معلومة

هل يتم اختيار المستضدات الميكروبية ضد؟


تثير المستضدات استجابة من الجهاز المناعي المضيف. هل يمكن أن تؤدي الضغوط الانتقائية إلى فقدان الميكروبات لمستضداتها؟ هل لوحظ هذا؟ أم أن المستضدات مهمة جدًا لدرجة أنها تمنع فقدانها؟


بيولوجيا الخلية المتغصنة

في الدم والأغشية المخاطية والأعضاء اللمفاوية ، تلعب الخلايا المتغصنة دورًا مزدوجًا كحارس ، ولكن أيضًا كموصلات للأوركسترا المناعية. مختبئًا في المداخل التي تستخدمها مسببات الأمراض ، تحدد الخلايا التغصنية العوامل المعدية ، وتبتلعها وتطلق إشارات كيميائية حيوية لتنبيه الخط الأول من الخلايا الدفاعية في الجسم وجذبها إلى موقع الإصابة. بمجرد هضم الدخيل ، تقوم الخلايا المتغصنة أيضًا بكشف شظايا العامل الممرض على سطحها: المستضدات. ثم يهاجرون عبر الأوعية اللمفاوية إلى الأعضاء الليمفاوية الثانوية (الطحال والعقد الليمفاوية والأنسجة اللمفاوية المرتبطة بالغشاء المخاطي في الجهاز الهضمي والرئتين) حيث يقدمون هذه المستضدات إلى الخلايا الليمفاوية التائية والبائية. وبمجرد أن يتم "تسليحهم" ضد العامل الممرض نتيجة لهذه العملية ، فإن هؤلاء المدافعين ذوي الدقة العالية يهاجرون بدورهم إلى موقع الإصابة لضمان القضاء عليه.

في تسلسل الأحداث هذا ، يهتم فريق فيليب بيير وإيفيلينا جاتي بشكل خاص بالمرحلة الرئيسية لنضج الخلايا التغصنية. هذه هي اللحظة التي تكتشف فيها الخلايا الميكروبات أو الخطر ، وتغير وظائفها البيولوجية وتبدأ في الهجرة إلى الأعضاء اللمفاوية الثانوية.

توليد خلية شجيرية. حقوق النشر ، فيليب بيير ، CIML

يتذكر فيليب بيير: "تعمل الخلايا المتفرعة كواجهة". "إنهم يستشعرون المنتجات الميكروبية ، ويصنفونها وفقًا لنوعها ، ثم يحولون هذه المعلومات إلى تعليمات. ويستخدمون هذه التعليمات ليس فقط لأنفسهم - لأن المواجهة مع المنتجات الميكروبية ليست حدثًا تافهًا وتولد إجهادًا طبيعيًا في الخلايا - ولكن أيضًا للخلايا المناعية التي يتعاونون معها.
من المفارقات ، بينما كنا نعلم منذ فترة طويلة الدور الرئيسي الذي تلعبه هذه الخلايا في تنشيط الخلايا الليمفاوية B و T ، وحددنا المستشعرات التي تسمح لها باكتشاف إشارات الخطر المنبعثة من مسببات الأمراض ، فإن تشغيل هذه الواجهة يظل جزئيًا لغزًا . نحن نحاول حل هذا اللغز ، لفهم كيف تقوم الخلايا المتغصنة بتحويل "البيانات الميكروبية" إلى "تعليمات مناعية".

لتقديم هذه التعليمات المناعية ، لا يتم تقديم المستضد (عمليًا ببتيد قليل من الأحماض الأمينية في الطول) بمعزل عن الخلايا اللمفاوية التائية بواسطة الخلايا المتغصنة ولكن يتم وضعه في جيب مكون من جزيء ، يُعرف باسم مجمع التوافق النسيجي الرئيسي (يسمى HLA في البشر). تحدد بروتينات MHC التعرف على المستضد بواسطة الخلايا الليمفاوية وبالتالي تنشيطها داخل الأعضاء اللمفاوية الثانوية. من الناحية المنطقية ، يهتم الفريق بمعرفة ما إذا كانت الخلية التغصنية تعيد توجيه نقل جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير اعتمادًا على طبيعة المنتجات الميكروبية التي اكتشفتها ، وبأي وسيلة.

"تحت المجهر ، تتغير جميع الخلايا المتغصنة بشكل كبير استجابة للمنتجات الميكروبية "

"بالنظر تحت المجهر إلى سلوك جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير في الخلايا المتغصنة ، وجدنا أن إضافة المنتجات الميكروبية تؤدي إلى تغييرات جذرية في جميع الخلايا في ثقافتنا" ، كما تقول إيفيلينا جاتي ، القائدة المشاركة في هذا الفريق. "في البداية في داخل الخلايا ، تعرضت جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير فجأة على السطح الخارجي للخلية. حاولنا أن نفهم كيف تنظم الخلية المتغصنة تهريب جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير."

تنشيط الخلايا الشجيرية (جزيئات MHC II باللون الأخضر ، والليزوزومات باللون الأحمر ، والنواة باللون الرمادي). الصورة مجاملة من Alexis Combes، CIML

منذ هذه الملاحظات ، جمع فريقنا كمية هائلة من البيانات الجديدة حول المسارات البيوكيميائية التي تنطوي على اكتساب الخلايا المتغصنة لوظائف مناعية لا مثيل لها. بينما كان نظام وضع العلامات للبروتين الميكروبي معروفًا لسنوات عديدة ، اكتشف الفريق أن إنزيمات عائلة يوبيكويتين ليجاز من جزيئات تسمى MARCH - تنظم توجيه جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير أثناء تنشيط DC. وهذا يسمح للجزيئات بالحصول على "تذكرة" للوصول المقيد إلى الأجزاء المتخصصة بالخلية. هنا يواجه MHC مستضدات من مسببات الأمراض أو الببتيدات من الذات لتوجيه استجابة جهاز المناعة ، إما لشن هجوم أو للإشارة إلى أنها غير ضارة.

تغيير في توزيع جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير من الدرجة الثانية داخل خلية شجيرية في وجود (أعلى) أو غياب (أسفل) يوبيكويتين ليجاسى MARCH1. الصورة مقدمة من Aude de Gassart و Evelina Gatti ، CIML

كان فريقنا قادرًا أيضًا على إظهار أن الدماغ والجزيء المرتبط بـ LAMP المرتبط بالتيار المستمر (BAD-LAMP ، C20orf103 ، LAMP5) هو مساعد للمستقبلات الشبيهة بالبطانة (TLR) التي يتم التعبير عنها تحديدًا في النوع البشري I Interferon الذي ينتج البلازما لخلايا متغصنة. ، والتي تختص باكتشاف الأحماض النووية التي يحتمل أن تكون ذات أصل فيروسي أو بكتيري. يسمح BAD-LAMP بمعالجة مستقبلات TLR في المقصورات داخل الخلايا التي تحدد على وجه التحديد إخراج الإشارات المنبعثة من هذه المستقبلات ، وبالتالي فهي تدفع نوع الاستجابة المناعية التي تتكيف مع التهديد الميكروبي المكتشف. لذلك ، فإن BAD-LAMP هو جزيء رئيسي لدراسة تنظيم المناعة الفطرية للإنسان استجابةً للأحماض النووية وبيولوجيا المستقبلات TLRs التي يتم طلبها بشكل كبير في المناعة المضادة للسرطان أو الفيروسات وغالبًا ما يتم تحريرها في عدد من أمراض المناعة الذاتية ، مثل الذئبة الحمامية الجهازية (الذئبة الحمراء).


المناعة بوساطة الجسم المضاد

كوسطاء للمناعة ، تم اكتشاف في مطلع القرن أن الأجسام المضادة كانت موجودة في جزء الدم في الدم. لقد ثبت في عام 1939 أن الأجسام المضادة كانت موجودة على وجه التحديد في جزء جاما من مصل المصل الكهربائي ، وبالتالي فإن المصطلح جاماجلوبيولين صُنع لمصل يحتوي على أجسام مضادة. تم استدعاء الأجسام المضادة نفسها المناعية.

فئات الأجسام المضادة

هناك عدد من أنواع الأجسام المضادة أو الغلوبولينات المناعية التي تتفاعل بشكل كيميائي تجسيمي وعلى وجه التحديد مع مستضد تسبب في تكوينها. يتم إنتاج كل فئة من هذه الفئات من الغلوبولين المناعي (اختصار Ig) بواسطة استنساخ محدد من خلايا البلازما. يتم تحديد خمس فئات من الغلوبولين المناعي على أساس تكوينها الثقيل السلسلة ، المسماة IgG و IgM و IgA و IgE و IgD. يتم تقسيم IgG و IgA أيضًا إلى فئات فرعية.

الشكل 5. تمثيل تخطيطي لمختلف فئات الغلوبولين المناعي

تتميز فئات الغلوبولين المناعي بخصائص فيزيائية وكيميائية مختلفة وتظهر خصائص بيولوجية فريدة. يحدث تركيبها في مراحل ومعدلات مختلفة أثناء الاستجابة المناعية و / أو أثناء الإصابة. تختلف أهميتها ووظائفها في مقاومة المضيف (المناعة).

مفتش . الغلوبولين المناعي G هو الغلوبيولين المناعي السائد في المصل وهو يشكل حوالي 80٪ من إجمالي الجسم المضاد الموجود في الحيوان في أي وقت ، ويمثل 75٪ من إجمالي الجسم المضاد في الدم. يمكن أن ينتشر خارج مجرى الدم إلى المساحات خارج الأوعية الدموية وهو الأكثر شيوعًا Ig الموجود هناك. يزداد تركيزه في سوائل الأنسجة أثناء الالتهاب. إنه فعال بشكل خاص في تحييد السموم البكتيرية والفيروسات خارج الخلية. كما أن لديها قدرة طبرية وقدرة على تثبيت المكمل. إن IgG هو الذي يعبر حاجز المشيمة ، وبالتالي يوفر مناعة سلبية للجنين والرضيع خلال الأشهر الستة الأولى من الحياة.

IgG هو نموذج لفهم بنية ووظيفة جزيئات الجسم المضاد ، ومن المناسب فحص خصائصه الكيميائية الحيوية قبل مناقشة خصائص جميع الأنواع الأخرى من الغلوبولين المناعي.

الشكل 6. نموذج الغلوبولين المناعي: هيكل IgG

IgG هو بروتين بوزن جزيئي يبلغ حوالي 150.000 دالتون. يتكون البروتين من سلسلتان ثقيلتان متطابقتان (H) (لكل منها ميغاواط حوالي 50 دينار كويتي) و سلسلتان متطابقتان من الضوء (L) (ميغاواط حوالي 25 دينار كويتي). ترتبط كل سلسلة L بسلسلة H وترتبط السلسلتان H ببعضهما البعض عن طريق جسور ثاني كبريتيد. يتم رسم الجزيء ليبدو مثل Y. يسمى جذع Y بـ منطقة Fc ويتكون بشكل أساسي من نصفين من سلاسل H متطابقة. يحتوي كل من "أذرع" Y على سلسلة L كاملة ونصف واحدة من سلاسل H. يقف الجذع Y على الطرف الكربوكسي للسلاسل H ، وتحتوي أطراف الذراعين على النهايات الأمينية للسلسلة H و L. يشار إلى كل ذراع أحيانًا باسم منطقة فاب للجزيء. منطقة Fab هي جزء ربط مولد الضد لجزيء الجسم المضاد. سوف تتفاعل منطقة معينة من المستضد (تسمى محدد المستضد) بشكل تجسيمي مع منطقة ارتباط المستضد في النهاية الأمينية لكل فاب. ومن ثم ، فإن جزيء IgG ، الذي يحتوي على جزأين مرتبطين بمولد الضد [(فاب) 2] ثنائي التكافؤ: يمكن أن يرتبط بجزيئي Ag. تكون تركيبة البولي ببتيد لمنطقة Fc لجميع جزيئات الأجسام المضادة IgG1 ثابتة نسبيًا بغض النظر عن خصوصية الجسم المضاد ، ومع ذلك ، تختلف مناطق Fab دائمًا في متواليات الأحماض الأمينية الدقيقة الخاصة بها اعتمادًا على خصوصية المستضد الخاصة بها. على الرغم من أن المستضد لا يتفاعل مع منطقة Fc لجزيء IgG1 ، لا ينبغي أن يؤخذ هذا على أنه يعني أن منطقة Fc ليس لها أهمية أو نشاط بيولوجي. على العكس من ذلك ، يتم التعرف على مناطق الأحماض الأمينية المحددة لجزء Fc من الجزيء بواسطة مستقبلات على الخلايا البلعمية وبعض الخلايا الأخرى ، ويحتوي مجال Fc على منطقة ببتيد ترتبط بالمكمل وتنشطه ، وهو أمر مطلوب غالبًا لإظهار AMI.

إن فهم بنية IgG وخصائصه مفيد لمناقشة وظيفته في دفاع المضيف. نظرًا لأن جزيء IgG ثنائي التكافؤ ، فيمكنه ربط جزيئات Ag ، مما قد يؤدي إلى ترسيب أو تراص المستضدات إذا كان IgG مرتبطًا بـ Ag على خلية أو سطح ميكروبي ، فقد توفر منطقة Fc الخاصة به رابطًا خارجيًا سيتم التعرف عليه بواسطة مستقبلات محددة على الخلايا البلعمية ، ويقال إن هذه الخلايا الميكروبية أو الفيروسات المغلفة بجزيئات IgG تكون مطهرة من أجل البلعمة. تؤخذ البكتيريا المسببة للأمراض المسببة للأوبئة وتدميرها بسهولة أكبر بكثير عن طريق الخلايا البلعمية مقارنة بنظيراتها غير المتآكلة. يعمل IgG ، وكذلك IgM و IgA ، على تحييد نشاط السموم ، بما في ذلك السموم الخارجية البكتيرية. علاوة على ذلك ، يمكن لجزيئات IgG المتصالبة الموجودة على سطح الخلية أن ترتبط وتنشط المكمل من المصل وتطلق سلسلة من التفاعلات التي يمكن أن تؤدي إلى تدمير الخلية (المستضد). ربما يرجع ذلك إلى صغر حجمه نسبيًا واستمراره في مصل الأم ، حيث يتم مشاركة IgG مع الجنين في الرحم، والرضيع يولد مع مجموعة كاملة من الأجسام المضادة IgG الأم.

IgM هو أول غلوبولين مناعي يصنعه الرضع وأول من يظهر في مجرى الدم أثناء الإصابة بالعدوى. بشكل أساسي ، يقتصر على مجرى الدم مما يمنح المضيف الحماية ضد مسببات الأمراض المنقولة بالدم. يشكل IgM حوالي 10٪ من الغلوبولين المناعي في الدم. يتم ترتيب IgM ليشبه الخماسي المكون من خمسة جزيئات غلوبولين مناعي (mw = 900kd) مرتبطة ببعضها البعض بواسطة نطاقات Fc الخاصة بها. بالإضافة إلى الروابط التساهمية بين الوحدات الفرعية الأحادية ، يتم تثبيت الخماسي بواسطة عديد ببتيد 15kd يسمى سلسلة J. لذلك ، لدى IgM "تكافؤ" نظري قدره 10 (أي أنه كشف 10 مجالات Fab). ربما يكون أهم دور لـ IgM هو قدرته على العمل مبكرًا في الاستجابات المناعية ضد مسببات الأمراض المنقولة بالدم. كما هو متوقع ، IgM فعال للغاية في تراص مستضدات الجسيمات. أيضًا ، تكمل روابط IgM بقوة ، وتعمل الأجسام المضادة IgM المرتبطة بسطح ميكروبي مثل opsonins ، مما يجعل الميكروب أكثر عرضة للبلعمة. في وجود الخلايا الميكروبية الكاملة IgM والمتممة قد تقتل وتتحلل. يظهر IgM أيضًا على أسطح الخلايا البائية الناضجة كمونومر عبر الغشاء حيث يعمل كمستقبل للمستضد ، قادر على تنشيط الخلايا البائية عند ارتباطها بالمستضد.

إيغا يوجد كمونومر 160kd في مصل الدم و 400kd dimer في الإفرازات. كما في حالة IgM ، تكون البلمرة (البلمرة) عبر سلسلة J. هناك نوعان من الفئات الفرعية تعتمدان على سلاسل ثقيلة مختلفة ، IgA1 و IgA2. يتم إنتاج IgA1 في نخاع العظام ويشكل معظم مصل الدم IgA. يتم تصنيع كل من IgA1 و IgA2 في GALT (الأنسجة اللمفاوية المرتبطة بالأمعاء) ليتم إفرازها على الأسطح المخاطية. نظرًا لأنه قد يتم تصنيع IgA محليًا وإفرازه في الإفرازات المخاطية للجسم ، يُشار إليه أحيانًا باسم الجسم المضاد إفرازي أو sIgA. من الناحية الكمية ، يتم تصنيع IgA بكميات أكبر من IgG ، ولكن له عمر نصف قصير في المصل (6 أيام) ، ويتم فقده في المنتجات الإفرازية. تركيز IgA في مصل الدم حوالي 15٪ من إجمالي الجسم المضاد. يتم توسط إفراز الغلوبيولين المناعي أ عن طريق بروتين سكري يبلغ 100 ألف دينار كويتي يسمى مكون إفرازي. إن إضافة القطعة الإفرازية إلى جزيئات IgA هي التي تفسر قدرتها على الخروج من الجسم إلى الأسطح المخاطية عبر الغدد الخارجية. يمكن أن ينتقل IgM بالمثل ويشكل نسبة صغيرة من الأجسام المضادة الإفرازية.

إفرازي إيغا هو الغلوبولين المناعي السائد الموجود في سوائل الجهاز الهضمي وإفرازات الأنف واللعاب والدموع والإفرازات المخاطية الأخرى في الجسم. تعتبر الأجسام المضادة IgA مهمة في مقاومة عدوى الأسطح المخاطية للجسم ، وخاصة الجهاز التنفسي والأمعاء والجهاز البولي التناسلي. يعمل IgA كطبقة واقية للأسطح المخاطية ضد الالتصاق الميكروبي أو الاستعمار الأولي. يمكن لـ IgA أيضًا تحييد نشاط السموم على الأسطح المخاطية. تشير مستقبلات Fc للكائنات الدقيقة المغلفة بالـ IgA الموجودة في الخلايا الوحيدة والعدلات المشتقة من الغشاء المخاطي للجهاز التنفسي ، إلى أن IgA قد يكون له دور في الرئة ، على الأقل ، في طمس مسببات الأمراض.

ينتقل إفراز الغلوبولين المناعي A أيضًا عن طريق الحليب ، أي اللبأ ، من الأم المرضعة إلى المولود الجديد ، مما يوفر مناعة سلبية للعديد من مسببات الأمراض ، خاصة تلك التي تدخل عن طريق الجهاز الهضمي. يستمر نقل IgA عن طريق الحليب حوالي ستة أشهر في المرأة ويواجه الرضيع العديد من العوامل المعدية بينما يكون بالتالي محميًا جزئيًا. في ظل هذه الظروف ، قد يتكاثر العامل المعدي ، ولكن إلى حد محدود فقط ، يحفز الاستجابة المناعية للرضيع دون التسبب في مرض كبير (مثل فيروس شلل الأطفال). وبالتالي يكتسب الرضيع مناعة نشطة بينما يحميها جزئيًا مناعة الأم.

IgE هو 190kd غلوبولين مناعي يمثل 0.002٪ من إجمالي الغلوبولين المناعي في الدم. يتم إنتاجه بشكل خاص عن طريق خلايا البلازما أسفل ظهارة الجهاز التنفسي والأمعاء. ترتبط غالبية IgE بخلايا الأنسجة ، وخاصة الخلايا البدينة. إذا نجح عامل معدي في اختراق حاجز IgA ، فإنه يصطدم بخط الدفاع التالي ، وهو نظام MALT (الأنسجة اللمفاوية المرتبطة بالغشاء المخاطي) الذي يديره IgE. يرتبط IgE بشدة بمستقبلات Fc (خاصة لـ IgE) على الخلايا البدينة. يؤدي التلامس مع Ag إلى إطلاق وسطاء الالتهاب من الخلايا البدينة ، والتي تجند بشكل فعال عوامل مختلفة للاستجابة المناعية بما في ذلك العوامل التكميلية والكيميائية للبالعات والخلايا التائية وما إلى ذلك. على الرغم من أن أحد المظاهر المعروفة لهذا التفاعل هو نوع من فرط الحساسية الفوريةرد فعل يسمى الحساسية التأتبية (مثل خلايا النحل والربو وحمى القش وما إلى ذلك) ، تعمل استجابات MALT كآلية دفاعية لأنها تضخم الاستجابة الالتهابية وقد تسهل رفض العامل الممرض.

IgD هو جزيء 175 كيلو دالتون يشبه IgG في شكله الأحادي. تم العثور على الأجسام المضادة IgD في معظمها على أسطح الخلايا الليمفاوية B. قد تحمل نفس الخلايا أيضًا الجسم المضاد IgM. يُعتقد أن IgD و IgM يعملان كمستقبلات مستضد متفاعلة بشكل متبادل للتحكم في تنشيط الخلايا البائية وقمعها. وبالتالي ، قد يكون لـ IgD وظيفة تنظيم المناعة. تذكر أن النسائل الفرعية المحددة فقط من الخلايا البائية تستجيب لـ Ag معين عند التحفيز. يجب أن تعرض النسخة الفرعية المحددة للخلايا B مستقبلات الجسم المضاد التي تتعرف على Ag على وجه التحديد. من المنطقي أن أساس هذه الخصوصية يشتمل على مستقبلات الخلايا البائية التي لها نوع من الخصوصية المميزة لجزيئات الجسم المضاد.

وظائف الأجسام المضادة في الدفاع المضيف

فيما يلي تلخيص لوظائف الأجسام المضادة ، وبالتالي استجابة AMI ، في دفاع المضيف ضد الميكروبات المسببة للأمراض.

Opsonization : الأجسام المضادة تعزز الابتلاع البلعمي للمستضدات الميكروبية. يحتوي IgG و IgM Abs على موقع يجمع بين Ag وموقع للارتباط الخلوي بالبلعم. يتم تناول البكتيريا والجسيمات الفيروسية بكفاءة متزايدة.

عائق الفراغية : تتحد الأجسام المضادة مع أسطح الكائنات الحية الدقيقة وقد تمنع أو تمنع ارتباطها بالخلايا الحساسة أو الأسطح المخاطية. يمكن لعقار AB ضد المكون الفيروسي منع ارتباط الفيروس بالخلايا المضيفة الحساسة وبالتالي تقليل العدوى. يمكن أن يمنع إفراز IgA ارتباط مسببات الأمراض بالأسطح المخاطية.

تحييد السموم : تتفاعل الأجسام المضادة المعادلة للسموم (مضادات السموم) مع سم بكتيري قابل للذوبان وتمنع تفاعل السم مع الخلية المستهدفة المحددة أو الركيزة.

التراص والهطول : تتحد الأجسام المضادة مع أسطح الكائنات الحية الدقيقة أو المستضدات القابلة للذوبان وتتسبب في تراصها أو ترسيبها. هذا يقلل من عدد الوحدات المعدية المنفصلة ويجعلها أكثر سهولة بالبلعمة لأن كتلة الجزيئات أكبر في الحجم. أيضًا ، يمكن إزالة الندف أو تجمعات السموم المتعادلة بواسطة الخلايا البلعمية.

تفعيل المكمل : تعمل الأجسام المضادة جنبًا إلى جنب مع سطح الكائنات الحية الدقيقة أو أسطح Ag على تنشيط السلسلة التكميلية التي لها أربعة تأثيرات رئيسية تتعلق بدفاع المضيف

1. تحريض الاستجابة الالتهابية

2. جذب البالعات إلى موقع المواجهة المناعية

3. طمس الخلايا الأجنبية تظهر Ag

4. تحلل مكمل بوساطة لبكتيريا أو فيروسات معينة

السمية الخلوية المعتمدة على الجسم المضاد (ADCC) : يمكن لـ IgG تمكين خلايا معينة (الخلايا القاتلة الطبيعية) من التعرف على الخلايا المستهدفة غير المؤمنة وقتلها. الخلايا القاتلة الطبيعية هي خلايا ليمفاوية أو وحيدات ، لكن أنواعًا أخرى من الخلايا بما في ذلك العدلات تعمل أيضًا بهذه الطريقة. ترتبط الخلايا القاتلة الطبيعية بالخلايا المستهدفة غير المؤمنة عن طريق مستقبلات IgG Fc وتقتل بآلية خارج الخلية بعد التعلق.ستتم مناقشة ADCC كجزء من المناعة الخلوية.


الأغشية المخاطية

تبطن الأغشية المخاطية تجاويف الجسم التي تنفتح إلى الخارج ، مثل الجهاز التنفسي والجهاز الهضمي والجهاز البولي التناسلي. تتكون الأغشية المخاطية من طبقة طلائية تفرز المخاط وطبقة من النسيج الضام. المخاط عبارة عن حاجز مادي يحبس الميكروبات. يحتوي المخاط أيضًا على الليزوزيم الذي يعمل على تحلل الببتيدوغليكان البكتيري ، وهو جسم مضاد يسمى إفراز IgA يمنع الميكروبات من الالتصاق بالخلايا المخاطية ويحبسها في المخاط ، ولاكتوفيرين لربط الحديد ومنع استخدامه من قبل الميكروبات ، ولاكتوبيروكسيداز لتوليد جزيئات الأكسيد الفائق السامة. التي تقتل الميكروبات. كما تثبط الجراثيم الطبيعية الموجودة في الغشاء المخاطي الميكروبات التي يحتمل أن تكون ضارة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الغشاء المخاطي ، مثل الجلد ، يعمل باستمرار على تقشير الخلايا لإزالة الميكروبات التي تعلق على الأغشية المخاطية. يوجد تحت الغشاء المخاطي الأنسجة اللمفاوية المرتبطة بالغشاء المخاطي (MALT) التي تحتوي على خلايا لانجرهانز - الخلايا المتغصنة غير الناضجة - التي تقوم بالبلعمة وتقتل الميكروبات ، وتحملها إلى العقد الليمفاوية القريبة ، وتقدم مستضدات هذه الميكروبات إلى الخلايا اللمفاوية التائية لبدء المناعة التكيفية الردود ضدهم. ترتبط الخلايا الليمفاوية التائية داخل الظهارة والخلايا الليمفاوية B-1 بالبشرة والظهارة المخاطية. تتعرف هذه الخلايا على الميكروبات الشائعة في البشرة والأغشية المخاطية وتبدأ استجابات مناعية تكيفية فورية ضد هذه الميكروبات الشائعة.


مراجع

نودلر ، إل إيه ، سيلي ، جيه آند فينلي ، بي بي الخداع الممرض: خداع عمليات الخلية المضيفة. القس الطبيعة مول. خلية بيول. 2, 578–588 (2001).

Hornef، M.W، Wick، M. J.، Rhen، M. & amp Normark، S. طبيعة إمونول. 3, 1033–1040 (2002).

هيوم ، دي إيه وآخرون. إعادة النظر في نظام البلعمة أحادي النواة. J. ليوكوك. بيول. 72, 621–627 (2002).

Gregory، S.H & amp Wing، E.J. Neutrophil-Kupffer التفاعل الخلوي: عنصر حاسم في دفاعات المضيف للعدوى البكتيرية الجهازية. J. ليوكوك. بيول. 72, 239–248 (2002).

Palucka، K. & amp Banchereau، J. كيف تتفاعل الخلايا المتغصنة والميكروبات لاستنباط الاستجابات المناعية الوقائية أو تخريبها. بالعملة. رأي. إمونول. 14, 420–431 (2002).

Ruckdeschel، K. et al. يرسينيا القولون يضعف تنشيط عامل النسخ NF-B: المشاركة في تحريض موت الخلايا المبرمج وفي قمع إنتاج عامل نخر ورم البلاعم- α. J. إكسب. ميد. 187, 1069–1079 (1998).

جالان ، ج. السالمونيلا التفاعلات مع الخلايا المضيفة: النوع الثالث إفراز في العمل. Annu. القس الخلية ديف. بيول. 17, 53–86 (2001).

Barton، G.M & amp Medzhitov، R. مستقبلات شبيهة بالرسائل وروابطها. بالعملة. قمة. ميكروبيول. إمونول. 270, 81–92 (2002).

Underhill، D.M & amp Ozinsky، A. مستقبلات شبيهة بالرصد: الوسطاء الرئيسيون لاكتشاف الميكروبات. بالعملة. رأي. إمونول. 14, 103–110 (2002).

أوزينسكي ، إيه وآخرون. يتم تحديد مرجع التعرف على أنماط مسببات الأمراض من قبل الجهاز المناعي الفطري من خلال التعاون بين المستقبلات الشبيهة بالحصيلة. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 97, 13766–13771 (2000).

Janeway، C.A Jr & amp Medzhitov، R. Inate immunity. التعرف على المناعة. Annu. القس إمونول. 20, 197–216 (2002).

Rosenberger ، C.M ، Scott ، M.G ، Gold ، M. R. ، Hancock ، R.E & amp Finlay ، B. B. السالمونيلا تيفيموريوم تحفز العدوى وعديد السكاريد الدهني تغييرات مماثلة في التعبير الجيني للبلاعم. J. إمونول. 164, 5894–904 (2000).

ناو ، جي جي وآخرون. برامج تنشيط البلاعم البشرية التي تسببها مسببات الأمراض البكتيرية. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 99, 1503–1508 (2002).

بولدريك ، جيه سي وآخرون. برامج التعبير الجيني النمطية والمحددة في الاستجابات المناعية الفطرية للإنسان للبكتيريا. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 99, 972–977 (2002).

سويت ، إم جيه وآخرون. يقوم العامل -1 المحفز للمستعمرة بقمع الاستجابات للحمض النووي CpG والتعبير عن المستقبلات الشبيهة بالحصيلة 9 ولكنه يعزز الاستجابات لعديد السكاريد الشحمي في البلاعم الفأرية. J. إمونول. 168, 392–399 (2002).

فيتزجيرالد ، ك. إيه وآخرون. مطلوب Mal (MyD88-adaptor-like) لنقل إشارة مستقبلات تشبه Toll-4. طبيعة سجية 413, 78–83 (2001).

Horng، T.، Barton، G.M & amp Medzhitov، R. TIRAP: جزيء محول في مسار إشارات Toll. طبيعة إمونول. 2, 835–841 (2001).

O'Neill، L. A. نقل إشارة مستقبلات شبيهة بالتول وتصميم المناعة الفطرية: دور لمال؟ اتجاهات إمونول. 23, 383–384 (2002).

أحمد نجاد ، ب. وآخرون. يعمل الحمض النووي البكتيري CpG-DNA والسكريات الدهنية على تنشيط مستقبلات تشبه Toll في الأجزاء الخلوية المتميزة. يورو. J. إمونول. 32, 1958–1968 (2002).

أندرهيل ، دي إم وآخرون. يتم تجنيد المستقبل الشبيه بـ Toll 2 في البلاعم البلعمية ويميز بين مسببات الأمراض. طبيعة سجية 401, 811–815 (1999). هذه الورقة هي أول تقرير يوضح أن TLRs يمكنها المرور إلى البلعمة.

Ernst، R. K.، Guina، T. & amp Miller، S. I. السالمونيلا تيفيموريوم إعادة تشكيل الغشاء الخارجي: دور في مقاومة المناعة الفطرية للمضيف. الميكروبات تصيب. 3, 1327–1334 (2001).

Hajjar، A.M، Ernst، R.K، Tsai، J.H، Wilson، C.B & amp Miller، S. I. يتعرف مستقبل Human Toll-like 4 على تعديلات LPS الخاصة بالمضيف. طبيعة إمونول. 3, 354–359 (2002).

سينغ ، إيه وآخرون. يرسينيا يستغل المستضد V مستقبلات تشبه الرسوم 2 و CD14 لتثبيط المناعة بوساطة إنترلوكين 10. J. إكسب. ميد. 196, 1017–1024 (2002).

Sing ، A. ، Roggenkamp ، A. ، Geiger ، A. M. & amp Heesemann ، J. يرسينيا القولون تم إلغاء تجنب الاستجابة المناعية الفطرية للمضيف بواسطة إنتاج IL-10 الناجم عن مستضد V من الضامة في الفئران التي تعاني من نقص IL-10. J. إمونول. 168, 1315–1321 (2002).

Geijtenbeek ، T.B et al. تستهدف Mycobacteria DC-SIGN لقمع وظيفة الخلية التغصنية. J. إكسب. ميد. 197, 7–17 (2003). تصف المراجع 23-25 ​​آليات جديدة لتخريب الإشارات بوساطة TLR بواسطة المكونات البكتيرية.

Dramsi، S. & amp Cossart، P. Listeriolysin O: سيتوليسين أصلي محسّن لطفيل داخل الخلايا. J. خلية بيول. 156, 943–946 (2002).

O'Riordan، M.، Yi، C.H، Gonzales، R.، Lee، K.D & amp Portnoy، D.A التعرف الفطري على البكتيريا عن طريق مسار ترصد الخلايا الضامة. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 99, 13861–13866 (2002).

إينوهارا ، ن. وآخرون. التعرف على المضيف من ثنائي ببتيد الموراميل البكتيري بوساطة NOD2. الآثار المترتبة على مرض كرون. J. بيول. تشيم. 278, 5509–5512 (2003).

جيراردين ، إس إي وآخرون. يتوسط CARD4 / Nod1 تنشيط NF-κB و JNK عن طريق الغازية شيغيلا فلكسنري. ممثل EMBO. 2, 736–742 (2001).

أندرهيل ، دي إم وأمبير أوزنسكي ، أ. البلعمة من الميكروبات: التعقيد في العمل. Annu. القس إمونول. 20, 825–852 (2002).

Garcia-Garcia، E. & amp Rosales، C. نقل الإشارة أثناء البلعمة بوساطة مستقبلات Fc. J. ليوكوك. بيول. 72, 1092–1108 (2002).

Sansonetti ، P. البلعمة من مسببات الأمراض البكتيرية: الآثار المترتبة على استجابة المضيف. سيمين. إمونول. 13, 381–390 (2001).

Celli، J. & amp Finlay، B. B. التجنب البكتيري للبلعمة. اتجاهات ميكروبيول. 10, 232–237 (2002).

إرنست ، ج.د. التثبيط البكتيري للبلعمة. ميكروبيول الخلية. 2, 379–386 (2000).

Shao، F.، Merritt، P. M.، Bao، Z.، Innes، R.W & amp Dixon، J. E. A يرسينيا المستجيب وأ الزائفة يحدد بروتين الفوعة عائلة من بروتينات السيستين التي تعمل في التسبب البكتيري. زنزانة 109, 575–588 (2002).

شاو ، إف وآخرون. توصيف الكيمياء الحيوية يرسينيا إنزيم YopT: موقع الانقسام وعناصر التعرف في Rho GTPases. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 100, 904–909 (2003). جنبا إلى جنب مع المرجع 35 ، يحدد هؤلاء المؤلفون النشاط وخصوصية الركيزة لـ يرسينيا الأنزيم البروتيني YopT.

كورنيليس ، جي آر يرسينيا YSC – Yop "النوع الثالث". القس الطبيعة مول. خلية بيول. 3, 742–752 (2002).

سيلي ، ج. ، أوليفر ، إم آند فينلي ، بي بي الإشريكية القولونية يتوسط مضاد البلعمة من خلال تثبيط المسارات المعتمدة على PI 3-kinase. EMBO J. 20, 1245–1258 (2001).

Wurzner، R. تجنب مسببات الأمراض عن طريق تجنب التعرف عليها أو استئصالها عن طريق التكميل ، جزئيًا عن طريق التقليد الجزيئي. مول. إمونول. 36, 249–260 (1999).

Simons، K. & amp Ehehalt، R. Cholesterol، lipid rafts، and disease. J. كلين. استثمار. 110, 597–603 (2002).

Duncan ، M. J. ، Shin ، J. S. & amp Abraham ، S.N. دخول ميكروبي من خلال caveolae: اختلافات حول موضوع. زنزانة. ميكروبيول. 4, 783–791 (2002).

Rosenberger، C.M، Brumell، J.H & amp Finlay، B. B. بالعملة. بيول. 10، R823-R825 (2000).

بورتو ، دي إم وآخرون. يعتمد بقاء البكتيريا المعوية التي تعبر عن FimH في البلاعم على حركة مرور الجليكوليبيد. طبيعة سجية 389, 636–639 (1997).

هيلويج ، إس إم وآخرون. استهداف مستقبلات Fcγ ، ولكن ليس CR3 (CD11b / CD18) ، يزيد من تخليص البورديتيلة السعال الديكي. J. تصيب. ديس. 183, 871–879 (2001).

Caron، E. & amp Hall، A. تحديد آليتين متميزتين للبلعمة التي يتحكم فيها Rho GTPases المختلفة. علم 282, 1717–1721 (1998).

عامر ، A. O. & amp Swanson ، M. S. جسيم خاص بالفرد: دليل ميكروبي للحياة في البلاعم. بالعملة. رأي. ميكروبيول. 5, 56–61 (2002).

Roy، C. R. استغلال الشبكة الإندوبلازمية بواسطة مسببات الأمراض البكتيرية. اتجاهات ميكروبيول. 10, 418–424 (2002).

Meresse، S. et al. السيطرة على نضج الفجوات المحتوية على العوامل الممرضة: مسألة حياة أو موت. خلية الطبيعة بيول. 1، E183 – E188 (1999).

سوانسون ، إم إس ، وفرنانديز-مورييا ، إي. إستراتيجية ميكروبية للتكاثر في البلاعم: توقف الحمل. مرور 3, 170–177 (2002).

Nagai، H.، Kagan، J.C، Zhu، X.، Kahn، R.A & amp Roy، C.R. عامل تبادل نيوكليوتيد الجوانين البكتيري ينشط ARF على الليجيونيلا البلعمة. علم 295, 679–682 (2002).

كاجان ، جيه سي & أمبير روي ، سي آر. الليجيونيلا البلعمة تعترض المرور الحويصلي من مواقع خروج الشبكة الإندوبلازمية. خلية الطبيعة بيول. 4, 945–954 (2002). المراجع 50 و 51 تصف كيف يتم تغيير الاتجار البلعومي الليجيونيلا بروتينات الفوعة وينتج عنها مقصورة فريدة داخل الخلايا تسمح بتكاثر البكتيريا.

رويز ألبرت ، جيه وآخرون. الأنشطة التكميلية لـ SseJ و SifA تنظم ديناميكيات السالمونيلا تيفيموريوم غشاء فجوي. مول. ميكروبيول. 44, 645–661 (2002).

Ferrari ، G. ، Langen ، H. ، Naito ، M. & amp Pieters ، J. بروتين غلاف على فاجوسومات يشارك في بقاء البكتيريا الفطرية داخل الخلايا. زنزانة 97, 435–447 (1999).

Sturgill-Koszycki، S. et al. عدم وجود تحمض في المتفطرة تنتج البلعمة عن طريق استبعاد البروتين الحويصلي ATPase. علم 263, 678–681 (1994).

راسل ، د. السل الفطري: هنا اليوم وهنا غدًا. القس الطبيعة مول. خلية بيول. 2, 569–577 (2001).

Fratti ، R. A. ، Backer ، J. M. ، Gruenberg ، J. ، Corvera ، S. & amp Deretic ، V. J. خلية بيول. 154, 631–644 (2001). يحدد المؤلفون المرحلة المنفصلة من الاتجار البلعومي الذي يتدخل فيه مرض السل جليكوليبيد مانلام.

فاسكيز توريس ، إيه وآخرون. السالمونيلا جزيرة الإمراضية 2 المعتمد على التهرب من البلعمة NADPH أوكسيديز. علم 287, 1655–1658 (2000).

Gallois، A.، Klein، J.R، Allen، L.A، Jones، B. D. & amp Nauseef، W. M. السالمونيلا يتوسط نظام إفراز النوع الثالث المشفر لجزيرة الإمراضية في استبعاد مجموعة أوكسيديز NADPH من الغشاء البلعمي. J. إمونول. 166, 5741–5748 (2001).

شاكرافورتي ، دي ، هانسن ويستر ، آي & أمبير هينسل ، إم. السالمونيلا جزيرة الإمراضية 2 تتوسط حماية الخلايا داخل الخلايا السالمونيلا من النيتروجين الوسيط التفاعلي. J. إكسب. ميد. 195, 1155–1166 (2002). المراجع 57-59 تحدد آلية جديدة تعتمد على عامل الفوعة ل السالمونيلا البقاء على قيد الحياة داخل البلاعم: تحويل الأنزيمات المسؤولة عن الانفجارات المؤكسدة والنتروجينية.

إيرت ، إس وآخرون. إعادة برمجة نسخة البلاعم استجابةً للإنترفيرون γ و السل الفطري: تأشير أدوار سينثاس أكسيد النيتريك -2 وأكسيداز البلعمة. J. إكسب. ميد. 194, 1123–1140 (2001). يستخدم المؤلفون التنميط الجيني لتحديد مساهمات IFN-والأكسجين التفاعلي وأنواع النيتروجين في تشكيل استجابات البلاعم لـ مرض السل.

جوبيرت ، أ ب وآخرون. هيليكوباكتر بيلوري أرجيناز يثبط إنتاج أكسيد النيتريك بواسطة الخلايا حقيقية النواة: استراتيجية للبقاء البكتيري. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 98, 13844–13849 (2001).

شيسر ، ك وآخرون. ال yopJ locus مطلوب ل يرسينياتثبيط بوساطة لتنشيط NF-B والتعبير الخلوي: يحتوي YopJ على مجال حقيقي النواة يشبه SH2 وهو أمر ضروري لنشاطه القمعي. مول. ميكروبيول. 28, 1067–1079 (1998).

أورث ، ك وآخرون. تعطيل الإشارات بواسطة يرسينيا المستجيب YopJ ، بروتياز البروتين الشبيه باليوبيكويتين. علم 290, 1594–1597 (2000). جنبا إلى جنب مع المرجع 72 ، يحدد هؤلاء المؤلفون ويصفون آلية عمل يرسينيا بروتين الفوعة المسؤول عن ضعف إشارات MAPK.

باهليفان ، إيه إيه وآخرون. العمل المثبط لـ قرحة المتفطرة عامل قابل للذوبان في إنتاج السيتوكينات في الخلية الوحيدة / التائية ووظيفة NF-B. J. إمونول. 163, 3928–3935 (1999).

كايال ، إس وآخرون. يفرز Listeriolysin O الليسترية المستوحدة يستحث إشارات NF-B عن طريق تنشيط مجمع IκB كيناز. مول. ميكروبيول. 44, 1407–1419 (2002).

Mansell، A.، Braun، L.، Cossart، P. & amp O'Neill، L. A. وظيفة جديدة لـ InIB من الليسترية المستوحدة: تفعيل NF-B في الضامة J774. زنزانة. ميكروبيول. 2, 127–136 (2000).

Rao، K. M. MAP تنشيط كيناز في الضامة. J. ليوكوك. بيول. 69, 3–10 (2001).

فاليدور ، أ.ف ، كومالادا ، إم ، زاوس ، ج. & أمبير سيلادا ، أ. يرتبط المسار الزمني التفاضلي لنشاط كيناز الخاضع للتنظيم خارج الخلية باستجابة البلاعم نحو الانتشار أو التنشيط. J. بيول. تشيم. 275, 7403–7409 (2000).

Rosenberger، C. M. & amp Finlay، B. B. macrophages تمنع السالمونيلا تيفيموريوم النسخ المتماثل من خلال أنشطة MEK / ERK كيناز والبلعمة NADPH أوكسيديز. J. بيول. تشيم. 277, 18753–18762 (2002).

Abrami، L.، Liu، S.، Cosson، P.، Leppla، S.H & amp van der Goot، F.G. J. خلية بيول. 160, 321–328 (2003). يميز هذا المرجع الآلية المعتمدة على الطوافة الدهنية لدخول سم الجمرة الخبيثة إلى الخلايا

Park، J.M، Greten، F. R.، Li، Z.W & amp Karin، M. علم 297, 2048–2051 (2002). يصف المرجع 71 كيف تعمل إحدى الوحدات الفرعية لتوكسين الجمرة الخبيثة ، وهي العامل المميت ، على تقويض إشارات البلاعم عن طريق شق كيناز MAPK.

أورث ، ك وآخرون. تثبيط فصيلة بروتين كيناز كيناز الذي ينشط ميتوجين بواسطة أ يرسينيا المستجيب. علم 285, 1920–1923 (1999).

Darnell ، J.E Jr. ، Kerr ، I. M. & amp Stark ، G.R. علم 264, 1415–1421 (1994).

Decker ، T. ، Stockinger ، S. ، Karaghiosoff ، M. ، Muller ، M. & amp Kovarik ، P. IFNs و STATs في المناعة الفطرية للكائنات الحية الدقيقة. J. كلين. استثمار. 109, 1271–1277 (2002).

Boehm، U.، Klamp، T.، Groot، M. & amp Howard، J.Cellular response to interferon-. Annu. القس إمونول. 15, 749–795 (1997).

Shtrichman، R. & amp Samuel، C.E. دور انترفيرون بيتا في المناعة المضادة للميكروبات. بالعملة. رأي. ميكروبيول. 4, 251–259 (2001).

Tsang ، A. W. ، Oestergaard ، K. ، Myers ، J. T. & amp Swanson ، J. A. تغيير تهريب الغشاء في الضامة المشتقة من نخاع العظم المنشط. J. ليوكوك. بيول. 68, 487–494 (2000).

Adams، D. O. & amp Hamilton، T. A. بيولوجيا الخلية لتنشيط البلاعم. Annu. القس إمونول. 2, 283–318 (1984).

فلين ، جيه. ل. وآخرون. دور أساسي للإنترفيرون γ في مقاومة السل الفطري عدوى. J. إكسب. ميد. 178, 2249–2254 (1993).

هوانغ ، إس وآخرون. الاستجابة المناعية في الفئران التي تفتقر إلى مستقبلات إنترفيرون بيتا. علم 259, 1742–1745 (1993).

حسين، S.، Zwilling، B. S. & amp Lafuse، W. P. المتفطرة الطيرية عدوى البلاعم الفأرية تمنع إشارات IFN-Janus kinase-STAT وتحريض الجين عن طريق التنظيم السفلي لمستقبل IFN-. J. إمونول. 163, 2041–2048 (1999).

تينج ، إل إم ، كيم ، إيه سي ، كاتامانشي ، إيه & أمبير إرنست ، جيه دي. السل الفطري يمنع استجابات النسخ IFN-دون تثبيط تنشيط STAT1. J. إمونول. 163, 3898–3906 (1999).

كوباياشي ك وآخرون. IRAK-M هو منظم سلبي لإشارات مستقبلات تشبه Toll. زنزانة 110, 191–202 (2002).

ويلسون ، إم ، سيمور ، آر أند هندرسون ، ب.الاضطراب البكتيري لشبكات السيتوكين. تصيب. مناعة. 66, 2401–2409 (1998).

هيرش ، د. وآخرون. ال السالمونيلا الغازي SipB يحرض موت الخلايا المبرمج للبلاعم عن طريق الارتباط بـ caspase-1. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 96, 2396–2401 (1999).

موناك ، دي إم وآخرون. السالمونيلا يستغل caspase-1 لاستعمار بقع Peyer في نموذج التيفود الفئران. J. إكسب. ميد. 192, 249–258 (2000).

سانسونيتي ، ب.جيه وآخرون. تنشيط Caspase-1 لـ IL-1β و IL-18 ضروريان شيغيلا فلكسنري- الالتهاب الناجم. حصانة 12, 581–590 (2000).

Weinrauch، Y. & amp Zychlinsky، A. تحريض موت الخلايا المبرمج بواسطة مسببات الأمراض البكتيرية. Annu. القس ميكروبيول. 53, 155–187 (1999).

Mosser، D. M. & amp Karp، C. L. مستقبلات تخريب بوساطة إنتاج السيتوكينات الضامة بواسطة مسببات الأمراض داخل الخلايا. بالعملة. رأي. إمونول. 11, 406–411 (1999).

Redpath، S.، Ghazal، P. & amp Gascoigne، N.R. اختطاف واستغلال IL-10 بواسطة مسببات الأمراض داخل الخلايا. اتجاهات ميكروبيول. 9, 86–92 (2001).

Yrlid، U. & amp Wick، M. J. السالمونيلاينتج عن موت الخلايا المبرمج الناتج عن الضامة المصابة ظهور مستضد مشفر بالبكتيريا بعد امتصاصه من قبل الخلايا المتغصنة المارة. J. إكسب. ميد. 191, 613–624 (2000).

بويز ، إل.إتش & أمبير كولينز ، سي م. السالمونيلا- موت الخلايا المستحث: موت الخلايا المبرمج أم النخر أم موت الخلية المبرمج؟ اتجاهات ميكروبيول. 9, 64–67 (2001).

Maksymowych ، W. P. & amp Kane ، K. P. التعديل البكتيري لمعالجة وعرض المستضد. الميكروبات تصيب. 2, 199–211 (2000).

Hmama، Z.، Gabathuler، R.، Jefferies، W. A.، de Jong، G. & amp Reiner، N.E. توهين تعبير HLA-DR بواسطة البالعات أحادية النواة المصابة بـ السل الفطري يرتبط بالعزل داخل الخلايا لمغاير غير متجانسة من الدرجة الثانية. J. إمونول. 161, 4882–4893 (1998).

جياكوميني ، إي وآخرون. إصابة الضامة البشرية والخلايا التغصنية السل الفطري يحث على التعبير الجيني السيتوكيني التفاضلي الذي يعدل استجابة الخلايا التائية. J. إمونول. 166, 7033–7041 (2001).

VanHeyningen، T. K.، Collins، H. L. & amp Russell، D.G IL-6 التي تنتجها البلاعم المصابة بـ المتفطرة الأنواع يقمع استجابات الخلايا التائية. J. إمونول. 158, 330–337 (1997).

أولريش ، إتش جي ، بيتي ، دبليو إل وأمبير راسل ، دي جي تفاعل المتفطرة الطيرية- تحتوي على فاجوسومات مع مسار عرض المستضد. J. إمونول. 165, 6073–6080 (2000).

راماتشاندرا ، L. ، Noss ، E. ، Boom ، W. H. & amp Harding ، C. V. السل الفطري مستضد 85B ينطوي على تكوين داخل البلعوم لمجمعات الببتيد - التوافق النسيجي الرئيسي II ويتم تثبيطه بواسطة العصيات الحية التي تقلل من نضج البلعمة. J. إكسب. ميد. 194, 1421–1432 (2001).

فوريستير ، سي ، ديلويل ، إف ، لاباك ، إن ، مورينو ، إي آند غورفيل ، جي بي. البروسيلا أبورتس يعمل عديد السكاريد الشحمي في الضامة البريتونية الفئران كمنظم سفلي لتنشيط الخلايا التائية. J. إمونول. 165, 5202–5210 (2000).

Zhong، G.، Fan، T. & amp Liu، L. الكلاميديا يثبط تعبير مركب التوافق النسيجي الرئيسي الذي يحفزه مضاد للفيروسات من الدرجة الثانية عن طريق تدهور عامل التحفيز المنبع 1. J. إكسب. ميد. 189, 1931–1938 (1999).

Zhong ، G. ، Liu ، L. ، Fan ، T. ، Fan ، P. & amp Ji ، H. تدهور عامل النسخ RFX5 أثناء تثبيط كل من تعبير التوافق النسيجي الرئيسي المؤسس و interferon-inducible من الدرجة الأولى في الكلاميديا- الخلايا المصابة. J. إكسب. ميد. 191, 1525–1534 (2000).

جيندرو ، إم سي وآخرون. الإصابة بالعدوى الضامة المشتقة من الوحيدات البشرية بـ المتدثرة الحثرية يحث على موت الخلايا المبرمج للخلايا التائية: آلية محتملة للعدوى المستمرة. تصيب. مناعة. 68, 6704–6711 (2000).

شنير ، إم وآخرون. تتحكم المستقبلات الشبيهة بالرصد في تنشيط الاستجابات المناعية التكيفية. طبيعة إمونول. 2, 947–950 (2001).

Pasare، C. & amp Medzhitov، R.الحصار المعتمد على المسار الحصري للقمع الذي تتوسطه الخلايا التائية CD4 + CD25 + T بواسطة الخلايا المتغصنة. علم 299, 1033–1036 (2003). يصف آلية لقدرة التعرف الفطري على المنتجات البكتيرية للتأثير على المناعة التكيفية.

فليمنج ، إس دي وأمبير كامبل ، بي.أ. بعض الضامة تقتل الليسترية المستوحدة بينما البعض الآخر لا. إمونول. القس. 158, 69–77 (1997).

رافاسي ، ت. وآخرون. توليد التنوع في الجهاز المناعي الفطري: ينشأ عدم تجانس البلاعم من احتمالية نسخ الجينات المستقلة للجينات الفردية. J. إمونول. 168, 44–50 (2002).

Wijburg، O.L، Simmons، C. P.، van Rooijen، N. & amp Strugnell، R. A. في الجسم الحي في التسبب والسيطرة على الفئران السالمونيلا المعوية فار. التيفيموريوم الالتهابات. يورو. J. إمونول. 30, 944–953 (2000).

Miller ، M.J ، Wei ، S.H ، Parker ، I. & amp Cahalan ، M.D. تصوير ثنائي الفوتون لحركة الخلايا الليمفاوية واستجابة المستضد في العقدة الليمفاوية السليمة. علم 296, 1869–1873 (2002).

Stoll، S.، Delon، J.، Brotz، T.M & amp Germain، R.N. علم 296, 1873–1876 (2002).


هل يتم اختيار المستضدات الميكروبية ضد؟ - مادة الاحياء

لقاحات نوفارتيس ، مركز الأبحاث ، طريق فيورنتينا 1 ، 53100 سيينا ، إيطاليا
بريد الالكتروني: [email protected]

الملخص

الكربوهيدرات ، على شكل سكريات قليلة السكاريد ، وعديدات السكاريد ، وعديدات السكاريد الدهنية ، هي مكونات موجودة في كل مكان من سطح الخلية للبكتيريا. أثبتت اللقاحات القائمة على عديد السكاريد في الثلاثين عامًا الماضية أنها آمنة للغاية وفعالة ضد الالتهابات البكتيرية مثل التهاب السحايا والالتهاب الرئوي. ظهرت أجهزة تحليل رنين البلازمون السطحي (SPR) كأدوات قوية لتوصيف التفاعلات الجزيئية الحيوية الخالية من الملصقات ، مما يتيح مراقبة ديناميكيات التكوين والتفكك المعقد في الوقت الفعلي. تتوفر حاليًا مجموعة متنوعة من شرائح المستشعر للعديد من التطبيقات. ومع ذلك ، يمكن أن تكون المستشعرات الحيوية ذات الوظائف المحبة للنواة ، مثل المجموعات الأمينية ، مفيدة لتوسيع نطاق تطبيق SPR. باستخدام الأمثلة المختارة ، تعطي هذه المراجعة نظرة عامة على التطبيقات الهامة للتدفق التقليدي SPR للتحقيق في التفاعلات المحددة لمستضدات السكاريد البكتيرية. لقد أحرز SPR تقدمًا كبيرًا في العقدين الماضيين وأصبحت الآن تقنية ذات صلة لتطوير فحوصات مناعية للتوصيف المتعمق لمستضدات الكربوهيدرات.


15 بديلاً للمضادات الحيوية ضد العدوى الميكروبية:

مصل:

توفر أدوات تعديل المناعة فعالية قوية ضد الأمراض الجرثومية عن طريق تحفيز الاستجابة المناعية وتعزيزها. تشمل أدوات تعديل المناعة اللقاحات والعوامل الصيدلانية المختلفة ، من بينها اللقاح هو أهم جهاز مناعي.

اللقاح هو معلق للكائنات الحية الدقيقة المقتولة أو الكائنات الحية الدقيقة الموهنة الحية أو الكائنات الحية الخبيثة بالكامل أو أجزاء من الكائنات الحية الدقيقة التي يتم إعطاؤها لإنتاج أو زيادة المناعة بشكل مصطنع لمرض معين. تشمل اللقاحات اللقاح الحي الموهن ، اللقاح الميت ، لقاح الوحيدات الفيروسية ، لقاحات الحمض النووي ، واللقاح المترافق.

اللقاح الحي الموهن هو تحضير بكتيريا أو فيروسات أو عوامل أخرى حية ولكنها موهنة (ضعيفة). عندما يتم تناولها بالطريقة المناسبة لجسم الإنسان ، فإنها تسبب عدوى تحت الإكلينيكية أو خفيفة وبالتالي تحفز الاستجابة المناعية ضد هذه العدوى.

توفر هذه اللقاحات مناعة للجسم مدى الحياة. يتضمن المثال لقاح شلل الأطفال سابين ضد الحصبة والنكاف والحصبة الألمانية (MMR) ضد BCG المتفطرة البقريّة.

اللقاح المقتول هو تحضير ميكروبات مقتولة بالكامل بالفينول أو الفورمالديهايد أو بالحرارة. لا توفر هذه اللقاحات مناعة للجسم مدى الحياة حيث لا يمكن تكرار جينومها لأنها ميتة. مثال لقاح شلل الأطفال ، لقاح داء الكلب ، لقاح الأنفلونزا.

لقاحات الذيفانات هي تحضير سموم معطلة تنتجها مسببات الأمراض. يتم تعطيل السم المشتق من البكتيريا عن طريق الحرارة أو مادة كيميائية (الفورمالديهايد) لإزالة السمية دون إزالة المناعة. مثال على التسمم الغذائي ، والتيتانوس ، وذوفان الخناق

تشمل اللقاحات الأخرى لقاح الوحيدات الفيروسية ولقاحات الحمض النووي واللقاح المقترن.

مناعة أخرى:

يتضمن التعديل المناعي تعديل المناعة للكائن الدقيق من خلال استخدام مثبطات السيتوكين أو السيتوكين ، وتعديل المناعة لمستضد معين باستخدام الإنترفيرون. هناك أنواع مختلفة من المحفزات المناعية ولكن الأكثر استخدامًا هي منبهات المناعة النيوكليوتيدات والثيموسين، و النفط توابل. منبه مناعي آخر مثل β-1 ، 3/1 ، 6 جلوكان يظهر أيضًا فائدة صحية من خلال إحداث استجابة مناعية ضد المرض البكتيري.

فيروس فج:

يعتبر علاج العاثيات الآن أفضل بديل للمضادات الحيوية. لأنها الفيروسات التي تسبب الضرر للخلية البكتيرية. لها مزايا عديدة على المضادات الحيوية.

لا تسبب العاثية أي ضرر للخلية المضيفة الطبيعية لأنها تتكاثر في موقع الإصابة. تقتصر كل فجوة على سلالة معينة من البكتيريا. لذلك فهي لا تضر بالبكتيريا المفيدة.

إندوليزين:

Endolysins & # 8211 المنطلق من فيروس العاثيات- هي الإنزيمات التي تحلل الببتيدوغليكان لجدار الخلية البكتيرية للسماح بإطلاق العاثيات الجديدة من البكتيريا. تشتمل الإندوليزين على الجلوكوزيداز ، الأميداز ، الإندوبيبتيداز ، والترانسجليكوزيلاز التي تعتبر فعالة للغاية ضد الكائنات الحية الدقيقة المختلفة مثل المكورات العنقودية ، عصيات الجمرة الخبيثة ، L. monocytogenes ، والمطثية الزبدية.

على سبيل المثال ، Endolysin PAL يمكن أن يقتل المجموعة A Streptococcus المسؤولة عن التسبب في التهاب اللوزتين والالتهابات الأخرى. يتسبب كل من Amidase PAL و endopeptidase Cpl-1 في الحد من حدوث كل من مرض المكورات الرئوية الموضعي والجهازي. يُظهر Endolysin LysK نشاطًا تحليليًا جيدًا ضد المكورات العنقودية التسعة ، بما في ذلك مقاومة الميثيسيلين بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية. يقتل Endolysin PlyV12 المكورات المعوية ، مقاومة الفانكومايسين E. faecalis ، و E. faecium.

بالمقارنة مع العلاج بالعاثية ، فإن الإندوليزين يعطي إمكانية أكبر لقتل السلالات الحساسة بسرعة مع طيف أوسع مضاد للبكتيريا.

هيدرولازات الببتيدوغليكان المرتبطة بالبكتريوفاج (VAPGHs):

هيدرولاز الببتيدوغليكان المرتبط بالبكتيريا (VAPGH) هو نوع من إنزيم اللياز الذي يحلل الببتيدوغليكان البكتيري لتسهيل دخول العاثيات إلى الخلايا البكتيرية. هذه الإنزيمات مستقرة عند درجة حرارة عالية مع الاحتفاظ بأنشطتها المضادة للميكروبات.

يعرض البروتين P5 من الملتهمة phi-6 نشاطًا ليليًا ضد Pseudomonas ، S. typhimurium ، E. coli ، Proteus vulgaris، وغيرها من البكتيريا سالبة الجرام

يُظهر البروتين Gp181 من phage KZ نشاطًا مضادًا للبكتيريا Ralstonia solanacearum و Yersinia.

البروتين gp36 من phage KMV قادر على القتل P. الزنجارية والإشريكية القولونية.

يُظهر البروتين HydH5 من phage phiIPLA88 ، والبروتين 17 من phage P68 والبروتين gp61 من phage phiMR11 نشاطًا ليليًا ضد بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية بما في ذلك MRSA.

الأمبيرات المركبة الريبوسومية:

يتم تصنيع مركبات AMP المُصنّعة من الريبوزومات في المصادر المختلفة للكائنات الحية ، مثل النباتات والحشرات والبكتيريا والثدييات والبرمائيات وما إلى ذلك. مضاد للفيروسات ومضاد للأورام. الشحنة الموجبة لهذه الببتيدات هي المسؤولة بشكل أساسي عن الأضرار الهيكلية للأغشية لأنها ترتبط بجزيئات الفسفوليبيد سالبة الشحنة على أغشية الخلايا البكتيرية.

يعتبر البكتريوسين مثالًا جيدًا على مركبات AMP المُصنّعة بواسطة الريبوسوم والتي تنتجها البكتيريا وتنشط ضد البكتيريا وثيقة الصلة. هناك العديد من أنواع البكتريوسينات مثل لاكتيسين فيرمنتيسين ، نيسين ، لاكتوسين ، هيلفيتيسين ، ثوريسين ، ساكاسين ، بلانتاسين ، سبتيسين ، إلخ.

تُظهر البكتريوسينات أنشطة مضادة للميكروبات من خلال آليات عمل مختلفة مثل إحداث ثقوب في غشاء الخلية ، عن طريق استهداف الدهون الثانية لآلية التخليق الحيوي الببتيدوغليكان ، عن طريق التدخل في استقلاب الحمض النووي الريبي ، والحمض النووي الريبي ، والبروتين.

يتسبب MccB17 في تثبيط تآكل الحمض النووي الفائق بوساطة DNA gyrase ، وبالتالي منع تكاثر الحمض النووي. يمنع MccC7-C51 وظيفة مركب الأسبارتيل-الحمض الريبي النووي النقال ، وبالتالي يتداخل مع تخليق الرنا المرسال.

الأمبيرات المركبة غير الريبوسومية:

يتم إنتاج الببتيد المضاد للميكروبات غير الريبوسومي (AMPs) مثل الجراميسيدين والبوليميكسين والباسيتراسين وببتيد السكر بواسطة البكتيريا.

بوليميكسين ب. بوليميكسا يسبب تأثيرًا مضادًا للميكروبات عن طريق تدمير أغشية الخلايا البكتيرية في العديد من البكتيريا سالبة الجرام ، مثل P. aeruginosa و E. coli و Klebsiella pneumoniae و Haemophilus و Salmonella.

يفرز Bacitracin B. الرقيقة و B. licheniformis، وهو يمنع تخليق الببتيدوغليكان لجدار الخلية والسكريات قليلة السكاريد الأساسية للبروتين السكري في البكتيريا موجبة الجرام. تم استخدام Bacitracin zinc و bacitracin methylene salicylic acid كمضافات تغذية في الولايات المتحدة الأمريكية والصين منذ 1960 و 1990 على التوالي.

البروبيوتيك:

البروبيوتيك هي الكائنات الحية الدقيقة التي تسبب فوائد صحية للمضيف عن طريق قمع الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض. إنها تمنع نمو مسببات الأمراض عن طريق إفراز العديد من المواد المضادة للميكروبات مثل البكتريوسينات والميكروسينات والمركبات العضوية الأخرى.

يتم استخدام الكثير من الكائنات الحية الدقيقة مثل البروبيوتيك Bacillus و Lactobacillus و Lactococcus و Streptococcus و Enterococcus و Pediococcus و Bifidobacterium و Bacteroides و Pseudomonas والخميرة و Aspergillus و Trichoderma ، إلخ.

تستخدم بعض الكائنات الحية الدقيقة كمضافات تغذية ميكروبيولوجية مثل B. cereus فار. toyoi و B. licheniformis و B. subtilis و Enterococcus faecium و Lactobacillus acidophilus و L. casei و L. farciminis و L. plantarum و L. rhamnosus و Pediococcus acidilactici و Streptococcus infantariusوبعض الفطريات مثل Saccharomyces cerevisiae و kluyveromyces.

البريبايوتكس:

البريبايوتك ليست ميكروبات مثل البروبيوتيك بل هي مكونات غذائية غير قابلة للهضم. تظل ألياف البريبايوتيك غير مهضومة في الأمعاء الدقيقة وتتخمر في القولون الغليظ. توفر عملية التخمير هذه العناصر الغذائية للبكتيريا المفيدة وتزيد من عدد هذه البكتيريا. تعمل الألياف الحيوية كسماد للبكتيريا المرغوبة.

أكثر البريبايوتكس شهرة هي السكريات قليلة السكاريد ، السكريات المتعددة ، المستخلصات النباتية الطبيعية ، تحلل البروتين ، البوليولات ، إلخ. بدأ استخدام البريبايوتكس كمضافات علفية في أواخر التسعينيات في الصين.

يؤدي البريبيوتين بشكل انتقائي إلى فوائد صحية من خلال دعم نمو البكتيريا المفيدة ومنع نمو البكتيريا الضارة.

سينبيوتيكس:

Synbiotics هو التحضير المشترك للبروبيوتيك والبريبايوتكس. يمنح الإعطاء المتزامن للبروبيوتيك والبريبايوتك دورًا مزدوجًا للخلايا المضيفة. هناك العديد من التقارير المفيدة عن synbiotics في تعزيز الاستجابة المناعية وتقليل الإسهال وما إلى ذلك.

فيتبيوتيك / مستخلصات نباتية:

تم استخدام المستخلصات النباتية ، المعروفة أيضًا باسم phytobiotics ، تقليديًا كعامل مضاد للميكروبات لسنوات عديدة. هناك عدة أعداد من المواد الكيميائية النباتية المضادة للميكروبات ، مثل الفينولات / البوليفينول ، التربينويدات / الزيوت الأساسية ، القلويات ، الليكتين / عديد الببتيدات. معظم المستخلصات النباتية عبارة عن مستقلبات ثانوية ، مثل التربينويدات (أحادي وسيسكيتيربين ، المنشطات ، إلخ) ، الفينولات (العفص) ، الجليكوسيدات ، والقلويدات (موجودة في صورة كحول ، ألدهيدات ، كيتونات ، استرات ، إثيرات ، لاكتونات).

تُظهر المواد الكيميائية النباتية نشاطها المضاد للميكروبات من خلال آليات العمل المختلفة. على سبيل المثال ، يتسبب كريبتوليبين في تثبيط توبويزوميراز والسابونين مما يؤدي إلى تلف غشاء الخلية وبالتالي انهيار الخلايا.

لا يعطي المستخلص النباتي أي آثار جانبية للخلية المضيفة عند استخدامه كعامل مضاد للميكروبات.

مثبطات استشعار النصاب:

تتسبب مثبطات استشعار النصاب (QSI) في تثبيط استشعار النصاب (QS) عن طريق منع نظام QS. هناك ثلاثة أنواع من مثبطات استشعار النصاب مثل:

  • نظائر QSI - AHLs (N-acyl homoserine lactones) غير الببتيدية
  • الببتيد & # 8211 AIPs (التحريض التلقائي الببتيد) متماثلون
  • بروتين QSI & # 8211 QS إنزيمات التبريد والأجسام المضادة لإخماد QS.

الفورانون المستخدم في الفئران يؤدي إلى الحد من ضراوة P. الزنجارية و apolipoprotein B (ApoB) يرتبط بجزيئات AIP1 من بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية، يقلل بشكل فعال من استشعار النصاب.

مثبطات بيوفيلم:

يعتبر تثبيط تكوين الأغشية الحيوية الرقيقة أمرًا ضروريًا للغاية لمكافحة الأمراض البكتيرية لأنها تُظهر مقاومة متزايدة للمضادات الحيوية. هناك عدة أعداد من المثبطات التي تقلل أو تمنع العدوى البكتيرية عن طريق تثبيط تكوين مصفوفة الأغشية الحيوية أو عن طريق إذابتها. هذه المثبطات ، على سبيل المثال ، الأوكسازوليدينون والتتراسكلين تسبب تثبيط تخليق البروتين ، تسبب الببتيدات الدهنية والببتيدات السكرية تدمير غشاء الخلية ، ويسبب الريفامبين تثبيط تخليق الحمض النووي والحمض النووي الريبي لتدمير مصفوفة الأغشية الحيوية العنقودية.

تقلل الفلوروكينولونات في توليفة مع الماكروليدات أو الفوسفوميسين عدوى المسالك البولية عن طريق إذابة أو تثبيط مصفوفة الأغشية الحيوية.

مزيج من urokinase أو lumbrokinase مع fleroxacin يزيد من تدمير P. الزنجارية الأغشية الحيوية عن طريق تحطيم مركب عديد السكاريد البروتين في الأغشية الحيوية البكتيرية وتثبيط تخليق الحمض النووي البكتيري.

يمكن أن يؤدي الجمع بين مثبط مضخة التدفق مع الميكونازول إلى القضاء بشكل فعال الكانديدا البيض من مصفوفة الأغشية الحيوية.

يعزز استخدام الإنزيمات كمثبطات لاستشعار النصاب قابلية الأغشية الحيوية عن طريق إذابة مصفوفة الأغشية الحيوية. يتضمن هذا الإنزيم هيدروليسات عديد السكاريد و DNases و proteases و alginate lyase. تظهر العديد من الدراسات أن تطبيق DNase و alginate lyase يزيد من فعالية التوبراميسين ضد الزائفة الزنجارية الأغشية الحيوية عن طريق زيادة قدرة المضادات الحيوية على اختراق الأغشية الحيوية من أجل إذابتها.

مثبطات الفوعة البكتيرية:

قد يكون تدمير الفوعة عن طريق تثبيط السموم البكتيرية استراتيجية جديدة لمكافحة المرض البكتيري. سموم الجمرة الخبيثة تتكون من سموم قاتلة (LF) وعامل الوذمة (EF) ومستضدات واقية (PA) ومكونات أخرى. العامل المميت (LF) ، عامل الوذمة (EF بالاشتراك مع المستضدات الواقية (PAs) يسبب تأثيرًا مرضيًا. الهيدروكسامات والسيسبلاتين هما من مثبطات الفوعة البكتيرية التي ترتبط بالموقع النشط لهذا البروتين وتثبط سمية السموم القاتلة (LF) ) ، عامل الوذمة (EF) ، المستضدات الواقية (PA).

يخفف الكوليسترامين أيضًا من سمية السم المطثية وبالتالي يمنع امتصاصه للخلايا الظهارية المعوية.

أسيل ساليسيل ألدهيد الذي يثبط نظام إفراز النوع 3 يمنع إمراضية السالمونيلا و يرسينيا السل الكاذب.

يمنع Virstatin التعبير عن ذيفان Vibrio cholera و Pilus ، وبالتالي يمنع نمو ضمة الكوليرا في القناة الهضمية.

إنزيمات الأعلاف:

تمنع إنزيمات التغذية تكاثر البكتيريا الضارة في الأمعاء. يفعلون ذلك عن طريق التسبب في الهضم وتقليل عدد العناصر الغذائية غير المهضومة في القولون الكبير. لأن العناصر الغذائية غير المهضومة ضرورية لنمو البكتيريا.

إنزيمات الأعلاف شائعة الاستخدام هي خليط من مجموعة متنوعة من الجليكاناز والفيتيز. تنتج العديد من الصناعات في الوقت الحاضر إنزيمات مركبة مؤتلفة مثل الفايتازات والكربوهيدرات وتبيعها كمضافات علفية.

يلعب الفايتيز دورًا مهمًا في هضم الكالسيوم والفوسفور والمعادن ويسبب إنتاج الميوسين المعوي وخسائر داخلية ، مما يدعم نمو البكتيريا المفيدة بشكل انتقائي. Xylanase هو مادة مضافة للنظام الغذائي القائم على القمح والتي تقلل من الآثار المرضية لـ C. بيرفرينجنز في دجاج التسمين.


خصائص وأنواع ANTIGEN

يُعرَّف المستضد بأنه أي مادة يمكن أن تحفز أجسامنا على عمل استجابة مناعية ضد تلك المادة.

مثال البكتيريا والفيروسات والمواد الكيميائية

خصائص المنشطات

  1. المستضدات أجنبية بطبيعتها.
  2. المستضدات مادة كيميائية (بروتينات ، سكريات)
  3. تحتوي المستضدات على كتلة جزيئية لا تقل عن 5000 دا.
  4. يحدد الهيكل المعقد للمستضد المناعة (القدرة على إحداث استجابة مناعية)
  5. المستضدات هي أنواع خاصة بالأعضاء.

هيكل المستضد

يتميز هيكل المستضد بقدرة المستضدات على الارتباط بموقع ارتباط مولد الضد في الجسم المضاد. يمكن تمييز المستضد بالكتلة الجزيئية. في معظم الحالات تكون المستضدات عبارة عن بروتينات. يمكن أن تشمل الكبسولات أو الأسواط أو الكائنات الحية الدقيقة الأخرى. يمكن أن تكون المستضدات عبارة عن دهون (عادةً ما تكون الدهون غير مولدة للمناعة ، ولكنها يمكن أن تكون وظائف كمستضد ومعروفة باسم Haptens.)


محتويات

يظهر التباين الأنتيجيني في البكتيريا بشكل أفضل من خلال أنواع الجنس النيسرية (الجدير بالذكر، النيسرية السحائية و النيسرية البنية، the gonococcus) أنواع من الجنس العقدية والميكوبلازما. ال النيسرية تتنوع الأنواع الخاصة بها (بوليمرات البروتين المكونة من وحدات فرعية تسمى بيلين والتي تلعب دورًا حاسمًا في الالتصاق البكتيري ، وتحفز استجابة مناعية قوية للمضيف) وتنوع العقديات بروتين M.

في البكتيريا بوريليا برغدورفيرية، سبب مرض لايم ، يمكن أن يخضع البروتين الدهني السطحي VlsE لإعادة التركيب مما يؤدي إلى تنوع مستضد. تحمل البكتيريا بلازميدًا يحتوي على خمسة عشر صامتًا vls شرائط كاسيت ونسخة وظيفية واحدة من vlsE. تتحد أجزاء من الكاسيتات الصامتة مع جين vlsE ، مما يولد متغيرات من مستضد البروتين الدهني السطحي. [7]

يتم استخدام التباين الأنتيجيني بواسطة عدد من الطفيليات الأولية المختلفة. المثقبية البروسية و المتصورة المنجلية هي بعض من أفضل الأمثلة المدروسة.

المثقبية البروسية يحرر

المثقبية البروسية، الكائن الحي الذي يسبب مرض النوم ،

يتكاثر خارج الخلوي في مجرى الدم للثدييات المصابة ويخضع للعديد من آليات دفاع المضيف بما في ذلك النظام التكميلي والجهاز المناعي الفطري والتكيفي. لحماية نفسه ، يزين الطفيل نفسه بطبقة كثيفة ومتجانسة (

في المراحل الأولى من الغزو ، يكون غلاف VSG كافيًا لحماية الطفيل من الكشف المناعي. يعرّف المضيف في النهاية VSG على أنه مستضد أجنبي ويشن هجومًا ضد الميكروب. ومع ذلك ، يحتوي جينوم الطفيل على أكثر من 1000 جين ترمز لمتغيرات مختلفة من بروتين VSG ، الموجود في الجزء الفرعي التيلومير من الكروموسومات الكبيرة ، أو على الكروموسومات الوسيطة. يتم تنشيط جينات VSG هذه عن طريق التحويل الجيني بترتيب هرمي: يتم تنشيط VSGs التيلوميرية أولاً ، تليها مجموعة VSGs ، وأخيراً الجينات الزائفة VSGs. [8] يتم التعبير عن VSG واحد فقط في أي وقت. يتم تبديل كل جين جديد بدوره إلى موقع تعبير VSG (ES). [9] تعتمد هذه العملية جزئيًا على إعادة التركيب المتماثل للحمض النووي ، والذي يتم التوسط فيه جزئيًا عن طريق تفاعل T. بروسي جين BRCA2 مع RAD51 (ومع ذلك ، هذه ليست الآلية الوحيدة الممكنة ، حيث لا تزال متغيرات BRCA2 تعرض بعض تبديل VSG). [9]

بالإضافة إلى إعادة التركيب المتماثل ، يعد تنظيم النسخ مهمًا أيضًا في تبديل المستضد ، منذ ذلك الحين T. بروسي العديد من مواقع التعبير المحتملة. يمكن اختيار VSG الجديد إما عن طريق التنشيط النسخي لـ ES الصامت سابقًا ، أو عن طريق إعادة دمج تسلسل VSG في ES النشط (انظر الشكل ، "آليات تبديل VSG في T. بروسي[8] على الرغم من أن المحفزات البيولوجية التي تؤدي إلى تبديل VSG غير معروفة تمامًا ، إلا أن النمذجة الرياضية تشير إلى أن المظهر المنظم لمتغيرات VSG المختلفة يتم التحكم فيه من خلال عاملين أساسيين مشتقَين من الطفيليات على الأقل: معدلات التنشيط التفاضلي للطفيلي VSG و تمايز الطفيلي المعتمد على الكثافة. [10] [11]

المتصورة المنجلية يحرر

المتصورة المنجلية، العامل المسبب الرئيسي للملاريا البشرية ، لديه دورة حياة معقدة للغاية تحدث في كل من البشر والبعوض. أثناء وجوده في المضيف البشري ، يقضي الطفيلي معظم دورة حياته داخل الخلايا الكبدية وكريات الدم الحمراء (على عكس T. بروسي الذي لا يزال خارج الخلية). نتيجة لمكانتها داخل الخلايا بشكل أساسي ، يجب تعديل الخلايا المضيفة الطفيلية التي تعرض بروتينات الطفيليات لمنع التدمير بواسطة الدفاعات المناعية للمضيف. في حالة المتصورةيتم تحقيق ذلك عن طريق الغرض المزدوج المتصورة المنجلية بروتين غشاء كرات الدم الحمراء 1 (PfEMP1). يتم ترميز PfEMP1 بواسطة مجموعة متنوعة من الجينات المعروفة باسم فار عائلة الجينات (حوالي 60 جينًا في المجموع). يتم زيادة تنوع عائلة الجينات عبر عدد من الآليات المختلفة بما في ذلك تبادل المعلومات الجينية في مواقع التيلومير ، بالإضافة إلى إعادة التركيب الانتصافي. يعمل بروتين PfEMP1 على عزل كريات الدم الحمراء المصابة من تدمير الطحال عن طريق الالتصاق بالبطانة. علاوة على ذلك ، فإن الطفيل قادر على التهرب من آليات دفاع المضيف عن طريق تغيير أي منها فار يستخدم الأليل لتشفير بروتين PfEMP1. [12] مثل T. بروسي، يعبر كل طفيلي عن نسخ متعددة من بروتين واحد متطابق. ومع ذلك ، على عكس T. بروسي، الآلية التي بواسطتها فار التبديل يحدث في المتصورة المنجلية يُعتقد أنه نسخي بحت. [13] فار لقد ثبت أن التبديل يحدث بعد فترة وجيزة من غزو كرات الدم الحمراء بواسطة a المتصورة المنجلية طفيلي. [14] أظهر تحليل التهجين الفلوري في الموقع أن التنشيط فار الأليلات مرتبطة بالموضع المتغير للمادة الجينية إلى مناطق "متساهلة نسبيًا". [15]

تمتلك عائلات الفيروسات المختلفة مستويات مختلفة من القدرة على تغيير جينوماتها وخداع جهاز المناعة حتى لا يتعرف عليها. تحتوي بعض الفيروسات على جينومات غير متغيرة نسبيًا مثل الفيروسات المخاطانية بينما يكون لدى البعض الآخر مثل الإنفلونزا جينومات متغيرة بسرعة تمنع قدرتنا على إنتاج لقاحات طويلة الأمد ضد المرض. تمتلك الفيروسات بشكل عام معدل تحور أسرع بكثير في جينوماتها من الخلايا البشرية أو البكتيرية. بشكل عام ، تتمتع الفيروسات ذات الجينوم الأقصر بمعدلات طفرة أسرع من الجينومات الأطول نظرًا لأن لديها معدل تكاثر أسرع. [16] كان يُعتقد تقليديًا أن الفيروسات التي تحتوي على جينوم RNA لديها دائمًا معدل تباين مستضدي أسرع من تلك التي تحتوي على جينوم DNA لأن RNA polymerase يفتقر إلى آلية للتحقق من الأخطاء في الترجمة ولكن العمل الأخير بواسطة Duffy et al. يوضح أن بعض فيروسات الحمض النووي لديها نفس المعدلات العالية من التباين المستضدي مثل نظيراتها من الحمض النووي الريبي. [16] يمكن تصنيف التباين الأنتيجيني داخل الفيروسات إلى 6 فئات مختلفة تسمى الانجراف المستضدي ، والتحول ، ورفع الصدع ، والنخل ، والهدية

الصدع الأنتيجيني: إعادة تركيب الجين الفيروسي. يحدث هذا عندما تكون هناك خليتان فيروسية تصيبان نفس الخلية المضيفة. في هذه الحالة ، تتحد الفيروسات مع أجزاء من كل جين مكونة جينًا جديدًا بدلاً من مجرد تبديل الجينات. تمت دراسة إعادة التركيب على نطاق واسع في سلالات إنفلونزا الطيور لمعرفة كيفية تغير جينات H5N1 بمرور الوقت. [17]

الانجراف الأنتيجيني: الطفرات النقطية التي تحدث من خلال التكاثر غير الكامل للجينوم الفيروسي. تظهر جميع الفيروسات انحرافًا وراثيًا بمرور الوقت ، لكن المقدار الذي يمكن أن تنجرف به دون أن تتسبب في إحداث تأثير سلبي على لياقتهم يتفاوت بين العائلات.

التحول الأنتيجيني: إعادة تصنيف الجينوم الفيروسي الذي يحدث عندما تصاب خلية مضيفة واحدة بخليتين فيروسيتين. بينما تمر الخلايا الفيروسية خلال عملية التكاثر ، فإنها تعيد تصنيفها وتختلط جينات النوعين وتنتج 256 نوعًا جديدًا من الفيروس. يحدث هذا في الأنفلونزا كل عقدين.

غربلة الأنتيجين: انتقال مباشر بسلالة حيوانية المصدر من الفيروس. يحدث هذا عندما يصاب الإنسان خلال حدث غير مباشر.

رفع الأنتيجين: الانتقال الفيروسي للجين المشتق من العائل. تسرق بعض الفيروسات جينات المضيف ثم تدمجها في الجينوم الفيروسي الخاص بها ، وترميز الجينات التي تمنحها أحيانًا ضراوة متزايدة. مثال على ذلك هو لقاح فيروس الجدري الذي يشفر عامل نمو فيروسي مشابه جدًا لعامل النمو البشري ويُعتقد أنه سُرق من الجينوم البشري. [18]

هدية المستضد: تحدث عندما يقوم البشر بتعديل جينوم الفيروس عن عمد إما في بيئة معملية أو من أجل صنع سلاح بيولوجي.

تحرير فيروس الانفلونزا

يتم تحديد الخصائص المستضدية لفيروسات الأنفلونزا بواسطة كل من Hemagglutinin و Neuraminidase. البروتياز المضيف المحدد يشق الببتيد المفرد HA إلى وحدتين فرعيتين HA1 و HA2. يصبح الفيروس شديد الضراوة إذا كانت الأحماض الأمينية في مواقع الانقسام محبة للدهون. يختار ضغط الانتقاء في البيئة التغييرات المستضدية في محددات مولد الضد لـ HA ، والتي تشمل الأماكن التي تخضع للتطور التكيفي وفي مواقع المستضدات التي تخضع لبدائل ، مما يؤدي في النهاية إلى تغييرات في مولد الضد للفيروس. لا يرتبط الارتباط بالجليكوزيل لـ HA مع مولد الضد أو ضغط الاختيار. [19] يمكن تصنيف التباين الأنتيجيني إلى نوعين ، الانجراف المستضدي الذي ينتج عن تغير في عدد قليل من الأحماض الأمينية والتحول المستضدي الذي ينتج عن اكتساب بروتينات هيكلية جديدة. لقاح جديد مطلوب كل عام لأن فيروس الأنفلونزا لديه القدرة على الانجراف المستضدي. يحدث التحول الأنتيجيني بشكل دوري عندما يتم الحصول على جينات البروتينات الهيكلية من مضيفات حيوانية أخرى مما يؤدي إلى تغيير جذري مفاجئ في الجينوم الفيروسي. نتج عن إعادة التركيب بين المقاطع التي ترمز للهيماجلوتينين والنورامينيداز لقطاعي فيروس إنفلونزا الطيور والبشر انتشار أوبئة إنفلونزا عالمية تسمى أوبئة مثل الأنفلونزا الآسيوية عام 1957 عندما تم الحصول على 3 جينات من فيروسات الطيور الأوراسية وخضعت لإعادة الفرز مع 5 شرائح جينية من الجينات المنتشرة. السلالات البشرية. مثال آخر يأتي من إنفلونزا هونغ كونغ عام 1968 التي اكتسبت جينين عن طريق إعادة التجميع من فيروسات الطيور الأوراسية مع 6 شرائح جينية من السلالات البشرية المنتشرة.

تطعيم ضد الانفلونزا تحرير

بعد التطعيم ، تزداد خلايا البلازما IgG + المفرزة للأجسام المضادة (ASCs) بسرعة وتصل إلى المستوى الأقصى في اليوم السابع قبل العودة إلى المستوى الأدنى في اليوم الرابع عشر. تصل خلايا الذاكرة B الخاصة بالإنفلونزا إلى الحد الأقصى في اليوم 14-21. الأجسام المضادة المُفرزة خاصة بفيروس اللقاح. علاوة على ذلك ، فإن معظم الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المعزولة لها صلات ارتباط ضد HA ويظهر الباقي تقاربًا ضد NA والبروتين النووي (NP) ومستضدات أخرى. يمكن إنتاج هذه الأجسام المضادة وحيدة النسيلة البشرية عالية التقارب في غضون شهر بعد التطعيم وبسبب أصلها البشري ، سيكون لها آثار جانبية قليلة جدًا ، إن وجدت ، مرتبطة بالأجسام المضادة في البشر. يمكن استخدامها لتطوير العلاج السلبي بالأجسام المضادة ضد انتقال فيروس الأنفلونزا.

تعيين تطور المستضد تحرير

يمكن قياس قدرة الجسم المضاد المضاد للفيروسات على تثبيط التراص الدموي واستخدامها لإنشاء خريطة ثنائية الأبعاد باستخدام عملية تسمى رسم الخرائط المستضدي بحيث يمكن تصور تطور المستضد. يمكن أن توضح هذه الخرائط كيف يمكن للتغييرات في الأحماض الأمينية أن تغير ارتباط الجسم المضاد بجسيم الفيروس وتساعد في تحليل نمط التطور الجيني والمستضدي. تظهر النتائج الحديثة أنه نتيجة للتباين المستضدي الذي يحركه الجسم المضاد في مجال واحد من موقع H1 hemagglutinin Sa ، يمكن أن تؤدي الطفرة التعويضية في NA إلى اختلاف مستضد NA. نتيجة لذلك ، تتطور مقاومة الأدوية إلى مثبطات NA. يمكن لمثل هذه الظاهرة أن تخفي تطور تطور NA في الطبيعة لأن مقاومة مثبطات NA يمكن أن تكون ناتجة عن هروب HA مدفوع بالأجسام المضادة. [20]

HIV-1 تحرير

التحدي الرئيسي في السيطرة على عدوى HIV-1 على المدى الطويل هو الهروب المناعي. يختلف مدى وتكرار استهداف حاتمة بواسطة أليل HLA معين من شخص لآخر. علاوة على ذلك ، كنتيجة للتمييز المناعي ، تقتصر استجابة CTL للفرد على عدد قليل من حواتم أليل HLA محدد على الرغم من التعبير عن ستة أليلات HLA من الفئة 1. على الرغم من أن استجابة CTL في المرحلة الحادة موجهة ضد عدد محدود من الحلقات ، فإن الذخيرة الحلقية تزداد بمرور الوقت بسبب الهروب الفيروسي. بالإضافة إلى ذلك ، يعد التطور المشترك للأحماض الأمينية مشكلة صعبة تحتاج إلى معالجة. على سبيل المثال ، يؤدي الاستبدال في موقع معين إلى حدوث طفرة ثانوية أو تعويضية في موقع آخر. كان الاكتشاف الذي لا يقدر بثمن هو أنه عند تطبيق ضغط انتقائي ، يمكن التنبؤ بنمط تطور HIV-1. في الأفراد الذين يعبرون عن أليل HLA B * 27 الوقائي ، تكون الطفرة الأولى التي تحدث في Gag epitope KK10 في الموضع 6 من L إلى M وبعد عدة سنوات هناك تغيير في الموضع 2 من A R إلى a K. لذلك ، يمكن استخدام المعرفة بإمكانية التنبؤ بمسارات الهروب لتصميم المواد المناعية. [21] المنطقة gp120 من HIV-1 Env التي تلامس CD4 ، مستقبله الأساسي ، محفوظة وظيفيًا وعرضة لتحييد الأجسام المضادة مثل الجسم المضاد أحادي النسيلة b12. تُظهر النتائج الحديثة أن مقاومة التحييد بواسطة b12 كانت نتيجة الاستبدالات التي أقيمت في المنطقة القريبة من سطح التلامس CD4. وبهذه الطريقة يتجنب الفيروس تحييده بواسطة b12 دون التأثير على ارتباطه بـ CD4. [22]

تحرير Flaviviruses

Flaviviridae هي عائلة من الفيروسات التي تشمل فيروسات معروفة مثل فيروس غرب النيل وفيروس حمى الضنك. الجنس فلافيفيروس يحتوي على بروتين مغلف نموذجي (E-protein) على سطحه والذي يعمل كهدف للأجسام المضادة المعادلة للفيروس. يلعب البروتين E دورًا في الارتباط بالمستقبلات ويمكن أن يلعب دورًا في التهرب من الجهاز المناعي للمضيف. يحتوي على ثلاثة مجالات مستضدية رئيسية وهي A و B و C التي تتوافق مع المجالات الهيكلية الثلاثة II و III و I. المجال الهيكلي III هو مجال ربط مستقبلات مفترض والأجسام المضادة ضده تحيد عدوى فيروسات flavivirus. يمكن تتبع الطفرات التي تؤدي إلى اختلافات في المستضدات إلى الطبيعة الكيميائية الحيوية لبدائل الأحماض الأمينية بالإضافة إلى موقع الطفرة في المجال III. على سبيل المثال ، تؤدي البدائل في الأحماض الأمينية المختلفة إلى مستويات مختلفة من التعادل بواسطة الأجسام المضادة. إذا كانت الطفرة في حمض أميني حرج يمكن أن تغير بشكل كبير تحييد الأجسام المضادة ، يصبح من الصعب الاعتماد على لقاحات WNV والمقايسات التشخيصية. فيروسات flavivirus الأخرى التي تسبب حمى الضنك والمرض والحمى الصفراء تفلت من تحييد الأجسام المضادة عن طريق الطفرات في المجال الثالث من البروتين E. [23] [24]


المواد وطرق أمبير

السلالات البكتيرية والثقافة والتلاعب

النوع البري س. الرئوية النمط المصلي 4 سلالة TIGR4 والطفرة غير المغلفة كانت هدايا لطيفة من J. Weiser (جامعة بنسلفانيا). كانت D39 و D39-DΔ المتحولة غير المغلفة هدايا لطيفة من J. Paton (جامعة. Adelaide). ΔpspC، ΔpspA، Δجزء في المليون، Δlgt، Δدكتوراه، Δبياو Δرقائق سلالات متحولة سبق وصفها [47-51]. كانت سلالة النمط المصلي 19F EF3030 هدية لطيفة من D. تم تصنيع سلالات متحولة غير مغلفة من 0100993 و ST23F عن طريق استبدال cps locus (Sp_0346 إلى Sp_0360) مع كاسيت جانوس [52]. ال س. ميتيس سلالة معربا عن س. الرئوية تم الإبلاغ عن كبسولة من النمط المصلي 4 TIGR4 سابقًا [53]. لبناء س. ميتيس pspC + سلالة متحولة ، TIGR4 pspC تم تضخيم الجين بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتم دمجه بين س. ميتيس يحيط الحمض النووي باستخدام ربط PCR قبل التحول إلى س. ميتيس سلالة مماثلة لاستراتيجية الطفرات كما هو موصوف [22]. تمت زراعة البكتيريا بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية في 5٪ من ثاني أكسيد الكربون على أجار كولومبيا (أوكسويد) مع 5٪ من دم الحصان (TCS Biosciences). تم عمل المخزونات عن طريق نقل مستعمرة واحدة من س. الرئوية إلى مرق Todd-Hewitt مع مستخلص الخميرة 0.5٪ (THY) ، ينمو إلى OD 0.4 (حوالي 10 8 CFU / مل) ويتم تخزينه عند -80 درجة مئوية في 10٪ جلسرين على هيئة قسامات تستخدم مرة واحدة. تم تأكيد CFU عن طريق حساب المستعمرة للسجل10 التخفيفات المتسلسلة للبكتيريا المزروعة بين عشية وضحاها على 5٪ أجار دم كولومبيا. لهضم البروتينات السطحية جزئيًا ، تم تعليق البكتيريا في 500 ميكرولتر من PBS مع أو بدون 100 ميكروغرام من Pronase (Roche) ، المحتضنة لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية اهتزازًا عند 150 دورة في الدقيقة ، متبوعًا بإضافة 20 ميكرولتر من 25X مثبط بروتياز صغير كامل (روش). تم بعد ذلك غسل البكتيريا مرتين في برنامج تلفزيوني وإعادة تعليقها في برنامج تلفزيوني + 10٪ جلسرين. تم تحضير المحلولات البكتيرية كما هو موضح سابقًا [48]. عند الضرورة ، تمت معالجة 20 ميكرولتر من المحللة (1500 ميكروغرام / مل) باستخدام 10 ميكرولتر من التربسين (2.5 مجم / مل ، Gibco ، Invitrogen) أو PBS (محلول التحكم) وحضنت طوال الليل ، قبل إضافة 10 ميكرولتر 25X مثبط البروتياز الكامل (روش).

مصادر المصل و IVIG

كانت Intratect هدية كريمة من شركة Biotest Pharma GmbH ، Dreieich ، ألمانيا. تم الحصول على Vigam (Bioproducts Laboratories Ltd ، Elstree ، UK) تجاريًا. كلاهما يحتوي على 5٪ غلوبولين مناعي وريدي بشري مُجمَّع. تشير تخفيفات IVIG الموصوفة للبيانات التجريبية إلى تخفيفات منتج 5٪ بدلاً من تركيز IgG الناتج. تم جمع الأمصال الفردية من البالغين الأصحاء غير المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية في ملاوي (الفئة العمرية من 19 إلى 49 عامًا ، يعني 29 عامًا ، 16 ذكرًا و 4 إناث) الذين لم يتم تحصينهم ضد س. الرئوية. كان المصل من الأشخاص المسنين (تتراوح أعمارهم من 62 إلى 78 عامًا ، 6 ذكور ، 4 إناث) وشباب البالغين (تتراوح أعمارهم من 24 إلى 33 عامًا ، 4 ذكور ، 6 إناث) هدية كريمة من الدكتورة إليزابيث سابي ، جامعة برمنغهام. تم استنفاد الجسم المضاد المحدد من IVIG عن طريق امتصاص السطح البكتيري باستخدام TIGR4 غير المغلف أو س. ميتيس معربا عن كبسولة النمط المصلي 4 [53]. نمت البكتيريا إلى OD580 0.4 ، تم غسلها وإعادة تعليقها إلى OD 1.0 باستخدام PBS ، وتم تكوير 4 مل عن طريق الطرد المركزي قبل إعادة التعليق في 1.8 مل من IVIG (Intratect). تم تحضين المعلق لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية ، يهتز عند 100 دورة في الدقيقة. تم استرداد IVIG المستنفد للمستضد عن طريق الطرد المركزي وتكررت العملية. تم تحضير IVIG الممتص الوهمي باتباع نفس العملية ولكن بدون إضافة البكتيريا. تمت معالجة IVIG مسبقًا باستخدام غراء لإنتاج شظايا Fab أحادية التكافؤ باستخدام مجموعة إعداد Pierce Fab وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة وتم تأكيدها بواسطة طعنة مناعية. المخصب (هـ) تم تحضير IVIG بواسطة كروماتوغرافيا التقارب كما هو موصوف سابقًا [54]. بالنسبة لراتنج التقارب ، تمت زراعة ثقافات TIGR4 أو D39 غير المغلفة لمدة 16 ساعة ، وتم تكويرها وتعليقها في حجم واحد من محلول اقتران (0.1 مولار بيكربونات الصوديوم ، 0.5 مولار من كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 8.3). تم تحليل ضغط الخلايا عند 200 ميجا باسكال باستخدام مجانس خلية ضغط (ستانستيد) وتم ترشيح المحلول الناتج بمقدار 0.2 ميكرومتر وغسيله مقابل 5 لتر من المخزن المؤقت للاقتران لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة الغرفة. تم تركيز Lysates باستخدام مكثفات الطرد المركزي Vivaspin 20 بوزن جزيئي مقطوع قدره 10 كيلو دالتون (GE Healthcare) ومقترن بـ agarose المنشط ببروميد السيانوجين (Sigma-Aldrich) بتركيز 1 مجم / مل تقريبًا وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.

فحوصات الأمصال والأجسام المضادة

الخلية الكاملة ، أو مستضد محدد (بروتينات فردية ، عديد السكاريد المحفظي أو عديد السكاريد لجدار الخلية) تم إجراء ELISAs كما سبق [18 ، 55-57]. كانت شهادة الدكتوراه المؤتلفة هدية كريمة من C. Durmort [58] وكانت PsaA هدية لطيفة من J. Paton [59]. تم تقييم ارتباط مفتش IgG بلوحة من البروتينات البكتيرية وأنماط مصلية متعددة المحفظة باستخدام مقايسات Luminex [55] والمقايسة متعددة الإرسال القائمة على التلألؤ الكهربي بناءً على تقنية MesoScale Discovery (MSD ، Rockville ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية) كما هو موضح سابقًا [13 ، 55 ، 60] . من أجل التكتل المناعي ، تم فصل المتحللات البكتيرية بواسطة SDS-PAGE ونقلها إلى أغشية النيتروسليلوز كما هو موضح سابقًا [36]. تم فحص الأغشية باستخدام IVIG (Intratect) أو الأمصال البشرية المجمعة (1: 1000). لتقييم ارتباط IgG بالسطح البكتيري ، تم إجراء قياس التدفق الخلوي كما هو موصوف سابقًا [57 ، 61 ، 62].

في المختبر المقايسات الوظيفية

تم تقييم تأثيرات IVIG على التجميع البكتيري أثناء النمو عن طريق تلقيح THY بـ 1x10 6 من س. الرئوية وقياس OD580 على مدى 8 ساعات في وجود 10٪ IVIG (Intratect ، 40mg / ml IgG) أو PBS. بعد 8 ساعات من النمو ، تم تثبيت الثقافات على شرائح بوليزين (VWR) ، ملطخة بتلطيخ رومانوسكي السريع (Diff-Quick) وتصويرها تحت المجهر الضوئي (أوليمبوس ، BX40) عند 100X باستخدام برنامج Q capture pro. تم تقييم التجميع البكتيري مباشرة عن طريق احتضان البكتيريا المخففة في PBS إلى 1X10 6 CFU / مل عند 37 درجة مئوية في 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون.2 لمدة 1 ساعة مع 0٪ ، 1٪ ، 5٪ ، 10٪ ، IVIG (Intratect 40mg / ml IgG). بعد التثبيت في 50 ميكرولتر 10 ٪ NBF ، تم تقييم حجم الجسيمات عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام FACSCalibur مع برنامج Cellquest و Flowjo (BD Bioscience ، المملكة المتحدة) كتغيير في التشتت الأمامي (FSC). تم قياس البلعمة البكتيرية كما هو موصوف سابقًا على أنها ارتباط البكتيريا المسمى FAM-SE إما مع RAW 264.7 الضامة (وزارة الداخلية 10) [38 ، 53] أو العدلات البشرية المعزولة حديثًا [57]. باختصار ، نمت خلايا الفئران RAW 264.7 في RPMI مع 10 ٪ من مصل العجل الجنيني المعطل بالحرارة. بعد الغسيل ، أصيبوا ببكتيريا تحمل علامة FAM-SE في وزارة الداخلية من 10 والتي تم تحضينها مسبقًا باستخدام IVIG أو PBS لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. وتم تقييم التألق باستخدام مقياس التدفق الخلوي FACS Calibur مع برنامج Cellquest و Flowjo (BD Bioscience ، المملكة المتحدة). بالنسبة إلى البلعمة العدلة ، تم تحضين البكتيريا ذات العلامات المشوهة بالمثل مع الخلايا المحببة البشرية المعزولة حديثًا لمدة 30 دقيقة في وزارة الداخلية 20 ، وبعد ذلك تم تثبيتها باستخدام PFA وتقييمها عن طريق قياس التدفق الخلوي. لتقييم القتل البكتيري بواسطة العدلات البشرية ، تم تحضين البكتيريا التي تم طمسها مسبقًا بخلايا حبيبية معزولة حديثًا لمدة 45 دقيقة وبعد ذلك تم تخفيفها بشكل متسلسل ومطليها واحتضانها طوال الليل قبل عد الطائفة.

نماذج عدوى الفئران والمقايسات

لتجارب التحصين السلبية مع IVIG ، تلقت الفئران CD1 القديمة المتطابقة مع العمر من 6 إلى 8 أسابيع (Charles River ، المملكة المتحدة) اثنين من i.p.حقن IVIG يبلغ مجموعها 12.8 مجم IgG أو ما يعادله من PBS 3 ساعات قبل وقبل ذلك مباشرة س. الرئوية TIGR4. أعطيت التحديات إما i.n. مع 50 مايكرولتر من برنامج تلفزيوني يحتوي على 1x10 7 CFU أو IV. مع 100 مايكرولتر من برنامج تلفزيوني يحتوي على 5 × 10 5 زيمبابوي. لضمان شفط لقاح IN ، تم تخدير الفئران باستخدام 4 ٪ هالوثان (Vet-Tech). في النقاط الزمنية المعينة بعد التلقيح ، تم إعدام الفئران و BALF ، متجانسات الرئة ، والحصول على الدم من أجل الطلاء لحساب CFU البكتيري كما هو موضح سابقًا [19 ، 48]. تم جمع BALF عن طريق غرس الرئتين بـ PBS 1 مل عبر شق في القصبة الهوائية. تم استرداد هذا عن طريق الشفط المتكرر ثلاث مرات. تم استنفاد الضامة الطحالية بواسطة IV. إعطاء 100ul من 5 ملغ / مل من الكلودرونات الشحمية (تم إعطاء الضوابط PBS الجسيمات الشحمية) [38 ، 63]. تم تأكيد نضوب البلاعم عن طريق انخفاض بنسبة 50٪ في الخلايا الطحالية F4 / 80 + عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام مضاد F4 / 80-phycoerythrin (Caltag). لاستنفاد العدلات Ly6G + ، تم إعطاء 600 ميكروغرام من الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة لـ Ly6G (1A8m ، Bioxcell) بواسطة i.p. الحقن قبل 24 ساعة من استنفاد تحدي العدوى ، كما سبق [24] ، مما أدى إلى انخفاض بنسبة 94.8٪ في العدلات المعينة لغسل السوائل بعد 24 ساعة من الإصابة. تم قياس ألبومين المورين بواسطة ELISA باستخدام مجموعة متوفرة تجاريًا وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة (Bethyl Laboratories). تم قياس Murine TNF-alpha بواسطة تعداد خلايا ELISA و BALF في السيتوسبينات كما هو موضح سابقًا [24]. تم قياس IgG البشري في عينات الفئران باستخدام مجموعة ELISA المتاحة تجاريًا وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة (Cambridge Bioscience).

إحصائيات

يتم تقديم البيانات كوسائل جماعية مع أشرطة خطأ تمثل الانحرافات المعيارية (SDs). تم استخدام اختبار T غير المقترن للطالب لمقارنة متوسط ​​مجموعتين أو تحليل التباين (ANOVA) للمقارنات بين مجموعات متعددة ، باستخدام مقارنات Bonferroni بعد الاختبار. تم استخدام اختبارات F لتقييم ما إذا كان منحدر الانحدار الخطي مختلفًا إحصائيًا عن 0. تم إجراء الاختبارات الإحصائية باستخدام برنامج Graph Pad Prism ، و ص القيم & لتر 0.05 اعتبرت معنوية.

الموافقة على الدراسة

تمت الموافقة على التجارب من قبل اللجنة الأخلاقية للخدمات البيولوجية في UCL ووزارة الداخلية في المملكة المتحدة (ترخيص المشروع PPL70 / 6510). تم إجراء التجارب وفقًا للإرشادات الوطنية البريطانية لاستخدام الحيوانات والعناية بها ، بموجب ترخيص وزارة الداخلية البريطانية. تم أخذ عينات دم من متطوعين بشريين في ملاوي بموافقة لجنة أبحاث وأخلاقيات كلية الطب بجامعة ملاوي ولجنة أخلاقيات البحث في كلية ليفربول للطب الاستوائي (المرجع: 00.54).