25-50٪ تعفن 3 = 50-75٪ تعفن 4 = -75٪ تعفن (الشكل 1). في نهاية اختبار الإمراضية ، تم إجراء إعادة عزل من الثمار التي تظهر عليها الأعراض ، ومقارنة المستعمرات الفطرية المعزولة شكليًا بالعزلات الأصلية [8 ، 9]. تم حساب شدة SER على ثمار الأفوكادو باستخدام الصيغة التالية [18]:


8.4: الإمراض الفطرية - علم الأحياء

من تلف المحاصيل والأغذية إلى العدوى الشديدة في أنواع الحيوانات ، تنتشر الطفيليات الفطرية ومسببات الأمراض على نطاق واسع ويصعب علاجها.

أهداف التعلم

أعط أمثلة على الفطريات التي هي طفيليات ومسببات الأمراض النباتية والحيوانية

الماخذ الرئيسية

النقاط الرئيسية

  • في النباتات ، يمكن للفطريات أن تدمر الأنسجة النباتية بشكل مباشر أو من خلال إنتاج السموم القوية ، والتي عادة ما تنتهي بموت العائل ويمكن أن تؤدي إلى الإرغوت في الحيوانات مثل البشر.
  • أثناء الإصابة بالفطريات ، تهاجم الفطريات ، مثل الفطريات الجلدية ، المضيفين مباشرةً عن طريق استعمار أنسجتها وتدميرها.
  • تشمل أمثلة الطفيليات الفطرية ومسببات الأمراض في الحيوانات التي تسبب داء الفطريات Batrachochytrium dendrobatidis, جيوميسيس المدمرة، و كبسولات الهستوبلازما.
  • الفطريات الجهازية ، مثل حمى الوادي أو داء النوسجات أو أمراض الرئة ، هي أمراض فطرية تنتشر في الأعضاء الداخلية وعادة ما تدخل الجسم عن طريق الجهاز التنفسي.
  • الفطريات الانتهازية ، الالتهابات الفطرية الشائعة في جميع البيئات ، تستفيد بشكل أساسي من الأفراد الذين لديهم جهاز مناعي ضعيف ، مثل مرضى الإيدز.
  • يمكن أن تسبب الفطريات أيضًا الفطريات ، وهو مرض يسببه تناول الفطر السام الذي يؤدي إلى التسمم.

الشروط الاساسية

  • فطار: مرض فطري ناتج عن عدوى وضرر مباشر
  • جلدي: فطر طفيلي يفرز إنزيمات خارج الخلية تعمل على تكسير الكيراتين ، مما يتسبب في التهابات الجلد ، مثل حكة جوك والقدم الرياضي.
  • الأفلاتوكسين: المركبات السامة المسببة للسرطان التي تطلقها الفطريات من جنس الرشاشيات تلوث الجوز وحصاد الحبوب
  • الشقران: أي فطريات من جنس Claviceps تتطفّل على الحشائش

الطفيليات الفطرية ومسببات الأمراض

إن إنتاج محاصيل كافية ذات نوعية جيدة أمر ضروري لوجود الإنسان. دمرت أمراض النبات المحاصيل ، وتسببت في انتشار المجاعة. العديد من مسببات الأمراض النباتية هي فطريات تسبب تسوس الأنسجة وموت المضيف في نهاية المطاف. بالإضافة إلى تدمير الأنسجة النباتية بشكل مباشر ، فإن بعض مسببات الأمراض النباتية تفسد المحاصيل من خلال إنتاج سموم قوية. الفطريات مسؤولة أيضًا عن تلف الطعام وتعفن المحاصيل المخزنة. على سبيل المثال ، الفطريات كلافيسبس بوربوريا يسبب الشقران ، وهو مرض يصيب محاصيل الحبوب (خاصة الجاودار). على الرغم من أن الفطر يقلل من محصول الحبوب ، إلا أن تأثيرات السموم القلوية للإرغوت على الإنسان والحيوان لها أهمية أكبر بكثير. في الحيوانات ، يشار إلى المرض باسم الإرغوت. العلامات والأعراض الأكثر شيوعًا هي التشنجات والهلوسة والغرغرينا وفقدان اللبن في الماشية. العنصر النشط للإرغوت هو حمض الليسرجيك ، وهو مقدمة لعقار LSD. اللُحوم والصدأ والعفن البودرة أو الناعم هي أمثلة أخرى لمسببات الأمراض الفطرية الشائعة التي تؤثر على المحاصيل.

مسببات الأمراض الفطريةبعض مسببات الأمراض الفطرية تشمل (أ) العفن الأخضر على الجريب فروت ، (ب) البياض الدقيقي على الزينية ، (ج) صدأ الساق على حزمة من الشعير ، (د) العفن الرمادي على العنب.

الأفلاتوكسينات هي مركبات سامة ومسرطنة تطلقها فطريات الجنس فطر الرشاشيات. بشكل دوري ، تتلوث محاصيل الجوز والحبوب بالأفلاتوكسين ، مما يؤدي إلى سحب كميات كبيرة من المنتجات. هذا في بعض الأحيان يدمر المنتجين ويسبب نقص الغذاء في البلدان النامية.

الطفيليات ومسببات الأمراض الحيوانية والبشرية

يمكن أن تؤثر الفطريات على الحيوانات ، بما في ذلك البشر ، بعدة طرق. الفطار مرض فطري ينتج عن العدوى والأضرار المباشرة. تهاجم الفطريات الحيوانات مباشرة عن طريق استعمار الأنسجة وتدميرها. التسمم الفطري هو تسمم البشر (والحيوانات الأخرى) بالأطعمة الملوثة بالسموم الفطرية (السموم الفطرية). يصف Mycetismus ابتلاع السموم مسبقة التشكيل في الفطر السام. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الأفراد الذين يظهرون فرط الحساسية للعفن والجراثيم يصابون بردود فعل تحسسية قوية وخطيرة. يصعب علاج الالتهابات الفطرية بشكل عام لأن الفطريات ، على عكس البكتيريا ، هي حقيقيات النوى. تستهدف المضادات الحيوية الخلايا بدائية النواة فقط ، في حين أن المركبات التي تقتل الفطريات تضر أيضًا المضيف الحيواني حقيقي النواة.

العديد من الالتهابات الفطرية سطحية أي تحدث على جلد الحيوان. يطلق عليها داء فطري جلدي (& # 8220skin & # 8221) ، يمكن أن يكون لها آثار مدمرة. على سبيل المثال ، قد يكون سبب انخفاض عدد الضفادع في العالم في السنوات الأخيرة بسبب الفطريات Batrachochytrium dendrobatidis، الذي يصيب جلد الضفادع ويفترض أنه يتداخل مع التبادل الغازي. وبالمثل ، قتل أكثر من مليون خفاش في الولايات المتحدة بمتلازمة الأنف الأبيض ، والتي تظهر على شكل حلقة بيضاء حول فم الخفاش. وهو ناتج عن الفطريات المحبة للبرد جيوميسيس المدمرة، الذي ينشر أبواغه القاتلة في الكهوف حيث تسبت الخفافيش. يبحث علماء الفطريات عن انتقال ، وآلية ، والتحكم في G. Destuctans لوقف انتشاره.

نادرًا ما تنتشر الفطريات التي تسبب الفطريات السطحية للبشرة والشعر والأظافر إلى الأنسجة الكامنة. غالبًا ما يتم تسمية هذه الفطريات بشكل خاطئ & # 8220dermatophytes & # 8221 ، من الكلمات اليونانية dermis التي تعني الجلد و phyte التي تعني النبات ، على الرغم من أنها ليست نباتات. تسمى الفطريات الجلدية أيضًا & # 8220ringworms & # 8221 بسبب الحلقة الحمراء التي تسببها على الجلد. تفرز إنزيمات خارج الخلية تعمل على تكسير الكيراتين (بروتين موجود في الشعر والجلد والأظافر) ، مما يسبب حالات مثل حكة القدم وحكة اللعب. عادة ما يتم علاج هذه الحالات بالكريمات والمساحيق الموضعية التي لا تستلزم وصفة طبية والتي يتم إزالتها بسهولة. قد يتطلب داء فطريات سطحي أكثر استمرارًا أدوية عن طريق الفم بوصفة طبية.

عدوى الفطريات: (أ) تظهر السعفة على شكل حلقة حمراء على الجلد (ب) Trichophyton violaceum، الموضح في هذا المجال الضوئي المجهري الخفيف ، يسبب داء فطري سطحي على فروة الرأس (ج) كبسولات الهستوبلازما هو عديم الفطريات يصيب الشعب الهوائية ويسبب أعراضاً مشابهة للإنفلونزا.

ينتشر داء فطريات جهازي إلى الأعضاء الداخلية ، وغالبًا ما يدخل الجسم عن طريق الجهاز التنفسي. على سبيل المثال ، يوجد داء الكروانيديا (حمى الوادي) بشكل شائع في جنوب غرب الولايات المتحدة حيث يقيم الفطر في الغبار. بمجرد استنشاقها ، تتطور الجراثيم في الرئتين وتسبب أعراضًا مشابهة لأعراض السل. يحدث داء النوسجات بسبب الفطريات ثنائية الشكل كبسولات الهستوبلازما. كما أنه يسبب التهابات رئوية. في حالات نادرة ، يتسبب في تورم أغشية الدماغ والحبل الشوكي. يتطلب علاج هذه الأمراض الفطرية والعديد من الأمراض الفطرية الأخرى استخدام الأدوية المضادة للفطريات التي لها آثار جانبية خطيرة.

الفطريات الانتهازية هي عدوى فطرية إما شائعة في جميع البيئات أو هي جزء من الكائنات الحية الطبيعية. وهي تؤثر بشكل أساسي على الأفراد الذين يعانون من ضعف في جهاز المناعة. يعاني المرضى في المراحل المتأخرة من الإيدز من داء فطري انتهازي يمكن أن يهدد حياتهم. الخميرة المبيضات sp.، وهو عضو شائع في الكائنات الحية الطبيعية ، يمكن أن ينمو دون رادع ويصيب المهبل أو الفم (القلاع الفموي) إذا تغير الرقم الهيدروجيني للبيئة المحيطة ، أو دفاعات الجهاز المناعي للشخص ، أو السكان الطبيعي للبكتيريا.

يمكن أن يحدث التشنج الفطري عند تناول الفطر السام. يتسبب في عدد من الوفيات البشرية خلال موسم قطف الفطر. تشبه العديد من أجسام الثمار الصالحة للأكل من الفطريات الأقارب شديدة السمية. يتم تحذير صائدي الفطر الهواة بفحص محصولهم بعناية وتجنب تناول الفطر المشكوك في أصله.


محتويات

تعتبر مكافحة أمراض النبات أمرًا بالغ الأهمية في الإنتاج الموثوق للغذاء ، كما أنها تسبب مشاكل كبيرة في الاستخدام الزراعي للأراضي والمياه والوقود والمدخلات الأخرى.تحمل النباتات في كل من المجموعات الطبيعية والمزروعة مقاومة متأصلة للأمراض ، ولكن هناك العديد من الأمثلة على تأثيرات الأمراض النباتية المدمرة مثل المجاعة الكبرى في أيرلندا ولفحة الكستناء ، فضلاً عن الأمراض النباتية الشديدة المتكررة مثل انفجار الأرز ونيماتودا كيس فول الصويا والحمضيات آفة.

ومع ذلك ، فإن مكافحة الأمراض ناجحة إلى حد معقول بالنسبة لمعظم المحاصيل. تتحقق السيطرة على الأمراض عن طريق استخدام النباتات التي تم تربيتها لمقاومة جيدة للعديد من الأمراض ، ومن خلال مناهج زراعة النباتات مثل تناوب المحاصيل ، واستخدام البذور الخالية من مسببات الأمراض ، وتاريخ الزراعة المناسب وكثافة النبات ، والتحكم في رطوبة الحقل ، ومبيدات الآفات استعمال. هناك حاجة إلى استمرار التقدم في علم أمراض النبات لتحسين مكافحة الأمراض ، ومواكبة التغيرات في ضغط المرض الناجم عن التطور المستمر وحركة مسببات الأمراض النباتية والتغيرات في الممارسات الزراعية.

تسبب أمراض النبات خسائر اقتصادية كبيرة للمزارعين في جميع أنحاء العالم. عبر المناطق الكبيرة والعديد من أنواع المحاصيل ، تشير التقديرات إلى أن الأمراض تقلل عادةً من غلة النباتات بنسبة 10٪ كل عام في الأماكن الأكثر تطورًا ، ولكن غالبًا ما تتجاوز الخسائر الناتجة عن الأمراض 20٪ في الأماكن الأقل تطورًا. تقدر منظمة الأغذية والزراعة أن الآفات والأمراض مسؤولة عن حوالي 25٪ من فقدان المحاصيل. لحل هذه المشكلة ، هناك حاجة إلى طرق جديدة للكشف عن الأمراض والآفات في وقت مبكر ، مثل أجهزة الاستشعار الجديدة التي تكتشف روائح النباتات والتحليل الطيفي وعلم الضوئيات الحيوية القادرة على تشخيص صحة النبات والتمثيل الغذائي. [2]

في معظم النظم المرضية ، تعتمد الفوعة على الإنزيمات المائية - والفئة الأوسع من البروتينات المتدهورة لجدار الخلية - التي تعمل على تدهور جدار الخلية. الغالبية العظمى من CWDPs منتجة لمسببات الأمراض وتستهدف البكتين (على سبيل المثال ، البكتينستراز ، البكتات الليز ، والبكتينازات). بالنسبة للميكروبات ، تعتبر عديدات السكاريد الموجودة في جدار الخلية مصدرًا غذائيًا بحد ذاتها ، ولكنها في الغالب مجرد حاجز يجب التغلب عليه.

تنمو العديد من مسببات الأمراض أيضًا بشكل انتهازي عندما يكسر العائل جدران الخلايا الخاصة به ، في أغلب الأحيان أثناء نضج الثمار. [3]

تحرير الفطريات

تنتمي معظم الفطريات الممرضة للنبات إلى الفطريات الزائدة والفطريات القاعدية. تتكاثر الفطريات عن طريق الاتصال الجنسي واللاجنسي عن طريق إنتاج الأبواغ والتركيبات الأخرى. قد تنتشر الجراثيم لمسافات طويلة عن طريق الهواء أو الماء ، أو قد تكون محمولة في التربة. العديد من الفطريات التي تعيش في التربة قادرة على العيش بشكل رمي ، وتنفيذ جزء من دورة حياتها في التربة. هذه هي السابروتروف الاختيارية. يمكن السيطرة على الأمراض الفطرية من خلال استخدام مبيدات الفطريات والممارسات الزراعية الأخرى. ومع ذلك ، غالبًا ما تتطور سلالات جديدة من الفطريات مقاومة لمبيدات الفطريات المختلفة. تستعمر مسببات الأمراض الفطرية ذات التغذية الحيوية الأنسجة النباتية الحية وتحصل على المغذيات من الخلايا المضيفة الحية. تصيب مسببات الأمراض الفطرية الناخر الأنسجة المضيفة وتقتلها وتستخرج العناصر الغذائية من الخلايا المضيفة الميتة. تشمل مسببات الأمراض الفطرية الهامة للنباتات ما يلي: [ بحاجة لمصدر ]

الزقالات تحرير

  • الفيوزاريوم النيابة. (مرض الذبول الفيوزاريوم)
  • Thielaviopsis النيابة. (آفة العفن ، تعفن الجذر الأسود ، Thielaviopsis عفن الجذور)
  • فرتيسيليوم النيابة.
  • ماغنابورثي جريسي (انفجار أرز)
  • Sclerotinia sclerotiorum (عفن قطني)

تحرير الفطريات القاعدية

  • أوستيلاغو النيابة. (smuts) تفحم الشعير
  • ريزوكتونيا النيابة.
  • Phakospora pachyrhizi (صدأ فول الصويا)
  • بوتشينيا النيابة. (صدأ شديد للحبوب والأعشاب)
  • أرميلاريا النيابة. (أنواع فطريات العسل ، مسببات الأمراض الفتاكة للأشجار)

الكائنات الحية الشبيهة بالفطريات

تحرير Oomycetes

الفطريات هي كائنات تشبه الفطريات. [4] وهي تشمل بعض أكثر مسببات الأمراض تدميراً للنبات بما في ذلك الجنس فيتوفثورا، والتي تشمل العوامل المسببة لمرض اللفحة المتأخرة في البطاطس [4] وموت البلوط المفاجئ. [5] [6] أنواع معينة من الفطريات هي المسؤولة عن تعفن الجذور.

على الرغم من عدم ارتباطها ارتباطًا وثيقًا بالفطريات ، فقد طورت الفطريات الفطرية استراتيجيات عدوى مماثلة. Oomycetes قادرة على استخدام البروتينات المستجيبة لإيقاف دفاعات النبات في عملية العدوى. [7] يصنف علماء أمراض النبات عادة مع مسببات الأمراض الفطرية.

تشمل مسببات الأمراض النباتية الهامة ما يلي:

تحرير فيتوميكسيا

تسبب بعض أنواع العفن اللزج في Phytomyxea أمراضًا مهمة ، بما في ذلك جذر الكرنب في الملفوف وأقاربه والجرب البودرة في البطاطس. هذه هي سببها أنواع المتصورة و سبونجوسبورا، على التوالى.

تحرير البكتيريا

معظم البكتيريا المرتبطة بالنباتات هي في الواقع رمية ولا تسبب ضررًا للنبات نفسه. ومع ذلك ، هناك عدد صغير ، حوالي 100 نوع معروف ، قادرة على التسبب في المرض. [8] تنتشر الأمراض البكتيرية بشكل أكبر في المناطق شبه الاستوائية والاستوائية من العالم.

معظم البكتيريا المسببة للأمراض النباتية على شكل قضيب (عصيات). من أجل التمكن من استعمار النبات ، لديهم عوامل إمراضية محددة. هناك خمسة أنواع رئيسية من العوامل المسببة للأمراض البكتيرية معروفة: استخدامات جدار الخلية - الإنزيمات المهينة ، والسموم ، والبروتينات المؤثرة ، والهرمونات النباتية ، والسكريات الخارجية.

مسببات الأمراض مثل اروينيا الأنواع تستخدم جدار الخلية الإنزيمات المهينة لتسبب العفن الناعم. الأجرعية الأنواع تغير مستوى الأكسينات لتسبب الأورام مع الهرمونات النباتية. يتم إنتاج عديدات السكاريد الخارجية عن طريق البكتيريا وتمنع أوعية نسيج الخشب ، مما يؤدي غالبًا إلى موت النبات.

تتحكم البكتيريا في إنتاج عوامل الإمراضية من خلال استشعار النصاب.

مسببات الأمراض البكتيرية الهامة:

Phytoplasmas و spiroplasmas تحرير

فيتوبلازما و سبيروبلازما هي أجناس من البكتيريا تفتقر إلى جدران الخلايا وترتبط بالميكوبلازما ، وهي من مسببات الأمراض البشرية. ويشار إليهما معًا باسم الموليتس. تميل أيضًا إلى امتلاك جينومات أصغر من معظم البكتيريا الأخرى. تنتقل عادة عن طريق الحشرات الماصة للنسغ ، حيث يتم نقلها إلى لحاء النبات حيث تتكاثر.

تحرير الفيروسات وأشباه الفيروسات والكائنات الشبيهة بالفيروسات

هناك أنواع عديدة من فيروسات النبات ، وبعضها لا تظهر عليه أعراض. في ظل الظروف العادية ، تسبب فيروسات النبات فقط خسارة في غلة المحاصيل. لذلك ، ليس من المجدي اقتصاديًا محاولة السيطرة عليها ، والاستثناء هو عندما تصيب الأنواع المعمرة ، مثل أشجار الفاكهة.

تحتوي معظم فيروسات النبات على جينومات RNA صغيرة وحيدة الشريطة. ومع ذلك ، فإن بعض فيروسات النبات تحتوي أيضًا على الحمض النووي الريبي مزدوج الشريطة أو جينومات الحمض النووي المفردة أو المزدوجة التي تقطعت بهم السبل. قد تقوم هذه الجينومات بتشفير ثلاثة أو أربعة بروتينات فقط: نسخة متماثلة ، وبروتين غلاف ، وبروتين حركي ، للسماح للخلية بحركة الخلية من خلال plasmodesmata ، وأحيانًا بروتين يسمح بالانتقال بواسطة ناقل. يمكن أن تحتوي فيروسات النبات على العديد من البروتينات وتستخدم العديد من طرق الترجمة الجزيئية المختلفة.

تنتقل فيروسات النبات بشكل عام من نبات إلى آخر عن طريق ناقل ، ولكن يحدث أيضًا انتقال ميكانيكي ونقل البذور. غالبًا ما يكون انتقال النواقل عن طريق حشرة (على سبيل المثال ، حشرات المن) ، ولكن تبين أن بعض الفطريات والديدان الخيطية والبروتوزوا كانت نواقل فيروسية. في كثير من الحالات ، تكون الحشرة والفيروس خاصين بانتقال الفيروس مثل نطاط أوراق البنجر الذي ينقل الفيروس المتعرج العلوي الذي يسبب المرض في العديد من نباتات المحاصيل. [11] أحد الأمثلة على ذلك هو مرض الموزاييك للتبغ حيث تتقزم الأوراق ويتلف الكلوروفيل في الأوراق. مثال آخر هو قمة بانشي من الموز ، حيث يكون النبات قزمًا ، والأوراق العلوية تشكل وردة ضيقة.

تحرير النيماتودا

الديدان الخيطية هي حيوانات صغيرة شبيهة بالديدان متعددة الخلايا. يعيش الكثيرون بحرية في التربة ، ولكن هناك بعض الأنواع التي تتطفل على جذور النباتات. إنها مشكلة في المناطق الاستوائية وشبه الاستوائية من العالم ، حيث قد تصيب المحاصيل. نيماتودا كيس البطاطس (Globodera pallida و G. rostochiensis) موزعة على نطاق واسع في أوروبا وأمريكا الشمالية والجنوبية وتتسبب في أضرار بقيمة 300 مليون دولار في أوروبا كل عام. تمتلك نيماتودا تعقد الجذور مجموعة كبيرة من العوائل ، فهي تطفل أنظمة جذر النبات وبالتالي تؤثر بشكل مباشر على امتصاص الماء والعناصر الغذائية اللازمة لنمو النبات الطبيعي وتكاثره ، [12] بينما تميل نيماتودا الكيس إلى أن تكون قادرة على إصابة عدد قليل فقط من الأنواع. الديدان الخيطية قادرة على إحداث تغييرات جذرية في الخلايا الجذرية من أجل تسهيل أسلوب حياتها.

تحرير البروتوزوا والطحالب

هناك أمثلة قليلة لأمراض النبات التي تسببها الأوليات (على سبيل المثال ، فيتوموناس، kinetoplastid). [13] تنتقل على شكل أبواغ حيوانية معمرة قد تكون قادرة على البقاء في حالة الراحة في التربة لسنوات عديدة. علاوة على ذلك ، يمكنهم نقل فيروسات النبات. عندما تتلامس الأبواغ الحيوانية المتحركة مع شعر الجذر فإنها تنتج بلازموديوم يغزو الجذور.

بعض الطحالب الطفيلية عديمة اللون (على سبيل المثال ، سيفالوروس) تسبب أيضا أمراض النبات. [ بحاجة لمصدر ]

النباتات الطفيلية

يتم تضمين النباتات الطفيلية مثل الهشة والهدال والحامول في دراسة علم الأمراض النباتية. يمكن أن يكون الحامول ، على سبيل المثال ، قناة لنقل الفيروسات أو العوامل الشبيهة بالفيروسات من نبات مضيف إلى نبات ليس عادةً مضيفًا ، أو لعامل لا ينتقل عن طريق الكسب غير المشروع.

  • إنزيمات تحطيم جدار الخلية: تستخدم هذه لتكسير جدار الخلية النباتية من أجل إطلاق العناصر الغذائية بداخلها.
  • السموم: يمكن أن تكون غير خاصة بالمضيف ، مما يؤدي إلى إتلاف جميع النباتات ، أو خاص بالمضيف ، والذي يتسبب في تلف النبات المضيف فقط.
  • بروتينات المستجيب: يمكن إفرازها في البيئة خارج الخلية أو مباشرة في الخلية المضيفة ، غالبًا عن طريق نظام الإفراز من النوع الثالث. من المعروف أن بعض المؤثرات تقمع عمليات دفاع المضيف. يمكن أن يشمل ذلك: تقليل آليات الإشارات الداخلية للنباتات أو تقليل إنتاج المواد الكيميائية النباتية. [14] تُعرف البكتيريا والفطريات والفطريات الفطرية بهذه الوظيفة. [4] [15]
  • جراثيم: يمكن أن تكون جراثيم الفطريات الممرضة للنبات مصدرًا للعدوى على النباتات المضيفة. تلتصق الأبواغ أولاً بالطبقة الجلدية على أوراق وسيقان النبات المضيف. لكي يحدث هذا ، يجب نقل الجراثيم المعدية من مصدر الممرض ، وهذا يحدث عن طريق الرياح والمياه وناقلات الأمراض مثل الحشرات والبشر. عند وجود ظروف مواتية ، ستنتج البوغ خيوطًا معدلة تسمى أنبوب جرثومي. يُشكِّل أنبوب الجرثومة هذا لاحقًا انتفاخًا يُسمى بـ appressorium ، والذي يُكوِّن جدران الخلايا المصبوغة لبناء ضغط السحب. بمجرد أن يتراكم ضغط التورور الكافي ، يؤكد الضغط الضغط على الطبقة الجلدية في شكل ربط اختراق صلب. تساعد هذه العملية أيضًا على إفراز إنزيمات تحطيم جدار الخلية من الغشاء. بمجرد دخول الوتد الاختراق إلى النسيج المضيف ، فإنه يطور خيوطًا متخصصة تسمى haustorium. بناءً على دورة حياة مسببات الأمراض ، يمكن أن يغزو هذا الهاستوريوم الخلايا المجاورة ويغذيها داخل الخلايا أو يتواجد بين الخلايا داخل مضيف. [16]

يمكن الخلط بين بعض الاضطرابات اللاأحيائية والاضطرابات الناجمة عن مسببات الأمراض. تشمل الأسباب اللاأحيائية العمليات الطبيعية مثل الجفاف والصقيع والثلج والبرد وسوء التصريف ونقص المغذيات وترسب الأملاح المعدنية مثل كلوريد الصوديوم وحرق الرياح الجبسية والكسر بسبب العواصف وحرائق الغابات. يمكن أن تحدث اضطرابات مماثلة (تصنف عادةً على أنها غير حيوية) عن طريق التدخل البشري ، مما يؤدي إلى انضغاط التربة ، وتلوث الهواء والتربة ، والتملح الناجم عن الري وتمليح الطرق ، والإفراط في استخدام مبيدات الأعشاب ، والمناولة الخرقاء (مثل أضرار جزازة العشب على الأشجار) ، والتخريب. [ بحاجة لمصدر ]

علم الأوبئة: دراسة العوامل المؤثرة على تفشي وانتشار الأمراض المعدية. [17]

المرض رباعي الوجوه (هرم المرض) يجسد بشكل أفضل العناصر المرتبطة بأمراض النبات. يستخدم هذا الهرم مثلث المرض كأساس ، يتكون من عناصر مثل: المضيف ، ومسببات الأمراض ، والبيئة. بالإضافة إلى هذه العناصر الثلاثة ، يضيف البشر والوقت العناصر المتبقية لتكوين مرض رباعي الوجوه.

تاريخ: أوبئة أمراض النبات المعروفة تاريخيًا بناءً على خسائر فادحة:

- لفحة الكستناء في أمريكا الشمالية [20]

العوامل المؤثرة على الأوبئة:

المضيف: مستوى المقاومة أو الحساسية والعمر والوراثة.

الممرض: مقدار اللقاح وعلم الوراثة ونوع التكاثر

مقاومة أمراض النبات هي قدرة النبات على منع وإنهاء العدوى من مسببات الأمراض النباتية.

الهياكل التي تساعد النباتات على الوقاية من الأمراض هي: الطبقة الجلدية وجدران الخلايا وخلايا حماية الثغور. هذه بمثابة حاجز لمنع مسببات الأمراض من دخول المضيف النبات.

بمجرد أن تتخطى الأمراض هذه الحواجز ، تبدأ مستقبلات النبات مسارات تأشير لإنشاء جزيئات لمنافسة الجزيئات الأجنبية. تتأثر هذه المسارات وتحفزها الجينات داخل النبات المضيف وتكون عرضة للتلاعب بها عن طريق التكاثر الجيني لإنشاء أنواع من النباتات المقاومة لمسببات الأمراض المدمرة. [21]

تحرير الحجر الصحي المحلي

يمكن عزل رقعة نباتية أو نباتات فردية مريضة عن نمو صحي آخر. يمكن تدمير العينات أو نقلها إلى دفيئة للمعالجة أو الدراسة.

فحص الموانئ والحدود والحجر الصحي تحرير

هناك خيار آخر يتمثل في تجنب إدخال الكائنات الضارة غير المحلية من خلال التحكم في كل حركة المرور والأنشطة البشرية (على سبيل المثال ، دائرة الحجر الصحي والتفتيش الأسترالية) ، على الرغم من أن التشريع والإنفاذ أمران حاسمان لضمان فعالية دائمة. يوفر حجم التجارة العالمية اليوم - وسيستمر في توفير - فرصًا غير مسبوقة لإدخال الآفات النباتية. [ماك 1] في الولايات المتحدة ، حتى للحصول على أفضل تقدير من عدد هذه الإدخالات ، وبالتالي الحاجة إلى فرض الحجر الصحي في الموانئ والحدود والتفتيش ، سوف تتطلب زيادة كبيرة في عمليات التفتيش. [McC 2] في أستراليا ، هناك نقص مماثل في الفهم له أصل مختلف: عمليات تفتيش الموانئ ليست مفيدة جدًا لأن المفتشين يعرفون القليل جدًا عن التصنيف. غالبًا ما تكون هناك آفات أعطتها الحكومة الأسترالية الأولوية على أنها ضارة ليتم إبعادها عن البلاد ، ولكن لها أقارب تصنيفي قريب يخلطون بين هذه القضية. كما يصطدم المفتشون بالعكس - مواطنين أصليين غير مؤذيين ، أو مواطنين غير مكتشفين ، أو مواطنين تم اكتشافهم للتو لا يحتاجون إلى إزعاجهم ولكن يسهل الخلط بينهم وبين أفراد عائلاتهم الأجانب الخارجين عن القانون. [BH 1]

تمت تجربة تشعيع الطعام بالأشعة السينية والأشعة الإلكترونية / الحزمة الإلكترونية كعلاج للحجر الصحي لسلع الفاكهة القادمة من هاواي. كانت إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (إدارة الغذاء والدواء) ووزارة الزراعة الأمريكية (خدمة فحص صحة الحيوان والنبات) والمنتجون والمستهلكون جميعًا يقبلون النتائج - القضاء على الآفات بشكل أكثر شمولاً وتقليل التذوق من المعالجة الحرارية. [22]

تحرير ثقافي

يتم الاحتفاظ بالزراعة في بعض المجتمعات على نطاق ضيق ، ويتم رعايتها من قبل الشعوب التي تشمل ثقافتها تقاليد الزراعة التي تعود إلى العصور القديمة. (مثال على هذه التقاليد هو التدريب مدى الحياة على تقنيات مدرجات الأرض ، وتوقع الطقس والاستجابة له ، والتخصيب ، والتطعيم ، والعناية بالبذور ، والبستنة المخصصة). النشاط العام. في حين أنه بدائي بمعنى أنه الحل الأكثر كثافة في العمل إلى حد بعيد ، فإنه يكون أكثر من كافٍ حيثما كان عمليًا أو ضروريًا.

تحرير مقاومة النبات

تتيح التطورات الزراعية المتطورة الآن للمزارعين الاختيار من بين الأنواع المهجنة بشكل منهجي لضمان أكبر قدر من الصلابة في محاصيلهم ، كما يتناسب مع الملف المرضي لمنطقة معينة. تم إتقان ممارسات التكاثر على مدى قرون ، ولكن مع ظهور التلاعب الجيني ، أصبح من الممكن التحكم الدقيق في سمات المناعة في المحصول. ومع ذلك ، قد تكون هندسة مصانع الأغذية أقل جدوى ، حيث يتم تعويض الإنتاج المرتفع في كثير من الأحيان من خلال الشك الشعبي والرأي السلبي حول هذا "التلاعب" بالطبيعة.

التحرير الكيميائي

يمكن استخدام العديد من المركبات الطبيعية والاصطناعية لمكافحة التهديدات المذكورة أعلاه. تعمل هذه الطريقة عن طريق القضاء المباشر على الكائنات الحية المسببة للأمراض أو الحد من انتشارها ، ومع ذلك ، فقد ثبت أن لها تأثيرًا واسع النطاق ، عادةً ، ليكون جيدًا للنظام البيئي المحلي. من وجهة نظر اقتصادية ، قد تؤدي جميع الإضافات الطبيعية باستثناء أبسطها إلى استبعاد المنتج من الحالة "العضوية" ، مما قد يقلل من قيمة المحصول.

التحرير البيولوجي

قد يكون تناوب المحاصيل وسيلة فعالة لمنع الطفيليات من أن تصبح راسخة ، حيث أن الكائن الحي الذي يؤثر على الأوراق سوف يتم تجويعه عندما يتم استبدال المحصول الورقي بنوع درني ، إلخ. قد توجد وسائل أخرى لتقويض الطفيليات دون مهاجمتها مباشرة .

تحرير متكامل

يوفر استخدام طريقتين أو أكثر من هذه الطرق معًا فرصة أكبر للفعالية.

تطور علم أمراض النبات منذ العصور القديمة ، بدءًا من ثيوفراستوس ، لكن الدراسة العلمية بدأت في أوائل العصر الحديث باختراع المجهر ، وتطورت في القرن التاسع عشر. [23]


الفصل 8.4: معالجة العينات للثقافة الفطرية

عندما يشتبه في احتواء عينة على عامل مسبب للمرض الفطري ، يجب معالجتها للزراعة الفطرية ، بغض النظر عن النتائج المجهرية المباشرة. يوفر استرداد مسببات الأمراض الفطرية في المزرعة تشخيصًا نهائيًا لمرض الفطريات ، ويحدد العامل المسبب للمرض للعدوى ، ويسمح بتقييم القابلية في المختبر للعوامل المضادة للفطريات. إذا لم تكن هناك مواد كافية لكل من الفحص المجهري والثقافة ، فيجب استخدام جميع العينات للزراعة ، لأن هذا هو الإجراء الأكثر حساسية للكشف عن الفطريات. تم تصميم طرق معالجة العينات واستزراعها للحفاظ على قابلية الفطريات للحياة وللحصول على أقصى إنتاجية للكائنات الحية من العينات السريرية. يعتمد اختيار الوسائط لعزل الفطريات عن المواد السريرية في المقام الأول على الأنواع الأكثر احتمالًا التي يمكن العثور عليها في موقع معين أو في ظل حالة سريرية معترف بها. يتم تضمين الوسائط الانتقائية عند وجود كائنات دقيقة أخرى ، وخاصة البكتيريا ، في العينة. يجب معالجة العينات في أقرب وقت ممكن بعد الاستلام. قد تتطلب بعض العينات معالجة مسبقة قبل الثقافة.


تحديد مسببات الأمراض الفطرية وإمكانية إمراضها المرتبطة بالتعفن الجذعي لثمار الأفوكادو في كينيا.

في كينيا ، يعتبر الأفوكادو (Persea americana Mill.) أحد أهم محاصيل الفاكهة الاستوائية المعمرة ومصدرًا رئيسيًا للعملات الأجنبية. في عام 2017 ، استحوذت على حوالي 74٪ من قيمة إجمالي الفاكهة المصدرة من الدولة [1]. حاليًا ، يساهم الأفوكادو "هاس" بحوالي 80٪ من ثمار الأفوكادو المنتجة والمصدرة من كينيا [2]. وتشمل الأصناف الأخرى المنتجة "فويرتي" و "بويبلا" و "ديوك" و "جي 6" [3].يهيمن المزارعون أصحاب الحيازات الصغيرة (85٪) على إنتاج الأفوكادو في كينيا داخل العديد من المناطق الزراعية الإيكولوجية ، والذين ينتجون بشكل أساسي لسوق التصدير ، ويباع الباقي في الأسواق المحلية. يتم إنتاج سبعين بالمائة (70٪) من ثمار الأفوكادو في المناطق الوسطى والشرقية من البلاد. يتم تصدير الثمار بشكل رئيسي إلى الاتحاد الأوروبي [2،4]. منذ عام 2000 ، زادت المساحة المزروعة بالأفوكادو بشكل كبير ، مما أدى إلى زيادة تصدير ثمار الأفوكادو من كينيا [4]. يعود سبب زيادة الإنتاج إلى ارتفاع الطلب على ثمار الأفوكادو في السوق العالمية بسبب وعي المستهلك بالقيمة الغذائية للفاكهة [5]. على الرغم من زيادة إنتاج وتصدير ثمار الأفوكادو من كينيا ، إلا أن ارتفاع حالات الإصابة بأمراض فطرية ما بعد الحصاد ، بما في ذلك الأنثراكنوز و SER ، يحد من تسويق الفاكهة ويسهم في زيادة خسائر المنتجين [6 ، 7].

تتطور أعراض تعفن نهاية الساق (SER) على ثمار الأفوكادو أثناء نضجها. يتميز بالذبل ، متبوعًا بالتعفن البني إلى الأسود الذي يبدأ عند نهاية جذع الثمرة. مع تقدم التعفن ، قد تحتوي حزم الأوعية الدموية الداخلية على ألوان سوداء إلى بنية اللون ، وفي النهاية يتم استهلاك الفاكهة بأكملها بواسطة العفن [8 ، 9]. الفاكهة بالكاد تظهر أعراض SER قبل الحصاد. علاوة على ذلك ، غالبًا ما يحدث SER في دار التعبئة أثناء النقل أو بعد التسويق.

تم الإبلاغ عن أنواع فطرية مختلفة تسبب SER على ثمار الأفوكادو. في تشيلي ، تم الإبلاغ عن مسببات الأمراض الفطرية لتسبب SER في أعضاء من عائلة Botryosphaeriaceae ، وهي: ديبلودديا موتيلا ، د. في إيطاليا ، كان N. parvum ، Colletotrichum gloeosporioides ، أو C. fructicola و Diaporthe foeniculacea أو D. Sterilis أكثر مسببات الأمراض SER عزلًا [9]. في كاليفورنيا ، تم الإبلاغ عن Neofusicoccum luteum و Phomopsis perseae [8] بينما في جنوب إفريقيا ، تم الإبلاغ عن Thyronectria pseudotrichia و Dothiorella aromatica و Pestalotiopsis versicolor و Lasiodiplodia theobromae و Rhizopus stolonifer و Fusarium sambucinum و [11] solani.

في كينيا ، ومع ذلك ، لم يتم تحديد العامل الممرض الفعلي الذي يسبب SER ، ولكن من ناحية أخرى ، تم وصف مسببات الأمراض الأنثراكنوز [12]. لذلك ، هدفت هذه الدراسة إلى التعرف على مسببات الأمراض الفطرية المرتبطة بـ SER لثمار الأفوكادو في المرتفعات الوسطى في كينيا واختبار قدرتها المرضية.

2.1. منطقة الدراسة وجمع العينات. أجريت الدراسة في مقاطعة مورانجا ، وهي المقاطعة الرائدة في إنتاج وتصدير ثمار الأفوكادو في كينيا [1]. جغرافياً ، تقع المقاطعة بين خطي عرض 0 [درجة] 34 درجة جنوباً و 1 [درجة] 07 جنوباً وخطي طول 36 درجة شرقاً و 37 درجة و 27 درجة شرقاً ، بارتفاع 914 م فوق سطح البحر في الشرق و 3353 درجة م فوق سطح البحر في الغرب. تُزرع ثمار الأفوكادو في المناطق الزراعية الإيكولوجية الثانية والثالثة والرابعة التي تتراوح درجات الحرارة فيها من 18.0 درجة مئوية إلى 27.2 درجة مئوية ومتوسط ​​درجات الحرارة من 1600 مم إلى 900 مم سنويًا [13].

بين سبتمبر 2017 ومارس 2018 ، تم استخدام أخذ العينات بشكل منهجي لاختيار 162 بستانًا متضمنة في الدراسة. كان في البساتين أكثر من خمس أشجار فاكهة "هاس". تم حصاد ست ثمار أفوكادو ناضجة عشوائيًا من كل خمس أشجار فاكهة أفوكادو تم اختيارها عشوائيًا في كل بستان تم أخذ عينات منه. بالإضافة إلى ذلك ، تم شراء 10 فواكه "هاس" ، في مراحل مختلفة من النضج ، من تجار مختلفين في ثلاثة أسواق رئيسية (كاندارا وكيروارا ومراجوا) داخل المقاطعة على فترات أسبوعية لمدة شهرين. تم جمع ما مجموعه 453 فاكهة من 4860 فاكهة تم حصادها من البساتين و 240 ثمرة من السوق تم جمعها وتعبئتها في علب كرتون ونقلها إلى منظمة البحوث الزراعية والحيوانية الكينية (KALRO) ، كاندارا ، حيث تم تحضينها في درجة حرارة الغرفة (22 [ درجات] C-25 [درجة] C) لمدة 7-14 يومًا للسماح بتطوير SER.

2.2. عزل الفطريات. تم غسل 207 فاكهة من البساتين و 125 فاكهة من السوق التي ظهرت عليها أعراض SER بماء الصنبور النظيف ، وتعقيمها السطحي بـ 2٪ هيبوكلوريت الصوديوم لمدة دقيقة واحدة ، وشطفها بالماء المقطر ، وتجفيفها بالهواء. تم وضع قطع صغيرة من اللحم من هوامش اللحم المصحوب بالأعراض بطريقة معقمة في أطباق بتري قطرها 9 سم تحتوي على أجار دكستروز البطاطس (PDA) مُعدل بكبريتات الستربتومايسين وحضنت في درجة حرارة الغرفة (22 درجة مئوية [درجة] درجة مئوية) لمدة خمسة أيام. تم الحصول على الثقافات النقية عن طريق نقل أطراف الفطريات على 1.5٪ (وزن / حجم) أجار ماء (WA) وسمح لها بالنمو بين عشية وضحاها. تم نقل أطراف Hyphal لنمو mycelia في WA لاحقًا إلى PDA بعد تعديلها بكبريتات الستربتومايسين. تم استخدام زجاجة عالمية مائلة للحفاظ على الثقافات النقية لمسببات الأمراض وتم تخزينها في الثلاجة عند 4 [درجات] مئوية لاستخدامها لاحقًا.

2.2.1. إعداد تعليق كونيديال. تم غمر الثقافات النقية التي يبلغ عمرها أربعة عشر يومًا في PDA بالماء المقطر المعقم. تم استخدام حلقة سلكية معقمة لكشط الكونيديا وإحضارها إلى التعليق. يرشح المعلق من خلال قطعة قماش موسلين ذات طبقتين ويخفف الراشح المجمع بالتسلسل إلى 1 * [10. sup.5]. تم استخدام مقياس الدم لضبط تركيز البوغ.

2.3 التوصيف المورفولوجي للعزلة. للحث على إنتاج الكونيديا ، تم نقل قطع صغيرة من الفطريات من العزلات إلى أطباق بتري بقطر 9 سم مع PDA المعدلة برقائق خشب الأفوكادو المعقمة وحضنت عند 25 [+ أو -] 1 درجة مئوية لمدة أربعة أسابيع. تم تحديد العزلات شكليًا بناءً على الخصائص الثقافية والمجهرية كما وصفها فالنسيا وآخرون. [10] ، فيليبس وآخرون. [14] ، وواتانابي [15]. تم استخدام اللاكتوفينول الأزرق في التحديد المجهري. تم قياس طول وعرض الكونيديا (N = 50) من كل عزلة باستخدام مجهر ضوئي ZeissPrimo Star ، مقترن بكاميرا AxioCam ERc 5s.

2.4 الخصائص الجزيئية

2.4.1. استخراج الحمض النووي. بروتوكول استخراج فطري محسّن وصفه Innis et al. [16] تم استخدامه لاستخراج الحمض النووي من ثلاث عزلات تمثيلية لكل نوع. تم استخدام الثقافات الفطرية النقية المشتقة من الجراثيم المفردة المحتضنة في PDA. تم وضع أربعين مليغرام (ملغ) من الفطريات في أنبوب الطرد المركزي الدقيق الذي يحتوي على 300 [ميكرو] لتر من محلول الاستخلاص (Tris-HCl ، 200 ملي مولار فتاه 8.5 EDTA ، 25 ملي مولار كلوريد الصوديوم 250 ملي مولار ، 0.5٪) مع حبيبات زجاجية. تم وضع الأنابيب في مطحنة genogrinder fastprep [R] -24 لمدة دقيقة واحدة عند 2000 دورة في الدقيقة. تمت إضافة مائتي ميكرولتر ([ميكرو] لتر) من 3 ملي أسيتات الصوديوم pH5.2 وتبريدها عند -20 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بعد الحضانة ، تم طرد العينات لمدة 10 دقائق عند 13000 دورة في الدقيقة. بعد ذلك ، تم نقل المواد الطافية إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة 1.5 مل. تمت إضافة كميات متساوية من الأيزوبروبانول إلى المواد الطافية وسمح لها بالوقوف لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد خمس دقائق ، تم طرد العينات لمدة 10 دقائق عند 13000 دورة في الدقيقة وتم التخلص من المادة الطافية. ثم تمت إضافة خمسمائة [ميكرو] لتر من الإيثانول بنسبة 70٪ إلى الحبيبات وطردها عند 13000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق لغسل الحبيبات. تم تجفيف كريات الحمض النووي التي تم الحصول عليها بالهواء ثم إعادة تعليقها في 50 [ميكرو] لتر من محلول TE منخفض الملح (Tris-HCl ، 1 ملي مولار ، الأس الهيدروجيني 8 EDTA ، 0.1 ملي مولار) وتم تخزينها عند -20 درجة مئوية لاستخدامها لاحقًا . تم تحديد جودة الحمض النووي عن طريق الرحلان الكهربائي لجيل الاغاروز وقياسها باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoDrop ND-1000. تم توحيد الحمض النووي أو تطبيعه إلى 20 نانوغرام / [ميكرو] لتر لتفاعلات البلمرة المتسلسلة (PCR).

2.4.2. تضخيم وتسلسل الحمض النووي. تم استخدام الحمض النووي المستخرج كقوالب في PCR. تم استخدام مجموعتين من البادئات ، ITS1 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG) و ITS4 (TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC) ، ITS5 (GGA AGT AAA AGT CGT AACAAG G) و ITS1 ، في تضخيم منطقة النسخ الداخلية rDNA للعزلات الفطرية [ 16]. أحجام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل 25 [ميكرو] لتر تحتوي على 2.5 [ميكرو] لتر من 0.2 [ميكرو] من كل جهاز تمهيدي ، 5 * محلول رد فعل My Taq ، 0.25 [ميكرو] l Taq polymerase (Bioline ، Meridian Life Science ، Memphis ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، 40 نانوغرام / لتر من كل قالب DNA ، و 12.75 [ميكرو] لتر من الماء الجزيئي. للتضخيم ، تم استخدام GeneAmp 9700 DNA Cycler (Perkin-Elmer). تضمنت العملية خطوة تغيير طبيعة أولية عند 94 [درجة] مئوية لمدة 30 ثانية ، تليها 35 دورة ، وتغيير الطبيعة عند 94 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، والتلدين عند 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية متبوعة بالتمديد لمدة دقيقة واحدة عند 68 درجة مئوية ، وخطوة تمديد نهائية قدرها 5 دقائق عند 68 درجة مئوية. لتأكيد التضخيم ، تم تشغيل منتجات PCR على هلام agarose بنسبة 1.5 ٪ وتم تصويرها تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية باستخدام ENDURO [TM] GDS. تم تنظيف منتجات PCR باستخدام مجموعة تنظيف Qiagen PCR وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة وتم تقديمها لتسلسل Sanger باستخدام بادئات أمامية وعكسية في منصة Inqaba Africa Genomic ، جنوب إفريقيا.

2.4.3. تحليل المعلوماتية الحيوية. تم تحليل بيانات التسلسل من خلال تخصيص قراءات للعينات والفهارس والبادئات والمحولات. تم تمييز البادئات باستخدام Picard (https: //broadinstitute.github. io / picard / index.html). تم استخدام Bam2fastq (https://gsl.hudsonalpha.org/ information / software / bam2fastq) لتحويل ملفات bam الناتجة إلى fastq. تم تقييم جودة التسلسل الإجمالية للقراءات بصريًا باستخدام برنامج Fast QC (http: // www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/). تضمنت معلمات الجودة المستخدمة في تصفية القراءات حدًا أدنى للطول يبلغ 250 نقطة أساس وقيمة QC لا تقل عن 30. تم إجراء التشذيب المطابق للمحولات والتسلسلات منخفضة الجودة من جميع القراءات. تم إجراء التحليل والمعالجة اللاحقة للقراءات في CLC Genomic Workbench 11.0 ، حيث تم دمج القراءات المتداخلة. تم إجراء تجميع de novo للقراءات غير المجمعة ومحاذاة القراءات الأولية باستخدام CLC Genomics Workbench 11.0 مع المعلمات الافتراضية (الحد الأدنى contig = 100 bp ، 23 K-mer ، جزء التشابه = 80٪ ، وكسر الطول = 50٪). تم إجراء تحليل BLAST لتسلسل ITS لدعم التحديد المورفولوجي للعينات في قاعدة بيانات NCBI. تم إيداع تسلسلات ITS في GeneBank باستخدام BankIT.

2.5 اختبار الإمراضية. لتأسيس افتراضات كوخ ، تم إخضاع Geotrichum candidum ، و Fusarium equiseti ، و Fusarium oxysporum ، و Fusarium solani ، و Lasiodiplodia theobromae ، و Neofusicoccum parvum ، و Nectria pseudotrichia لاختبار الإمراضية كما وصفه فريمان وآخرون. [17] وتويزييمانا وآخرون. [8]. تم حصاد ثمار "هاس" الصحية من المزارع المعروف عنها انخفاض معدل حدوث SER في مقاطعة مورانجا. تم غسل الثمار بمياه الصنبور النظيفة لإزالة أي مخلفات من التربة. تم تعقيم الثمار سطحيًا عن طريق غمسها في 75٪ إيثانول لمدة ثلاث دقائق تقريبًا ، وشطفها بالماء المقطر ، ثم تجفيفها بالهواء. تم إخضاع كل عزلة لطريقتين للتلقيح.

تم استخدام حفار فلين معقم (قطره 5 مم) لجرح نهاية ساق كل فاكهة وتم وضع أقراص فطرية بقطر مكافئ تم الحصول عليها من حافة الثقافات النقية التي تنمو بنشاط على الجرح. تم ترتيب ستة ثمار مُلقَّحة لكل مُمْرِض وست فواكه تحكم مُلقَّحة بـ PDA عادي على صواني فردية ومُغطاة بغشاء ملتصق للحفاظ على الرطوبة وتجنب التلوث. تم تحضين الثمار عند درجة حرارة الغرفة 24 درجة مئوية [+ أو -] 1.

بعد قطع قشرة الفواكه المجففة بالهواء ، تم وضع معلق كونيدال (5 * [10. sup.-5] كونيدال / مل) على فتحة نهاية الجذع ومغطى بطبقة تغليف. تم ترتيب ستة فواكه مُلقَّحة لكل مُمْرِض وست ثمار ضابطة مُلقَّحة بالماء المقطر في صواني فردية ومُغطاة بغشاء ملتصق. تم تحضين الثمار الملقحة عند 24 [+ أو -] 1 درجة مئوية. تم التقييم بعد 12 يومًا عن طريق تقطيع الثمار طوليًا وتصنيف أعراض SER على مقياس تصنيف 0-4 كما يلي: 0 = لا يوجد تعفن مرئي 1 = 1-25٪ تعفن 2 = 25-50٪ تعفن 3 = 50-75٪ تعفن 4 = [أكبر من أو يساوي] 75٪ تعفن (الشكل 1). في نهاية اختبار الإمراضية ، تم إجراء إعادة عزل من الثمار التي تظهر عليها الأعراض ، ومقارنة المستعمرات الفطرية المعزولة شكليًا بالعزلات الأصلية [8 ، 9]. تم حساب شدة SER على ثمار الأفوكادو باستخدام الصيغة التالية [18]:

مؤشر المرض في المئة (PDI) = مجموع التصنيفات العددية / لا. عدد الثمار التي تم فحصها * الدرجة القصوى * 100. [1)

2.6. تحليل البيانات. تم تحليل البيانات المتسلسلة Sanger ومعالجتها باستخدام CLC Genomic Workbench الإصدار 11.0. تحليل التباين (ANOVA) متبوعًا بـ Tukey's post-hoc والذي تم استخدامه لمقارنة متوسط ​​معدل نمو النسبة المئوية للفطريات الملقحة ، بينما تم استخدام اختبار الطالب t لمقارنة آفات SER على الفاكهة تحت طرق التلقيح المختلفة. تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام Min tab v8 (Minitab ، LLC).

3.1. عزل وتحديد الأنواع الفطرية. بعد احتضان الثمار لمدة 7-14 يومًا ، ظهر العفن البني الداكن إلى الأسود على ثمار الأفوكادو ، وقد لوحظت الفطريات الفطرية أحيانًا على سطح الفاكهة. داخليا ، لوحظ تلون حزم الأوعية الدموية (الشكل 2). عندما تنضج الثمرة ، يتطور العفن على الثمرة بأكملها. تم جمع 207 عزلة من ثمار البساتين و 125 عزلة من الفاكهة من الأسواق.

بناءً على سمات المستعمرة والكونيدال ، تم تجميع العزلات في سبع مجموعات (الجدول 1).

المجموعة 1 كانت مستعمرة Lasiodiplodia theobromae على PDA مستديرة وسلسة. في البداية ، تم تطوير الفطريات الخيطية الهوائية البيضاء مع مركز رمادي. مع تقدم العمر ، تحولت المستعمرة إلى اللون الرمادي ثم تحولت من الرمادي الداكن إلى الأسود (الشكلان 3 (أ) و 3 (ب)). كانت pycnidia رمادية اللون وكانت إما بسيطة أو مجمعة. كانت الكونيديا شبه ناقصة إلى إهليلجية. في البداية ، كانت معقمة وسميكة الجدران ، ومع ذلك ، مع مرور الوقت ، شكلوا حاجزًا متوسطًا واحدًا وأصبح بنيًا داكنًا يتراوح من 17.35 إلى 29.31 * 11.23 إلى 14.91 [ميكرو] م (متوسط ​​22.68 * 5.70 [ميكرو] م) . كانت الخصائص المورفولوجية متوافقة مع ما وصفه فالنسيا وآخرون. [10] ، فيليبس وآخرون. [14] ، وواتانابي [15].

المجموعة 2 كانت مستعمرة Neofusicoccum parvum على PDA خشنة مع هوامش غير منتظمة. في البداية ، تطورت الفطريات الهوائية الخيطية البيضاء الكثيفة وتحولت من الظلام إلى الأسود مع مرور الوقت (الشكلان 3 (ج) و 3 (د)). كانت Pycnidia سوداء ، كروية ، وبسيطة أو مجمعة. كانت الكونيديا مدورة بشكل صريح إلى شبه مفردة ، معقمة ، وهيالين ذات محتوى حبيبي ، ومع مرور الوقت تحولت من البني الفاتح إلى الأسود بحجم 19.77 إلى 15.25 * 4.10 إلى 7.5 [ميكرو] م (يعني 17.01 * 5.70 [ميكرو] م. ). كانت الخصائص المورفولوجية متوافقة مع ما وصفه فالنسيا وآخرون. [10] وفيليبس وآخرون. [14].

المجموعة 3 كانت مستعمرات Nectria pseudotrichia على PDA بيضاء ، قطنية ، مع نمو فطري خيطي جوي. كان نمو المستعمرة منتظمًا وخشنًا ، مع هوامش ناعمة (الشكلان 3 (هـ) و 3 (و)). كانت الكونيديا بيضاوية إلى سفلية ذات محتوى حبيبي مخضر يتراوح من 6.27 إلى 12.50 * 2.20 إلى 9.40 م [ميكرو] (متوسط ​​8.49 * 4.95 [ميكرو] م). كانت الخصائص المورفولوجية متوافقة مع ما وصفه Hirooka et al. [19].

كانت مستعمرات المجموعة 4 Fusarium solani على PDA بيضاء ، قطنية ، مع فطريات floccose. كانت هوامش المستعمرة منتظمة وسلسة. كان معدل النمو منخفضًا. كان الجانب السفلي شاحبًا إلى بني اللون (الشكلان 3 (ز) و 3 (ح)). كانت الميكروكونيدية هيلين وبيضاوي وبعضها كان أسطوانيًا مع حواف ناعمة تتراوح من 5.02 إلى 8.52 * 2.91 إلى 5.50 [ميكرو] م (متوسط ​​6.88 * 3.79 [ميكرو] م) ، في حين أن macroconidia كانت زجاجية ، منحنية قليلاً ، وواسعة مع اثنين إلى ثلاثة حواجز تصل في حدود 13.05 إلى 34.18 * 2.10 إلى 5.50 م [ميكرو] (متوسط ​​18.85 * 3.36 [ميكرو] م). كانت الخصائص المورفولوجية متوافقة مع ما وصفه حافظي وآخرون. [20] وواتانابي [15].

المجموعة 5 من مستعمرات Fusarium oxysporum على PDA كانت تحتوي على وفرة من الفطريات الهوائية البيضاء إلى الكريمية. كانت هوامش المستعمرة ناعمة وأحيانًا ملتوية قليلاً. كان الجانب العكسي للمستعمرة أحمر باهتًا إلى اللون البنفسجي الخوخى (الشكلان 3 (1) و 3 (ي)). تم إنتاج العديد من الميكروكونيديا بيضاوية الشكل بدون حواجز من 11.2 إلى 19.9 * 4.5 إلى 8.4 [ميكرو] م (متوسط ​​15.4 * 6.1 [ميكرو] م). كانت macroconidia رقيقة الجدران ، ومنقورة إلى مستقيمة تقريبًا ، وكان كلا الطرفين مدببًا تقريبًا بحاجز 2-3 يتراوح من 22.1 إلى 43.9 * 5.1 إلى 12.5 [ميكرو] م (متوسط ​​28.4 * 7.5 [ميكرو] م). كانت الخصائص مشابهة لما لاحظه حافظي وآخرون. [20] ، حسين وآخرون. [21] وواتانابي [15].

المجموعة 6 Fusarium equiseti مستعمرات على PDA كانت بيضاء ، مع وفرة من الفطريات القطنية التي تحولت إلى اللون البني مع تقدم العمر. لوحظ تصبغ قابل للانتشار شاحب إلى بني غامق (الشكلان 3 (ك) و 3 (ل)). لم تكن microconidia موجودة ، ومع ذلك ، فقد لوحظ منحني طويل ونحيف قليلاً في النهايات مع ثلاثة إلى ستة حواجز كبيرة الحجم من 25.3 إلى 46.7 * 3.5 إلى 4.6 [ميكرو] م (متوسط ​​37.2 * 3.24 [ميكرو] م) كما لوحظ بالمثل من قبل Motlagh [22] وواتانابي [15].

لم تكن مستعمرات المجموعة 7 Geotricum candidum على PDA كثيفة والأبيض إلى البيج مظلل على وسط الثقافة بهوامش ناعمة (الشكلان 3 (م) و 3 (ن)). شكلت mycelia مفصليات هوامش ملساء ، والتي كانت هيالين ، وحيدة الخلية ، و subglobose أو أسطوانية مع إما مدورة أو مقطوعة القمم تصل إلى 6.1 إلى 19.7 * 2.3 إلى 10.3 [ميكرو] م (متوسط ​​11.38 * 5.56 [ميكرو] م). كانت السمات المورفولوجية للفطر متوافقة مع تلك التي وصفها Zhang et al. [23] ، علم وآخرون. [24] ، وواتانابي [15].

علاوة على ذلك ، لدعم التحديد المورفولوجي للعينات ، تم استخدام الواسمات الجزيئية ITS5 و ITS4 و ITS1 و ITS5 لتحديد الجزيئات وأسفرت باستمرار عن مستويات عالية من التمييز بين الأنواع. أسفر تضخيم PCR لأنظمة النقل الذكية عن منتجات تتراوح من 526 إلى 550 نقطة أساس. من خلال تحليل الانفجار ، تمكنت العزلات الفطرية من تحديد سبعة أنواع. ارتبطت العزلات المذكورة في هذه الدراسة بالفواكه الاستوائية. وشملت هذه F. equiseti (MK922072 ، MK922069) ، F. oxysporum (MK922065) ، F. solani (MK922070 ، MK922071 ، MK922066) ، G. candidum (MK215811 ، MK922075) ، L. theobromae (MK922068 ، MK922073) ، N. parvum (MK922067) ، و N. pseudotrichia (MK922074). كان أقرب تطابق بين العزلات من هذه الدراسة وتلك التي تم تعدينها من GeneBank تتراوح من 99 إلى 100 ٪ تشابه وهي موضحة في (الجدول 2).

3.2 اختبارات الإمراضية. تطورت ثمار الأفوكادو الملقحة بالميسليا وتلك التي تم تلقيحها بمعلقات الأبواغ أعراضًا مماثلة كما لوحظ في الفاكهة التي تم الحصول عليها من البساتين والأسواق (الشكل 1). جميع الثمار الملقحة ظهرت عليها أعراض SER بغض النظر عن العزلة أو طريقة التلقيح المستخدمة.ومع ذلك ، اختلفت شدة المرض عبر الأنواع الفطرية المختلفة وكذلك طريقة التلقيح (الجدول 3). عند التطعيم بالفطريات ، تراوحت شدة SER بين 6.67 ٪ و 90.83 ٪ وعندما تم استخدام تعليق البوغ ، تراوحت الشدة بين 97.50 ٪ و 16.67 ٪ (الجدول 3). تسبب Lasiodiplodia theobromae و N. parvum و N. pseudotrichia في أشد أعراض SER في كل من التطعيمات ، ويمكن اعتبارها الأكثر ضراوة. لم يلاحظ أي أعراض على ثمار المقارنة. تم الكشف عن فروق إحصائية (p & lt 0.05) في تطور الأعراض عندما تم تلقيح ثمار الأفوكادو "هاس" بشكل تفاضلي إما مع الفطريات أو المعلقات الكونية من N. parvum و N. pseudotrichia و F. solani و F. equiseti و F. oxysporum و G صريح. ومع ذلك ، لم يكن هناك دلالة إحصائية في تطور الأعراض عند تلقيح L. theobromae (الجدول 3).

أبلغنا أن الأفوكادو SER كان سببه Lasiodiplodia theobromae و Neofusicoccum parvum و Nectria pseudotrichia و Fusarium solani و Fusarium oxysporum و Fusarium equiseti و Geotricum candidum في المرتفعات الوسطى في كينيا. هذا هو التقرير الأول عن تحديد مسببات الأمراض الفطرية SER لثمار الأفوكادو في كينيا. ارتبطت العوامل الممرضة التي تم تحديدها بـ SER لثمار الأفوكادو في مناطق زراعة الأفوكادو الأخرى في العالم مثل أمريكا الشمالية (كاليفورنيا) وتشيلي وجنوب إفريقيا وإيطاليا [8-11]. من الدراسة الحالية ، كانت L. theobromae أكثر الممرضات عزلة ، تليها N. parvum و N. pseudotrichia. تؤيد الدراسة تقارير Galsurker et al. [25] التي حددت L. theobromae كعامل ممرض ناشئ للفاكهة SER في جميع أنحاء العالم. ارتبط العامل الممرض بـ SER في المانجو والبابو [26 ، 27] وأيضًا تم تحديده على أنه أحد العوامل الرئيسية المسببة لمرض ما بعد الحصاد للعديد من الفواكه [28].

علاوة على ذلك ، تؤكد النتائج النتائج من مناطق زراعة الأفوكادو الأخرى في العالم حيث تم الإبلاغ عن أن أفراد عائلة Botryosphaeriaceae هم السبب الرئيسي لـ SER لثمار الأفوكادو. تم الإبلاغ عن أنواع Botryosphaeriaceae لتسبب SER للأفوكادو في جنوب إفريقيا وإيطاليا وكاليفورنيا ونيوزيلندا. في جنوب إفريقيا ، كانت النيسرية الكاذبة هي العامل الممرض الأكثر عزلة ، وفي بعض الأحيان ، تم عزل L. theobromae. في إيطاليا وكاليفورنيا ونيوزيلندا ، كان N. parvum أكثر مسببات الأمراض عزلة [8-11 ، 29]. تؤثر درجات الحرارة على العامل الممرض SER السائد في المنطقة. تزدهر أنواع Botryosphaeriaceae في درجات الحرارة المرتفعة ، بينما يحفز الإجهاد المائي العدوى الكامنة من قبل الأنواع [25 ، 30]. يتركز إنتاج ثمار الأفوكادو في مقاطعة مورانجا في المنطقة السفلى من المحافظة ، وتتميز بالطقس الدافئ وتتراوح درجات الحرارة بين 18.0 درجة مئوية و 27.2 درجة مئوية [13]. قد يفسر ذلك سبب كون L. theobromae و N. parvum أكثر مسببات الأمراض الفطرية عزلة.

في كاليفورنيا ، ارتبط N. parvum وأنواع أخرى من Botryosphaeriaceae (N. australe و N. luteum و Fusicoccum aesculi و Dothiorella iberica) بـ SER [8]. ومع ذلك ، في دراستنا ، تم عزل N. parvum فقط ، على غرار التقارير عن مسببات الأمراض SER لثمار الأفوكادو في إيطاليا [9]. تم العثور على ثلاثة أنواع من Fusarium ، وهي F. solani و F. oxysporum و F. equiseti ، لتكون من مسببات الأمراض الثانوية لـ SER في كينيا. تم الإبلاغ عن نتائج مماثلة من جنوب إفريقيا ونيوزيلندا [11،31] وإثيوبيا [30]. تم عزل Geotricum candidum بشكل حصري من أربع ثمار أفوكادو من السوق ولم يتم عزله أبدًا من ثمار البستان. وقد ارتبط العامل الممرض بالتعفن الحامض للطماطم والحمضيات والخضروات [32]. في الأسواق المفتوحة في كينيا ، حيث تم شراء ثمار الأفوكادو ، توضع ثمار الأفوكادو والحمضيات وأنواع أخرى معًا ، مما يسمح بانتقال العدوى بين تلك الأنواع من الفاكهة.

Colletotrichum gloeosporioides ، التي تم الإبلاغ عنها سابقًا على أنها تسبب SER للأفوكادو في إيطاليا وكاليفورنيا [8 ، 11] ، لم يتم عزلها في دراستنا المؤيدة للتقارير الواردة من شيلي [10]. علاوة على ذلك ، Twizeyimana et al. [8] حددت C. gloeosporioides كممرض ضعيف للأفوكادو SER وهي مهمة فقط عندما تتحد مع مسببات الأمراض الأخرى في SER.

تم استخدام الخصائص المورفولوجية مع تحليل الحمض النووي لتحديد وتمييز L. theobromae و N. parvum و N. pseudotrichia. نمت Lasiodiplodia theobromae بسرعة واستعمرت طبق بتري في يومين. استعمر Neofusicoccum parvum و N. pseudotrichia طبق بتري في أربعة وخمسة أيام على التوالي. أظهرت مسببات الأمراض الثلاثة سمات شكلية متشابهة تقريبًا. ومع ذلك ، من الواضح أن تسلسلات ITS لهذه الفطريات سمحت بالتمييز بين الأنواع.

كانت Lasiodiplodia theobromae أكثر مسببات الأمراض عزلة من الفاكهة من البساتين والأسواق ، تليها N. parvum و N. pseudotrichia. أثناء دراسات الإمراضية ، تسببت مسببات الأمراض الثلاثة أيضًا في حدوث أشد مخاطر التعرض للخطورة على ثمار الأفوكادو. لذلك ، تم تحديد مسببات الأمراض الثلاثة على أنها العوامل المسببة الرئيسية للأفوكادو SER في كينيا.

يجب إجراء مزيد من الدراسات في مناطق زراعة الأفوكادو الأخرى في البلاد للحصول على صورة واضحة عن مسببات SER في كينيا. إلى جانب ذلك ، يجب إنشاء ممارسات إدارة SER قبل الحصاد وبعد الحصاد لثمار الأفوكادو في الدولة.

تم تضمين البيانات المستخدمة لدعم نتائج هذه الدراسة في المقالة.

يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بنشر هذه الورقة.

يعرب المؤلفون عن امتنانهم لإدارة المنظمة الكينية للبحوث الزراعية والحيوانية (KALRO) ، ومركز Kandara لأبحاث التكنولوجيا الحيوية ، Kabete ، لتوفير التسهيلات اللازمة لإجراء الدراسات المورفولوجية والجزيئية. يعترف المؤلفون أيضًا بإنقابة Biotech. ، جنوب إفريقيا ، لتسلسل الحمض النووي.

[1] مديرية المحاصيل البستانية (HCD) ، تقرير إنتاج المحاصيل البستانية ، إدارة المحاصيل البستانية (HCD) ، نيروبي ، كينيا ، 2016.

[2] R. Nyambati and S. Kioko ، "إنتاج واستخدام أشجار الفاكهة والأعلاف والطاقة الحيوية. حماية أبراج المياه في كينيا والتخفيف من آثار تغير المناخ والتكيف معه (برنامج المياه) ،" 2018.

[3] مديرية المحاصيل البستانية (HCD) ، تقرير إنتاج المحاصيل البستانية ، مديرية المحاصيل البستانية (HCD) ، نيروبي ، كينيا ، 2017.

[4] E.G Johnny، J.K Mariara، R. Mulwa، and G. M. 7 ، لا. 2 ، ص 91-112 ، 2019.

[5] L. S. Magwaza and S. Z. Tesfay ، "مراجعة للطرق المدمرة وغير المدمرة لتحديد نضج ثمار الأفوكادو ،" Food and Bioprocess Technology ، المجلد. 8 ، لا. 10 ، ص 1995-2011 ، 2015.

[6] L.A Wasilwa، J.K Njuguna، E.N Okoko، G.W Watani، and Others، "Status of avocado production in Kenya،" 2006، http: // www.kalro.org:8080/repository/handle/1/380.

[7] J. Oduol و F. Place و D. Mithofer و J. Olwande و L. Kirimi و M. Mathenge ، "تحسين المشاركة في أسواق السلع الزراعية لصغار مزارعي الأفوكادو في كينيا: تقييم فرص النمو للنساء في كاندارا و مناطق ماراني ، معهد Tegemeo ، جامعة إجيرتون ، نيروبي ، كينيا ، 2013.

[8] M. Twizeyimana ، H. Forster ، V. McDonald ، D.H Wang ، J. E. Adaskaveg ، and A. Eskalen ، "التعرف على مسببات الأمراض الفطرية المرتبطة بتعفن نهاية جذع الأفوكادو في كاليفورنيا ،" Plant Disease ، المجلد. 97 ، لا. 12 ، ص 1580-1584 ، 2013.

[9] V. Guarnaccia، A. Vitale، G. Cirvilleri et al.، "توصيف وإمراضية الأنواع الفطرية المرتبطة بتقرحات الفروع وتعفن نهاية جذع الأفوكادو في إيطاليا" European Journal of Plant Pathology، vol. 146 ، لا. 4 ، ص 963-976 ، 2016.

[10] A. L. Valencia، P. M. Gil، B. A. Latorre، and I. M. Rosales، "توصيف وإمراضية أنواع botryosphaeriaceae التي تم الحصول عليها من أشجار الأفوكادو مع قرحة الفروع والموت الرجعي ومن ثمار الأفوكادو مع تعفن نهاية الساق في تشيلي ،" مرض النبات ، المجلد. 103 ، لا. 5 ، ص 996-1005 ، 2019.

[11] J.M Darvas، "الفطريات المرتبطة بأمراض ما قبل الحصاد وما بعد الحصاد لفاكهة الأفوكادو في Westfalia Estate ، جنوب إفريقيا ،" Phytophylactica ، المجلد. 19 ، لا. 1 ، ص.83-86 ، 1987.

[12] S. K. Kimaru ، E. Monda ، R. C. Cheruiyot ، J. Mbaka ، and A. Alakonya ، "التعريف المورفولوجي والجزيئي للعامل المسبب لمرض أنثراكنوز في الأفوكادو في كينيا ،" المجلة الدولية لعلم الأحياء الدقيقة ، المجلد. 2018 ، معرف المقال 4568520 ، 10 صفحات ، 2018.

[13] R.Jaetzold ، H. Schmidt ، B. Hornetz ، and C. Shisanya ، دليل إدارة المزارع في كينيا: المجلد الثاني: الظروف الطبيعية ومعلومات إدارة المزرعة ، الجزء ب: وسط كينيا الجزء الفرعي B1b مقاطعة الوادي المتصدع الشمالي ، وزارة الزراعة ، نيروبي ، كينيا ، 2007.

[14] أ. ج. ل.فيليبس ، ألفيس ، ج. عبد الله زاده وآخرون ، "البوتريوسفيريا: الأجناس والأنواع المعروفة من الثقافة ،" دراسات في علم الفطريات ، المجلد. 76 ، ص 51-167 ، 2013.

[15] T. Watanabe ، أطلس مصور لفطريات التربة والبذور: مورفولوجيات الفطريات المستزرعة ومفتاح الأنواع ، مطبعة CRC ، بوكا راتون ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، 2010.

[16] M.A Innis، D.H Gelfand، J. J. Sninsky، and T.J White، PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications، Academic Press، Cambridge، MA، USA، 2012.

[17] S. Freeman، T. Katan، and E. Shabi، "توصيف أنواع Colletotrichum المسؤولة عن أمراض أنثراكنوز من الفواكه المختلفة ،" مرض النبات ، المجلد. 82 ، لا. 6 ، ص 596-605 ، 1998.

[18] B. K. M. Lakshmi ، P. N. Reddy ، and R. D. Prasad ، "إمكانية انتقال العدوى من Colletotrichum gloeosporioides Penz. العزلات التي تسبب الأنثراكنوز في محاصيل الفاكهة شبه الاستوائية ،" Tropical Agricultural Research ، vol. 22 ، لا. 2 ، ص 183-193 ، 2011.

[19] Y. هيروكا ، أ. 68 ، ص 35-56 ، 2011.

[20] ر. حفيزي ، ب. صالح ، و ز. لطيفة ، "التوصيف المورفولوجي والجزيئي للفطر Fusarium solani و Fusarium oxysporum المرتبط بمرض تاج زيت النخيل ،" المجلة البرازيلية لعلم الأحياء الدقيقة ، المجلد. 44 ، لا. 3 ، ص 959-968 ، 2013.

[21] M.Z. Hussain، M.A Rahman، M.N. Islam، M.A Latif، and M.A Bashar، "Morphological and Molecular Identification of Fusarium oxysporum Sch. المعزول من ذبول الجوافة في بنغلاديش" Bangladesh Journal of Botany، vol. 41 ، لا. 1 ، ص 49-54 ، 2012.

[22] M. R. S. Motlagh ، "عزل وتوصيف بعض الفطريات المهمة من Echinochloa spp. العوامل المحتملة للسيطرة على حشائش الأرز ،" Australian Journal of Crop Science ، vol. 4 ، لا. 6 ، ص 457-460 ، 2010.

[23] L. Zhang ، Y.H Li ، X. M. Zhang ، Q. H. Zhang ، and H. Q. Xian ، "أول تقرير عن العفن الحامض الناجم عن Geotrichum candidum على morifructus في الصين ،" مرض النبات ، المجلد. 102 ، لا. 12 ، ص. 2640 ، 2018.

[24] إم دبليو علام ، إيه رحمان ، إيه يو مالك وآخرون ، "التقرير الأول عن Geotrichum candidum الذي تسبب في تعفن ما بعد الحصاد للخوخ في البنجاب ، باكستان ،" مرض النبات ، المجلد. 101 ، لا. 8 ، ص. 1543 ، 2017.

[25] O. Galsurker، S. Diskin، D. Maurer، O. Feygenberg، and N. Alkan، "Fruit stem-end rot،" Horticulturae، vol. 4 ، لا. 4 ، ص. 50 ، 2018.

[26] JO Honger، CE William، D.Ousu-Ansah، K. Siaw-Adane، and GT Odamtten ، "الإمراضية وحساسية الفطريات للعامل المسبب لمرض تعفن ما بعد الحصاد في المانجو في غانا ،" مجلة غانا الزراعية العلوم ، المجلد. 49 ، لا. 1 ، ص 37-52 ، 2015.

[27] A.V D. S. Pereira ، R.B Martins ، S.J Michereff ، M.B D. Silva ، and M.P.S Camara ، "حساسية Lasiodiplodia theobromae من بساتين البابايا البرازيلية إلى مبيدات الفطريات MBC و DMI ،" European Journal of Plant Pathology ، المجلد. 132 ، لا. 4 ، ص 489-498 ، 2012.

[28] هـ.محمد و أ. سعد ، "المكافحة الحيوية لمرض ما بعد الحصاد (Botryodiplodia theobromae) من الجوافة (بسيديوم غواجافا L.) عن طريق تطبيق سلالات الخميرة ،" Postharvest Biology and Technology ، المجلد. 53 ، لا. 3 ، الصفحات 123-130 ، 2009.

[29] دبليو إف تي هارتيل ، "أمراض ما بعد حصاد ثمار الأفوكادو في نيوزيلندا ،" مجلة نيوزيلندا للمحاصيل والبستنة ، المجلد. 19 ، لا. 3 ، ص 297-304 ، 1991.

[30] M. Kebede and A. Belay ، "الفطريات المرتبطة بعفن ثمار الأفوكادو بعد الحصاد في بلدة jimma ، جنوب غرب إثيوبيا ،" Journal of Plant Pathology and Microbiology ، vol. 10 ، لا. 3 ، ص. 2 ، 2019.

[31] R. C. Ploetz، Diseases of Tropical Fruit Crops، CABI، Wallingford، UK، 2003.

[32] C.R Thornton، D.C Slaughter، and R.M Davis، "Detection of sour-rot الممرض Geotrichum candidum في فاكهة الطماطم وعصيرها باستخدام ELISA أحادي النسيلة المعتمد على الأجسام المضادة ،" المجلة الدولية لعلم الأحياء الدقيقة الغذائي ، المجلد. 143 ، لا. 3 ، ص 166-172 ، 2010.

E. K. Wanjiku ، (1،2) J.W Waceke ، (1) B.W Wanjala [ID] ، (3) و J.N. Mbaka (4)

(1) قسم علوم وتكنولوجيا الزراعة ، جامعة كينياتا (KU) ، نيروبي ، كينيا

(2) قسم صحة الحيوان والإنتاج ، جامعة ماونت كينيا (MKU) ، نيروبي ، كينيا

(3) معهد بحوث التكنولوجيا الحيوية ، منظمة البحوث الزراعية والحيوانية الكينية (KALRO) ، نيروبي ، كينيا

(4) معهد بحوث البستنة ، منظمة البحوث الزراعية والحيوانية الكينية (KALRO) ، نيروبي ، كينيا

يجب توجيه المراسلات إلى B. W. Wanjala [email protected]

تم استلامه في 29 نوفمبر 2019 المعدل 5 يونيو 2020 تم قبوله في 11 يونيو 2020 تم نشره في 9 يوليو 2020

المحرر الأكاديمي: جوزيبي كومي

التسمية التوضيحية: الشكل 1: أعراض SER على ثمار الأفوكادو الملقحة "هاس". دليل لخطورة مقياس تعفن المرض (0-4). (أ) و (ب) تمثل 0 (ج) و (د) تمثل 1 (هـ) و (و) تمثل 2 (ز) و (ح) تمثل 3 (ط) و (ي) تمثل 4.

التسمية التوضيحية: الشكل 2: تظهر أعراض SER بعد الحضانة. (أ) تلون لب الفاكهة باللون البني (ب) تلون أسود لحزم الأوعية الدموية (ج) و (د) فطريات فطرية تتطور على السطح.

التسمية التوضيحية: الشكل 3: خصائص المستعمرة (الخلفية والأمامية) من العزلات المسببة للأمراض من SER على المساعد الشخصي الرقمي. (أ) و (ب) يمثلان عكس وأمام Lasiodiplodia theobromae (GA11) (c) و (d) Neofusicoccumparvum (GA7) (e) و (f) Nectriapseudotrichia (GA13) (g) and (h) Fusarium solani (1GEF8 ) (i) و (j) fusarium oxysporum (MS4a) (k) and (l) Fusarium equiseti (1GF17) (m) and (n) Geotricum candidum (GA6).


المجلد 8 - 2017 - الفهرس

18. Neophyllachora الجنرال نوفمبر. (Phyllachorales) ، ثلاثة أنواع جديدة من Phyllachora من Poaceae وقيامة Polystigmataceae (Xylariales)
Dayarathne MC و Maharachikumbura SSN و Jones EBG و Goonasekara ID و Bulgakov TS و Al-Sadi AM و Hyde KD و Lumyong S و McKenzie EHC
ميكوسفير 8 (10) ، 1598–1625

20. الفطر الواسع الصالح للأكل من Agaricus section Bivelares من غرب الصين
Zhang MZ و Li GJ و Dai RC و Xi YL و Wei SL و Zhao RL
ميكوسفير 8 (10) ، 1640–1652

24. الأنواع الفطرية المستجدة من Phaeosphaeriaceae مع ارتباط الشكل اللاجنسي / الجنسي.
Karunarathna A، Papizadeh M، Senanayake IC، Jeewon R، Phookamsak R، Goonasekara ID، Wanasinghe DN، Wijayawardene NN، Amoozegar MA، Shahzadeh Fazeli SA، Camporesi E، Hyde KD، Weerahewa HLD، Lumyong S، McKenzie
مايكوسفير 8 (10) ، 1818-1834

26. إنشاء عائلة Zygosporiaceae. نوفمبر (Xylariales ، Sordariomycetes) بناءً على بيانات تسلسل rDNA لاستيعاب Zygosporium.
Li JF ، Phookamsak R ، Jeewon R ، Tibpromma S ، Maharachikumbura SSN ، Bhat DJ ، Chukeatirote E ، Lumyong S ، Hyde KD ، McKenzie EHC
مايكوسفير 8 (10) ، 1855-1868

27. هل يمكن لبيانات تسلسل أنظمة النقل الذكية أن تحدد الخلايا الداخلية الفطرية من الثقافات؟ دراسة حالة من Rhizophora apiculata
Doilom M ، Manawasinghe IS ، Jeewon R ، Jayawardena RS ، Tibpromma S ، Hongsanan S ، Meepol W ، Lumyong S ، Jones EBG ، Hyde KD
مايكوسفير 8 (10) ، 1869-1892

56. Magnicamarosporium diospyricola sp. نوفمبر (Sulcatisporaceae) من تايلاند
Phukhamsakda C ، Bhat DJ ، Hongsanan S ، Tibpromma S ، Yang JB ، Promputtha I
ميكوسفير 8 (4) 512-520

60. رقم قياسي جديد ل Trichoglossum rasum من آسيا
برابوغاونكار أ ، براتيبها ي
ميكوسفير 8 (4) 583-591

62. التصنيف والتطور العرقي لل Sparticola muriformis sp. نوفمبر على العشب المتحلل
Karunarathna A، Phookamsak R، Wanasinghe DN، Wijayawardene NN، Weerahewa HLD، Khan S، Wang Y
مايكوسفير 8 (4) 603-614

66. ملاحظات Mycosphere 1-50: عشب (Poaceae) يسكن Dothideomycetes
Thambugala KM، Wanasinghe DN، Phillips AJL، Camporesi E، Bulgakov TS، Phukhamsakda C، Ariyawansa HA، Goonasekara ID، Phookamsak R، Dissanayake A، Tennakoon DS، Tibpromma S، Chen YY، Liu ZY، Hyde KD
مايكوسفير 8 (4) 697-796

68. ديابور الأنواع المرتبطة بموت شجرة الخوخ في هوبي ، الصين
Dissanayake AJ، Zhang W، Liu M، Hyde KD، Zhao W، Li XH، Yan JY
مايكوسفير 8 (5) 533-549

70. يكشف التحليل الوراثي الجزيئي عن سبعة أنواع جديدة من الديابورث من إيطاليا
Dissanayake AJ، Camporesi E، Hyde KD، Zhang Wei، Yan JY، Li XH
مايكوسفير 8 (5) 853-877

71. الوضع الحالي للأنواع في ديابورث
Dissanayake AJ، فيليبس AJL، Hyde KD، Yan JY، Li XH
ميكوسفير 8 (5) 1106-1156

90. التباين الجيني في Setchelliogaster tenuipes (Setch.) Pouzar على أساس تشفير الحمض النووي الشريطي ITS
Sulzbacher MA ، Bevilacqua CB ، Baldoni DB ، Jacques RJS ، Antoniolli ZI et al.
مايكوسفير 8 (7) 899-907

93. مقالات 19 حول الغلاف الجوي: التطورات الأخيرة والتحديات المستقبلية في تصنيف الفطريات الحلقية
Wijayawardene NN، Papizadeh M، Phillips AJL، Wanasinghe DN، Bhat DJ، Weerahewa HLD، Shenoy BD، Wang Y، Huang YQ
مايكوسفير 8 (7) 934-950

94. حالة الفطريات الفطرية في المزارع العضوية بجنوب فلوريدا
Toprak B، Soti P، Jovel E، Alverado L، Jayachandran K
ميكوسفير 8 (7) 951-958

102. بقعة القطران الفطريات من تايلاند
Tamakaew N، Maharachikumbura SSN، Hyde KD، Cheewangkoon R.
ميكوسفير 8 (8) 1054-1058

110- النيابة الأسطوانية الجديدة. من تربة تايلاند
لومبارد L ، تشيوانجكون آر ، كروز بي دبليو
مايكوسفير 8 (8) 1088-1104

120. نحو تصنيف طبيعي من Amplistromataceae
Daranagama DA و Tian Q و Liu XZ و Hyde KD
مايكوسفير 8 (9) 1392-1402

121. أنواع البياض الدقيقي على البابايا - قصة ارتباك وتنوع خفي
براون U ، Meeboon J ، Takamatsu S ، Blomquist C ، Fernández Pavía SP ، Rooney-Latham S ، ماسيدو DM
ميكوسفير 8 (9) ، 1403-1423

122- Mycosphere Essay 19. أنواع كورديسيبس تتطفل على حشرات غشاء البكارة
شريستا ب ، تاناكا إي ، هيون إم دبليو ، هان جي جي ، كيم سي إس ، جو جي دبليو ، هان إس كي ، أوه جي ، سونج جي إم ، سونج جي إتش
مايكوسفير 8 (9) ، 1424-1442

124- نحو دمج الفطريات اللاجنسية في تصنيف طبيعي: قائمة مرجعية وملاحظات 2012-2016
Wijayawardene NN، Hyde KD، Tibpromma S، Wanasinghe DN، Thambugala KM، Tian Q، Wang Y، Fu L
ميكوسفير 8 (9) ، 1457-1555

125. الأنواع الجديدة والسجلات من Bipolaris و Curvularia من تايلاند
Marin-Felix Y و Senwanna C و Cheewangkoon R و Crous PW
ميكوسفير 8 (9) ، 1556-1574

126. Dendryphiella fasciculata sp. نوفمبر وملاحظات حول أنواع Dendryphiella الأخرى
Liu NG و Hongsanan S و Yang J و Lin CG و Bhat DJ و Liu JK و Jumpathong J و Boonmee S و Hyde KD و Liu ZY
ميكوسفير 8 (9) ، 1575-1586

حول ميكوسفير

تنشر Mycosphere المراجعات والمقالات البحثية وأوراق المنهجية والأعمال التصنيفية مثل الدراسات ذات الصلة ببيولوجيا الفطريات ، بما في ذلك الأشنات. لغة المجلة الرسمية هي اللغة الإنجليزية.

شبكة العلوم IF = 2.0

/>
Mycosphere بواسطة http://mycosphere.org/ مرخص بموجب المشاع الإبداعي Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 الترخيص الدولي

مايكوسفير عضو في لجنة أخلاقيات النشر (COPE)

لدى Mycosphere سياسة فحص السرقة الأدبية

تمت فهرسة Mycosphere بتنسيق
♦ تم توسيع فهرس الاقتباس العلمي (المعروف أيضًا باسم SciSearch®)
♦ تقارير الاقتباس من المجلة / إصدار العلوم
♦ المحتويات الحالية® / الزراعة والأحياء والعلوم البيئية
♦ المستخلصات البيولوجية
♦ معاينة BIOSIS


شاهد الفيديو: أمراض (ديسمبر 2021).