معلومة

هل يمكن ترجمة الرنا المرسال البشري في المختبر بواسطة بدائيات النوى؟

هل يمكن ترجمة الرنا المرسال البشري في المختبر بواسطة بدائيات النوى؟



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

نظرًا لأن الشفرة الوراثية عالمية ، فهل يمكن ترجمة mRNA من خلية بشرية بشكل صحيح بواسطة بدائيات النوى في نظام ترجمة في المختبر؟


إجابة قصيرة: نعم ، يمكنك ذلك.

عادة ما تكون هذه أنظمة مقترنة للنسخ والترجمة. بالنسبة إلى هؤلاء ، تقوم باستنساخ الجين المعني إلى ناقل يحتوي على محفز بدائي النواة والذي يستخدم بعد ذلك لتوليد الرنا المرسال في الأنبوب. ثم يتم ترجمة هذا الرنا المرسال في الخطوة الثانية إلى بروتين. يعمل هذا بشكل جيد للغاية ، لكن البروتين يفتقد إلى التعديلات النموذجية اللاحقة للترجمة للخلايا حقيقية النواة مثل glycosylations ، لأنها غير موجودة في البكتيريا.

يمكن شراء هذه المجموعات من الرف من شركات التكنولوجيا الحيوية المعتادة. في الغالب تستند هذه على بكتريا قولونية محللة الخلية. تعمل كما هو موضح في الشكل (من هنا):


هل تستطيع لقاحات الرنا المرسال تغيير الحمض النووي؟

تتراوح فيروسات كورونا من نزلات البرد الشائعة إلى الإصابات الأكثر شدة مثل السارس (SARS-CoV) و MERS (MERS-CoV) و Covid-19 الحالي (SARS-CoV-2). حتى الآن لا يوجد لقاح معتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية للوقاية من عدوى فيروس كورونا. كلاهما لديه إذن استخدام في حالات الطوارئ من إدارة الغذاء والدواء.

يستخدم اثنان من لقاحات Covid-19 المتوفرة في الولايات المتحدة تقنية messenger RNA لمنع أو تقليل أعراض عدوى Covid-19. تقنية لقاح mRNA هذه هي عواقب جديدة للحمض النووي المعدل ، إن وجدت ، غير معروفة. ومع ذلك ، قال آخرون ، بما في ذلك مركز السيطرة على الأمراض ، إن الفيروس لن يتفاعل مع الحمض النووي.

يعتقد علماء آخرون أن لقاحات الرنا المرسال يمكن أن تدخل وتغير الحمض النووي بشكل دائم. مثل لقاحات الحمض النووي ، تستخدم لقاحات الحمض النووي الريبي جزءًا من الشفرة الجينية للفيروس لجعل الجهاز المناعي يستجيب.

يناقش مقال قيد النشر حاليًا (لم تتم مراجعته بعد) دراسة معملية تم فيها تحويل بعض قطع الحمض النووي الريبي Covid-19 إلى DNA ثم دمجها في الكروموسومات البشرية.

تحدثت ميديكال ديلي مع المؤلف الرئيسي رودولف جانيش ، دكتوراه في الطب. أجرى أستاذ علم الأحياء في معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا ، الدكتور جانيش ، أول تجربة تثبت أن العيوب الجينية يمكن تصحيحها في القوارض. يعمل حاليًا على علاج مرض باركنسون ومرض الزهايمر والتوحد والسرطان لدى البشر. حصل على العديد من الجوائز عن عمله ، بما في ذلك جائزة وولف في الطب.

MD: هل تشير دراستك الحديثة إلى أن لقاحات Covid-19 mRNA يمكن أن تلحق الضرر بالحمض النووي لدى البشر؟

د. يانيش: ليس دليلا على الضرر حقا. يمكن أن يتكامل mRNA في الحمض النووي ويمكن التعبير عنه ولكن لا يوجد دليل مباشر على ذلك.

MD: إذا كانت لقاحات mRNA يمكن أن تندمج في الحمض النووي البشري ، فما الذي يمكن أن يعنيه هذا للمستقبل؟

د. يانيش: ستكون تقنية متطورة. سيغير طريقة علاج الأمراض.

MD: كيف ستغير لقاحات الحمض النووي أو الرنا المرسال العلاج؟

د. يانيش: لقاحات الـ mRNA Covid-19 هي الأولى التي تظهر سلامة وفعالية هذا النوع من العلاج. إذا كان هناك دليل كافٍ على أن هذه التقنية آمنة وفعالة ، فإن ذلك ينطوي على إمكانات هائلة للعلاجات المستقبلية لعلاج العديد من الأمراض.

قد يفسر عمل مختبر Jaenisch أيضًا سبب إصابة المرضى الذين تعافوا من Covid-19 بالمرض ، حتى بعد أشهر ، وفقًا لتقرير إخباري ABC. إذا قام الفيروس بتعديل الحمض النووي لهؤلاء المرضى ، فيمكن أن تظل معلوماته الجينية نشطة. وجد مختبر Jaenisch أن الفيروس استخدم إنزيمًا يسمى LINE-1 للعودة إلى الخلية للتكاثر. LINE-1 متاح بسهولة في الجينوم البشري.

فيما يتعلق بما إذا كانت لقاحات الرنا المرسال يمكن أن تغير الحمض النووي ، يعتقد الدكتور جانيش أنه قد يكون شيئًا جيدًا. ويعتقد أيضًا أن هذه التكنولوجيا الجديدة ستقود الطريق إلى علاجات متطورة للعديد من الأمراض التي تصيب الناس. منذ أن كان الدكتور يانيش يدرس الحمض النووي في السرطان والأمراض العصبية لعقود ، فإن ما يعتقده على الأرجح أكثر مما يعرفه معظمنا.

تخرجت Yvonne Stolworthy MSN، RN من كلية التمريض في عام 1984 وأمضت سنوات عديدة في الرعاية الحرجة وكمعلمة في مجموعة متنوعة من الإعدادات ، بما في ذلك التجارب السريرية.


يتم التعبير عن عامل بدء الترجمة eIF-4A1 mRNA بشكل مفرط في خلايا سرطان الجلد البشري في المختبر

تم وصف الإمكانات الورمية لعوامل بدء الترجمة (eIF-4E و eIF-2α) في الدراسات السابقة التي أدت إلى تعريف الجينات المسرطنة متعدية. تم تحديد نسختين من cDNA المعزولة سابقًا ، معبراً عنها بشكل مختلف في خلايا سرطان الجلد البشري والخلايا الصباغية البشرية الطبيعية ، في هذه الدراسة على أنها ترميز لعامل بدء الترجمة eIF-4AI. كشف تحليل اللطخة الشمالية عن إفراط ثابت في التعبير عن eIF-4AI mRNA في لوحة من 14 خطًا من خلايا سرطان الجلد (بمتوسط ​​5.6 مرة أعلى من ثقافات الخلايا الصباغية البشرية العادية). في المقابل ، كانت mRNAs لعوامل بدء ترجمة المجموعة 4 الأخرى (eIF-4A2 و eIF-4B و eIF-4E و eIF-4γ) أقل ولم ترتفع باستمرار. أظهرت ثقافات الوحمات الصباغية الخلقية تعبيرًا وسيطًا عن eIF-4AI. وبالتالي ، يبدو أن الإفراط في التعبير عن eIF-4AI هو سمة مهمة لخلايا سرطان الجلد وقد يساهم في تحولها الخبيث. كثافة العمليات J. السرطان 71: 396-401 ، 1997. © 1997 Wiley-Liss Inc.


آسيا والمحيط الهادئ

سيتم عرض الموقع باللغة الإنجليزية.

نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لضمان عمل موقعنا بشكل آمن وسليم ، فهي ضرورية لعمل خدماتنا ولا يمكن إيقاف تشغيلها في أنظمتنا. عادةً ما يتم تعيينها فقط استجابةً للإجراءات التي اتخذتها والتي ترقى إلى مستوى طلب الخدمات ، مثل تسجيل الدخول أو استخدام عربة التسوق أو ملء النماذج. يمكنك ضبط متصفحك لحظر ملفات تعريف الارتباط هذه أو تنبيهك بها ، لكن بعض أجزاء خدماتنا لن تعمل بدونها. مثل ملفات تعريف الارتباط الأخرى التي نستخدمها ، قد تكون ملفات تعريف الارتباط الضرورية للغاية إما ملفات تعريف ارتباط الطرف الأول أو ملفات تعريف ارتباط الطرف الثالث.

نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتذكر إعداداتك وتفضيلاتك. على سبيل المثال ، قد نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتذكر تفضيلات اللغة الخاصة بك.
السماح بملفات تعريف الارتباط المفضلة

نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لجمع معلومات حول كيفية تفاعلك مع خدماتنا ولمساعدتنا في قياسها وتحسينها. على سبيل المثال ، قد نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتحديد ما إذا كنت قد تفاعلت مع صفحة معينة.
السماح بملفات تعريف الارتباط الخاصة بالأداء / الإحصائيات

نحن وشركاؤنا الإعلانيون نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتقديم الإعلانات ، وجعلها أكثر صلة وذات مغزى بالنسبة لك ، ولتتبع كفاءة حملاتنا الإعلانية ، سواء على خدماتنا أو على مواقع الويب الأخرى ووسائل التواصل الاجتماعي.
السماح بملفات تعريف الارتباط التسويقية


بدء الترجمة: نظم الاستخراج وعلم الوراثة الجزيئية

دانيال آر جالي ، طرق في علم الإنزيمات ، 2007

1 المقدمة

يختلف بدء ترجمة حقيقيات النوى عن تلك الموجودة في البكتيريا في زيادة عددها وتعقيد العوامل التي تشارك في تخليق البروتين. في بعض الحالات ، تمثل هذه العوامل البروتينات التنظيمية التي تستهدف mRNAs معينة لتعزيز أو قمع ترجمتها. تتطلب الترجمة في حقيقيات النوى أيضًا عددًا أكبر من عوامل البدء لتجميع الريبوسوم في كودون البدء المناسب. الدور التنظيمي الذي تلعبه عوامل البدء في تحديد مستوى التعبير على مستوى الجينوم بأكمله يحظى بالاهتمام الآن فقط. سيكون توضيح المساهمة التي يقدمونها أمرًا ضروريًا في فهم كيفية تأثير آلية الترجمة على تكوين البروتين في خلية أو نسيج أو عضو معين. استخدام النباتات كنموذج للترجمة والتنظيم الانتقالي في حقيقيات النوى الأعلى له مزايا عديدة. توفر النباتات مصدرًا جاهزًا وغير مكلف من المواد للتحليل ، ويمكن إنشاء الطفرات بسهولة ، كما أنها تمتلك مسارات إشارات واستجابات إجهاد يتم حفظها في كثير من الحالات مع تلك الموجودة في حقيقيات النوى الأخرى. بالإضافة إلى ذلك ، لطالما استخدمت محللة الترجمة المشتقة من جرثومة القمح لدراسة تخليق البروتين. إن جنين القمح ، الذي يتكون منه محلول جرثومة القمح ، غني بالعوامل المطلوبة لتخليق البروتين ومنخفض في mRNAs الذاتية. في حين أن هذا له ميزة إنتاج نظام ترجمة نشط ، إلا أنه يعني أيضًا أن الترجمة تتم في ظل ظروف غير تنافسية ، أي وجود فائض من الآلية متعدية لـ mRNA التي يتم ترجمتها. هذا يمكن أن يجعل دراسة التنظيم الترجمي صعبة أو مستحيلة لأن المستوى العالي من عوامل الترجمة يحجب ميزات mRNA التي تساهم في التحكم في التعبير على المستوى الترجمي. نظرًا لأن معظم تنظيم الترجمة يحدث أثناء مرحلة بدء تخليق البروتين ، فإن استنفاد عوامل البدء المحددة يمكن أن يحول هذا النظام غير التنافسي إلى نظام تنافسي يمكن من خلاله الكشف عن السمات التنظيمية لـ mRNA. في هذا الفصل ، نصف تحضير المحللات المجزأة المستنفدة لعوامل بدء محددة واستخدامها في دراسة التنظيم الترجمي.


يُظهر اكتشاف جديد أن الخلايا البشرية يمكنها كتابة تسلسل الحمض النووي الريبي في الحمض النووي

تحتوي الخلايا على آلات تقوم بتكرار الحمض النووي في مجموعة جديدة تدخل في خلية مشكلة حديثًا. هذه الفئة نفسها من الآلات ، التي تسمى بوليميراز ، تبني أيضًا رسائل RNA ، والتي تشبه الملاحظات المنسوخة من مستودع الحمض النووي المركزي للوصفات ، بحيث يمكن قراءتها بشكل أكثر كفاءة في البروتينات. لكن كان يُعتقد أن البوليميرات تعمل فقط في اتجاه واحد من الحمض النووي إلى الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. هذا يمنع إعادة كتابة رسائل RNA في كتاب الوصفات الرئيسي للحمض النووي الجيني. الآن ، يقدم باحثو جامعة توماس جيفرسون الدليل الأول على أنه يمكن إعادة كتابة مقاطع الحمض النووي الريبي في الحمض النووي ، مما قد يتحدى العقيدة المركزية في علم الأحياء ويمكن أن يكون له آثار واسعة تؤثر على العديد من مجالات علم الأحياء.

يقول ريتشارد بوميرانتز ، دكتوراه ، أستاذ الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية في جامعة توماس جيفرسون: "يفتح هذا العمل الباب للعديد من الدراسات الأخرى التي ستساعدنا على فهم أهمية وجود آلية لتحويل رسائل RNA إلى DNA في خلايانا". . "حقيقة أن البوليميراز البشري يمكنه القيام بذلك بكفاءة عالية ، يثير العديد من الأسئلة." على سبيل المثال ، تشير هذه النتيجة إلى أنه يمكن استخدام رسائل RNA كقوالب لإصلاح أو إعادة كتابة الحمض النووي الجيني.

نُشر العمل في 11 حزيران / يونيو في المجلة تقدم العلم.

بالتعاون مع المؤلف الأول جوروشانكار تشاندرامولي Gurushankar Chandramouly وغيره من المتعاونين ، بدأ فريق الدكتور بوميرانتز بفحص بوليميراز غير عادي للغاية ، يسمى بوليميراز ثيتا. من بين 14 بوليميراز DNA في خلايا الثدييات ، يقوم ثلاثة فقط بالجزء الأكبر من عمل تكرار الجينوم بأكمله للتحضير لانقسام الخلايا. أما الـ 11 المتبقية فهم يشاركون في الغالب في الكشف وإجراء الإصلاحات عندما يكون هناك انقطاع أو خطأ في خيوط الحمض النووي. تقوم بوليميراز ثيتا بإصلاح الحمض النووي ، لكنها عرضة للخطأ وتسبب العديد من الأخطاء أو الطفرات. لذلك لاحظ الباحثون أن بعض الصفات "السيئة" لبوليميراز ثيتا كانت تلك التي تشترك فيها مع آلة خلوية أخرى ، وإن كانت أكثر شيوعًا في الفيروسات - النسخ العكسي. مثل Pol theta ، يعمل المنتسخ العكسي لفيروس نقص المناعة البشرية كبوليميراز DNA ، ولكن يمكنه أيضًا ربط RNA وقراءة الحمض النووي الريبي مرة أخرى في حبلا DNA.

في سلسلة من التجارب الأنيقة ، اختبر الباحثون بوليميراز ثيتا ضد النسخ العكسي من فيروس نقص المناعة البشرية ، وهو واحد من أفضل الدراسات من نوعه. أظهروا أن بوليميراز ثيتا كان قادرًا على تحويل رسائل الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي ، وهو ما فعلته بالإضافة إلى النسخ العكسي لفيروس نقص المناعة البشرية ، وأنه في الواقع قام بعمل أفضل من نسخ الحمض النووي إلى الحمض النووي. كان Polymerase theta أكثر كفاءة وأدخل أخطاءً أقل عند استخدام قالب RNA لكتابة رسائل DNA جديدة ، مقارنةً بتكرار الحمض النووي في DNA ، مما يشير إلى أن هذه الوظيفة يمكن أن تكون هدفها الأساسي في الخلية.

تعاونت المجموعة مع مختبر الدكتور Xiaojiang S. Chen في جامعة جنوب كاليفورنيا واستخدمت علم البلورات بالأشعة السينية لتحديد الهيكل ووجدت أن هذا الجزيء كان قادرًا على تغيير الشكل من أجل استيعاب جزيء RNA الأكبر حجمًا - وهو إنجاز فريد بين البوليميراز.

يقول الدكتور بوميرانتز: "يشير بحثنا إلى أن الوظيفة الرئيسية لبوليميراز ثيتا هي العمل كنسخة عكسية". "في الخلايا السليمة ، قد يكون الغرض من هذا الجزيء هو إصلاح الحمض النووي بوساطة RNA. في الخلايا غير الصحية ، مثل الخلايا السرطانية ، يتم التعبير عن بوليميريز ثيتا بشكل كبير ويعزز نمو الخلايا السرطانية ومقاومة الأدوية. سيكون من المثير أن نفهم كيف يساهم نشاط بوليميراز ثيتا على الحمض النووي الريبي في إصلاح الحمض النووي وتكاثر الخلايا السرطانية ".

تم دعم هذا البحث من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة 1R01GM130889-01 و 1R01GM137124-01 و R01CA197506 و R01CA240392. تم دعم هذا البحث جزئيًا من خلال منحة مؤسسة Tower Cancer Research Foundation.


في المختبر التوليف (IVT)

في المختبر يعد تخليق جزيئات الحمض النووي الريبي أحادية الشريطة إجراءً مختبريًا مستخدَمًا على نطاق واسع وهو أمر بالغ الأهمية لأبحاث الحمض النووي الريبي ، بالإضافة إلى المستحضرات الصيدلانية الحيوية للـ RNA. هذه التقنية متعددة الاستخدامات من حيث أنها تسمح للباحث بتكييف التوليف وإدخال التعديلات لإنتاج نسخة. تشمل التطبيقات النهائية التوصيف الكيميائي الحيوي والجزيئي لـ RNA لتفاعلات بروتين RNA والتحليلات الهيكلية ، وتوليد aptamers RNA ، وتوليف mRNAs الوظيفية للتعبير ، وتوليد RNAs صغيرة لتغيير التعبير الجيني (على سبيل المثال ، توجيه RNAs ، RNAi). علاوة على ذلك ، فإن استخدام في المختبر كان الحمض النووي الريبي المركب مفيدًا في تطوير لقاحات RNA وأدوات تحرير الجينوم CRISPR / Cas9 ، وتوليد الخلايا الجذعية متعددة القدرات ، بالإضافة إلى تطوير التشخيصات القائمة على تضخيم الحمض النووي الريبي.

تتطلب تفاعلات IVT القوية عالية الإنتاجية تحسين كل مكون من مكونات التفاعل. يقدم NEB خمسة في المختبر مجموعات توليف الحمض النووي الريبي ، والتي تم تحسينها جميعًا لتوليد عوائد قابلة للتكرار من جودة الحمض النووي الريبي. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضًا شراء المكونات الفردية لتغطية IVT و mRNA.

  1. ريو ، دي سي ، وآخرون. RNA: دليل المختبر. كولد سبرينغ هاربور: مطبعة كولد سبرينغ هاربور ، 2011 ، 205-220.
  2. كوبر ، جيفري م. الخلية: نهج جزيئي. الطبعة الرابعة. واشنطن العاصمة: ASM Press، 2007. 262-299.
  3. جاني ب ، فوكس ر. J فيس إكسب. 2012 26 مارس (61). PMID: 22473375

اختر النوع:

مقالات

فهم خيارات اختيار الكواشف ومدى تأثير الكاشف على وظيفة غطاء الرنا المرسال المركب.

الكتيبات

إرشادات الاستخدام

هذا المنتج مغطى بواحدة أو أكثر من براءات الاختراع والعلامات التجارية و / أو حقوق النشر المملوكة أو الخاضعة لسيطرة New England Biolabs، Inc (NEB).

بينما تقوم NEB بتطوير منتجاتها والتحقق منها لتطبيقات مختلفة ، فإن استخدام هذا المنتج قد يتطلب من المشتري الحصول على حقوق ملكية فكرية إضافية لطرف ثالث لتطبيقات معينة.

لمزيد من المعلومات حول الحقوق التجارية ، يرجى الاتصال بفريق تطوير الأعمال العالمية في NEB على [email protected]

هذا المنتج مخصص لأغراض البحث فقط. هذا المنتج غير مخصص للاستخدام لأغراض علاجية أو تشخيصية في البشر أو الحيوانات.

أشرطة فيديو

النسخ المختبري وتغطية مرنا Gaussia Luciferase متبوعًا بترنسفكأيشن خلية هيلا

هذه الطريقة تصف العائد المرتفع في المختبر تخليق كل من الرنا المرسال المغطاة وغير المغطاة من بلازميد خطي يحتوي على جاوس جين لوسيفيراز (GLuc).


أوجه التشابه بين الترجمة بدائية النواة وحقيقية النواة:

@. كلا المجموعتين تستخدم قالب مرنا

@. في كلتا المجموعتين يتم تصنيع الرنا المرسال من الجزيء الجيني DNA

@. الريبوسوم هو آلية تخليق البروتين في كلا المجموعتين

@. جميع الأحماض الأمينية العشرين متشابهة في كلا المجموعتين

@. جميع الكودونات الـ 61 متشابهة في كلا المجموعتين

@. في كلا المجموعتين ، يحدث تخليق البروتين في السيتوبلازم

@. في كلا المجموعتين ، تتم الترجمة في أربع عمليات ، (1). بدء ، (2). استطالة (3). إزفاء و (4). نهاية

@. تتشابه عملية تكوين رابطة الببتيد في كلا المجموعتين

@. في كلتا المجموعتين ، تلتقط الحمض الريبي النووي النقال (tRNA) وتجلب الحمض الأميني الصحيح

@. في كلتا المجموعتين ، يتم إجراء نشاط ترانسفيراز الببتيد الذي يحفز تكوين رابطة الببتيد بواسطة جزيئات الرنا الريباسي لوحدة فرعية أكبر من الريبوسوم (ريبوزيم)

@. جميع أكواد التوقف الثلاثة متشابهة في كلا المجموعتين


تعدد الأدينيل والتفعيل الترجمي

المستوى النسبي لعديد الأدينيل في نهاية 3 للرسالة له تأثير كبير على الحالة الترجمية لـ mRNA. أثناء التطور الجنيني المبكر ، يتم تنشيط ترجمة mRNAs الخاصة بالأم من خلال إضافة ذيل بولي (A) في السيتوبلازم ، وتُعزى خصوصية هذا البولي أدينيل إلى رابطة الدول المستقلة- فاعلية العناصر في الحمض النووي الريبي. وصف Eulalia Belloc (Center de Regulacio Genomica ، برشلونة ، إسبانيا) كيف يمكن العثور على عناصر mRNA التي تتوسط تعدد الأدينيل (عناصر تعدد الأدينيل السيتوبلازمي) جنبًا إلى جنب مع عناصر التعرف التي تؤدي إلى إبادة الرنا المرسال (العناصر الغنية بـ AU). قد يكون للترتيب النسبي لهذه العناصر تأثير على المظهر الجانبي لعديد الأدينيل في الرنا المرسال. تشير هذه النتائج إلى أن الارتباط التوافقي للبروتينات بهذه العناصر يتوسط تغييرات معقدة وقابلة للعكس في ذيل mRNA poly (A) وحالة ترجمة mRNA. ناقش جويل ريختر (كلية الطب بجامعة ماساتشوستس ، ووستر ، الولايات المتحدة الأمريكية) وسيلة للتحكم الزمني في ترجمة الرنا المرسال من خلال التغييرات في طول ذيل بولي (A) من خلال إعادة هيكلة 3 'UTR mRNP. واقترح أنه ، استجابة لفسفرة بروتين ربط عنصر بولي أدينيل السيتوبلازمي (CPEB) ، فإن بولي (A) ريبونوكلياز ينزاح من mRNP متعدد البروتينات ، مما يسهل إضافة بولي (A) محفزًا بواسطة عضو معقد آخر ، Gld-2 ، وهو عنصر غير قانوني. بولي (أ) بوليميريز.

استخدام تحليل مصفوفة حالة عديد الأدينيل (PASTA) لفصل وتحديد مجموعات الرنا المرسال من خميرة الخميرة على أساس طول ذيل بولي (A) ، أفاد توماس بريس (معهد فيكتور تغيير القلب للبحوث ، سيدني ، أستراليا) بوجود ارتباطات إيجابية بين بولي (A) طول الذيل وكثافة الريبوسوم (تمثل الترجمة النشطة) ، والتنظيم المشترك المحتمل لـ mRNAs ذات الصلة وظيفيًا من خلال حالة ذيل بولي (A). ومن المثير للاهتمام ، أنه لم يتم ملاحظة وجود علاقة عامة بين طول ذيل بولي (A) واستقرار mRNA ، ومع ذلك ، فقد تبين أن ارتباط بروتين ربط بولي (A) (PAB) مع مرنا مرتبط بحالة الذيل. دعمًا للنظرية الشائعة القائلة بأن ارتباط PAB مع mRNA ، بدلاً من ذيل poly (A) نفسه ، يعمل كمحرر شامل للترجمة ، وصف Glover Martin (معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا ، كامبريدج ، الولايات المتحدة الأمريكية) التعبير الفعال عن mRNA غير الغداني من فيروس حمى الضنك من خلال ارتباط PAB بـ mRNA 3 'UTR على الرغم من عدم وجود ذيل بولي (A).


في المختبر التوليف (IVT)

في المختبر يعد تخليق جزيئات الحمض النووي الريبي أحادية الشريطة إجراءً مختبريًا مستخدَمًا على نطاق واسع وهو أمر بالغ الأهمية لأبحاث الحمض النووي الريبي ، بالإضافة إلى المستحضرات الصيدلانية الحيوية للـ RNA. هذه التقنية متعددة الاستخدامات من حيث أنها تسمح للباحث بتكييف التوليف وإدخال التعديلات لإنتاج نسخة. تشمل التطبيقات النهائية التوصيف الكيميائي الحيوي والجزيئي لـ RNA لتفاعلات بروتين RNA والتحليلات الهيكلية ، وتوليد aptamers RNA ، وتوليف mRNAs الوظيفية للتعبير ، وتوليد RNAs صغيرة لتغيير التعبير الجيني (على سبيل المثال ، توجيه RNAs ، RNAi). علاوة على ذلك ، فإن استخدام في المختبر كان الحمض النووي الريبي المركب مفيدًا في تطوير لقاحات RNA وأدوات تحرير الجينوم CRISPR / Cas9 ، وتوليد الخلايا الجذعية متعددة القدرات ، بالإضافة إلى تطوير التشخيصات القائمة على تضخيم الحمض النووي الريبي.

تتطلب تفاعلات IVT القوية عالية الإنتاجية تحسين كل مكون من مكونات التفاعل. يقدم NEB خمسة في المختبر مجموعات توليف الحمض النووي الريبي ، والتي تم تحسينها جميعًا لتوليد عوائد قابلة للتكرار من جودة الحمض النووي الريبي. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضًا شراء المكونات الفردية لتغطية IVT و mRNA.

  1. ريو ، دي سي ، وآخرون. RNA: دليل المختبر. كولد سبرينغ هاربور: مطبعة كولد سبرينغ هاربور ، 2011 ، 205-220.
  2. كوبر ، جيفري م. الخلية: نهج جزيئي. الطبعة الرابعة. واشنطن العاصمة: ASM Press، 2007. 262-299.
  3. جاني ب ، فوكس ر. J فيس إكسب. 2012 26 مارس (61). بميد: 22473375

اختر النوع:

مقالات

فهم خيارات اختيار الكواشف ومدى تأثير الكاشف على وظيفة غطاء الرنا المرسال المركب.

الكتيبات

إرشادات الاستخدام

هذا المنتج مغطى بواحدة أو أكثر من براءات الاختراع والعلامات التجارية و / أو حقوق النشر المملوكة أو الخاضعة لسيطرة New England Biolabs، Inc (NEB).

بينما تقوم NEB بتطوير منتجاتها والتحقق منها لتطبيقات مختلفة ، فإن استخدام هذا المنتج قد يتطلب من المشتري الحصول على حقوق ملكية فكرية إضافية لطرف ثالث لتطبيقات معينة.

لمزيد من المعلومات حول الحقوق التجارية ، يرجى الاتصال بفريق تطوير الأعمال العالمية في NEB على [email protected]

هذا المنتج مخصص لأغراض البحث فقط. هذا المنتج غير مخصص للاستخدام لأغراض علاجية أو تشخيصية في البشر أو الحيوانات.

أشرطة فيديو

النسخ المختبري وتغطية مرنا Gaussia Luciferase متبوعًا بترنسفكأيشن خلية هيلا

هذه الطريقة تصف العائد المرتفع في المختبر تخليق كل من الرنا المرسال المغطاة وغير المغطاة من بلازميد خطي يحتوي على جاوس جين لوسيفيراز (GLuc).


شاهد الفيديو: الية تركيب بروتين في الخلية - الاستنساخ و الترجمة (أغسطس 2022).