معلومة

بدائل بروميد إيثيديوم لتلوين الأحماض النووية الصغيرة؟


بينما يعمل بروميد الإيثيديوم بشكل جيد لتلطيخ الحمض النووي الريبي الأحادي الجديلة أو جزيئات الحمض النووي مزدوجة الشريطة ، فإنه لا يلطخ الأحماض النووية الأصغر بشكل جيد. لقد لاحظت أنه من الصعب رؤية حوالي 20 قاعدة وتحت الأحماض النووية أحادية السلسلة مع تلطيخ EtBr ما لم تكن الأحماض النووية شديدة التركيز.

ما هي البدائل الجيدة لمراقبة الأحماض النووية الصغيرة في المواد الهلامية بولي أكريلاميد؟ سيكون الاعتبار الرئيسي هو سهولة الاستخدام ، ويجب أن يكون ذلك ممكنًا بدون أي معدات غير عادية.


قائمة الأصباغ متوفرة هنا وقائمة الأصباغ الخاصة بالأحماض النووية متوفرة هنا. أعتقد أن لديك خيارين هما SYBR Gold nucleic acid gel stain (S11494) والذي يمكن اكتشافه تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية (لست متأكدًا مما إذا كان يمكن استخدامه مع المواد الهلامية بولي أكريلاميد). خيارك الآخر الذي يمكن استخدامه مع المواد الهلامية بولي أكريلاميد هو صبغة هلام SYBR Green II RNA (S7564 ، S7568 ، S7586) ، يمكن اكتشاف هذه البقعة باستخدام الأشعة فوق البنفسجية بعد الرحلان الكهربائي. يذكر RNA في الاسم ولكن يمكن استخدامه أيضًا لـ ssDNA.

أتمنى أن يساعدك هذا


أعتقد أن GelRed أو GelGreen سيكونان خيارًا أيضًا. يزعمون أنهم أكثر حساسية من EtBr وبالتأكيد أقل سمية (حتى أكثر من SYBR Green). لم أستخدمها شخصيًا ضد مثل هذا المنتج الصغير. يحتوي GelRed بشكل أساسي على نفس أطوال موجات الإثارة / الانبعاث مثل EtBr لذلك لا يلزم تغيير المعدات.

ورقة المنتج

رابط المتجر


بقع هلام الحمض النووي الفلوريسنت

بقعة الحمض النووي التي ترتبط بمناطق A-T الغنية بالحمض النووي على طول الأخدود الصغير.

Invitrogen & trade SYBR & trade مجموعة Green Nucleic Acid Gel Stain Starter Kit

كل ما يحتاجه المستخدمون لأول مرة لاستخدام بقع جل SYBR

Invitrogen & trade SYBR & trade Safe DNA Gel Stain in 1X TAE

Invitrogen & trade SYBR & trade Safe DNA Gel Stain 0.5X TBE

تم تطويره خصيصًا لتقليل الطفرات الجينية وندش ليكون أكثر أمانًا من بروميد الإيثيديوم لتلطيخ الحمض النووي في هلام الاغاروز أو الأكريلاميد

MP Biomedicals & trade محلول إيثيديوم بروميد (10 مجم / مل)

محلول إيثيديوم بروميد (10 مجم / مل) ، درجة البيولوجيا الجزيئية

سيتيفا اميرشام & تريد ساي & تريد 3 صبغة تشبع

رائعة للتحليل متعدد الألوان ، بألوان زاهية يسهل تمييزها

مجالات الاهتمام

الأحداث والمعارض

حلول الأعمال

المؤلفات والاشتراكات أمبير

دعم العملاء

تابعنا

Fisher Scientific، Bishop Meadow Road، Loughborough، Leicestershire، LE11 5RG

& # 169 Fisher Scientific UK Ltd جميع الحقوق محفوظة. شركة ذات مسؤولية محدودة تأسست في إنجلترا.


استكشف حل البحث العلمي الخاص بنا لدراسة COVID-19

أنواع المنتجات

نحن نقدم الحلول المثلى لأبحاث علوم الحياة

تخليق الحمض النووي هو تقنية تربط أحماض ديوكسينوكليك (الأدينين ، الثايمين ، السيتوزين والجوانين) معًا لتشكيل الحمض النووي. باعتباره حجر الزاوية في علم الأحياء الجزيئي الحديث ، يلعب تخليق الحمض النووي دورًا محوريًا في مجال البيولوجيا التركيبية. بالإضافة إلى تخليق oligos القياسي ، نقدم أيضًا خدمات البحث العلمي مثل تخليق oligos الطويل ، وتخليق oligos (S-Oligo) ، وتخليق oligos المعدل ، وتخليق oligos الفلوري ، وتحقيقات PCR الكمية في الوقت الفعلي لتلبية احتياجاتك المختلفة.

يتم تصنيع الببتيدات عن طريق تفاعل التكثيف لمجموعة الكربوكسيل لحمض أميني واحد مع مجموعة أمينية من حمض أميني آخر وتستخدم على نطاق واسع في مجالات مختلفة مثل تحضير الأجسام المضادة وتطوير الأدوية وتطوير لقاح متعدد الببتيد. كل من البولي ببتيدات لدينا مصحوبة ببيانات موثوقة HPLC وقياس الطيف الكتلي ، ويتم توفير تقارير توليفية مفصلة ، ويتم إرسال المنتجات في حالة مجففة بالتجميد. يمكن للموظفين ذوي الخبرة مساعدة المستخدمين في تصميم سلاسل الببتيد وتقديم التوصيات المناسبة للاحتياجات المختلفة للمستخدمين ، مثل الأجسام المضادة ، والعلامات الخاصة ، والتوليف على نطاق واسع ، إلخ. بالإضافة إلى ذلك ، نقدم أيضًا تخليق PNA المخصص بجودة عالية.

مكتبة الببتيد هي تقنية جديدة لدراسة العلاقة بين البنية والوظيفة للبروتين. تحتوي مكتبة الببتيد على عدد كبير من الببتيدات التي تحتوي على مزيج منهجي من الأحماض الأمينية. توفر مكتبة الببتيد أداة قوية لتصميم الأدوية ، وتفاعلات البروتين البروتين ، وغيرها من التطبيقات الكيميائية الحيوية وكذلك الصيدلانية. كما أن لديها تطبيقات واسعة في فحص الأدوية ، والتحقق من صحة الهدف ، ورسم خرائط الحاتمة ، وتطوير اللقاح.

التوليف الجيني هو تقنية تخليق الجينات بطرق اصطناعية ، وهي إحدى وسائل اكتساب الجينات. بالمقارنة مع اكتساب الجينات من الكائنات الحية الموجودة ، لا يحتاج التوليف الجيني إلى قوالب وبالتالي لا يقتصر على مصدر الجينات. نحن نستخدم برنامجًا فريدًا لتصميم التوليف الجيني ، والذي يتضمن مجموعة كاملة من الأدوات لتصميم وحدات هيكلية مثالية ، وبالتالي تمكين بناء الجينات وتوليفها بشكل سريع وفعال في تفاعل واحد. من فضلك لا تكون مقيدًا بمواقع التقييد والروابط المتعددة ، سنقوم بتوليف التسلسلات الجينية المختلفة التي تحتاجها.

تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) هو طريقة مستخدمة على نطاق واسع في البيولوجيا الجزيئية ، والتي يمكنها تكرار الملايين إلى المليارات من عينات الحمض النووي المحددة بسرعة ، مما يتيح للعلماء استخراج كمية صغيرة فقط من عينات الحمض النووي لإجراء بحث مفصل. نحن نقدم مجموعة متنوعة من بوليميرات الحمض النووي (Taq ، Bst ، Pfu) ومزيجات تفاعل البوليميراز المتسلسل المقابلة ، تغطي مجموعة واسعة من السيناريوهات مثل الدقة العالية ، والخصوصية العالية ، والتضخيم السريع. توفر مجموعات سلسلة Scarlet ™ حلاً مثاليًا لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر للدم ، وتستخدم مجموعة التنميط الجيني PrimeSNP ™ طريقة تفاعل البلمرة المتسلسل التنافسي Allele Specific PCR للتنميط الجيني لعينات الحمض النووي المنقى. يتم أيضًا توفير dNTPs و NTPs عالية الجودة (مجموعة ، مزيج).

تمت دراسة الحمض النووي الريبي (RNA) ، باعتباره مادة أساسية لنقل المعلومات الجينية وتنظيم الخلايا ، على نطاق واسع في علم الأحياء الجزيئي. مثل الحمض النووي ، يتم تجميع الحمض النووي الريبي في شكل سلاسل نيوكليوتيد ولكن بخلاف الحمض النووي ، يوجد الحمض النووي الريبي في الطبيعة في شكل طيات أحادية الجديلة بدلاً من الخيوط المزدوجة المزدوجة. نحن نقدم RNasin (مثبط RNase) و M-MLV العكسي لتوفير حل كامل للمواد الخام لأبحاث الحمض النووي الريبي. تم تصميم سلسلة miAnalysis ™ للبحث الكمي في microRNA. وسلسلة VirusMag ™ مصممة لعزل الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الفيروسي أو الحمض النووي البكتيري.

في SBS Genetech ، نحن في طليعة تقديم حلول للتضخيم متساوي الحرارة على أساس منصتنا ذات المستوى العالمي. يقع Bst DNA / RNA Polymerase في قلب هذه المنصة ، وهو مزيج من بوليميراز Bst ونسخة عكسية شديدة الثبات للحرارة. بناءً على هذا الإنزيم الخاص ، قمنا بتطوير سلسلة ميكروبيدات تضخيم متساوي الحرارة مجففة بالتجميد PrimeIamp TM. هذه السلسلة عبارة عن مزيج رئيسي جاهز للاستخدام ، والذي يمكنه إجراء تضخيم متساوي الحرارة مباشرةً عند إضافة القوالب والبرايمر. مع تقنية التجفيف بالتجميد ، يتم تجميد هذه الخلطات الرئيسية بالتجميد في ميكروبيدات صلبة ، والتي يمكن نقلها وتخزينها في درجة حرارة الغرفة براحة كبيرة.

أصبحت تقنية إسكات الحمض النووي الريبي أداة قوية لدراسة وظيفة الجينات. يعتمد نجاح أي تجربة من تجارب الحمض النووي الريبي على سيرنا عالي الجودة وكاشف تعداء فعال. مع التعديل الكيميائي ، تتمتع siRNA المعدلة كيميائيًا باستقرار أعلى بكثير من siRNA الشائع. لا يؤدي التعديل الكيميائي إلى تحسين عمر سيرنا في مصل الدم وزرع الخلايا فحسب ، بل يعزز أيضًا نشاطها في المختبر. بالنسبة إلى كاشف تعداء العدوى ، يمكن استخدام كاشف تعداء siRNA الجاهز للاستخدام ، Sirnafectamine ، لمجموعة واسعة من خطوط الخلايا ، مع الحد الأدنى من السمية الخلوية وأفضل حالة خلوية بعد تعداء العدوى. نظرًا لأن Sirnafectamine سيحمي الحمض النووي الريبي أثناء العملية برمتها ، فإن التركيز المنخفض جدًا من siRNA يمكن أن ينتج كفاءة عالية في إسكات الجينات.

تعد تنقية الحمض النووي مكونًا مهمًا في البيولوجيا الجزيئية ولها مجموعة واسعة من التطبيقات في الطب والعلوم البيولوجية. تستخدم مجموعة تنقية الحمض النووي الخاصة بنا تقنية عمود هلام السيليكا من الدرجة الأولى (SiMax ™ Spin Column و SiMax ™ Genomic DNA Extraction و SiMax ™ PCR Products / Agarose Gel Purification و SiMax ™ Plasmid DNA Miniprep) وتقنية الخرز المغناطيسي (الخرز المغناطيسي VirusMag ™ ، الفواصل المغناطيسية VSep ™ ، VirusMag ™ One-Step DNA / RNA Isolation Kit ، VirusMag ™ DNA / RNA Isolation Kit) ، والتي يمكنها تنقية الحمض النووي من مصادر مختلفة بسرعة وبشكل موثوق. نقاء الحمض النووي المنقى بواسطة مجموعتنا مرتفع للغاية وهو مناسب للعديد من التطبيقات النهائية مثل تحديد التسلسل والاستنساخ والانقسام.

تُستخدم علامات الحمض النووي لتحديد الحجم التقريبي للجزيئات الموجودة على الهلام أثناء الرحلان الكهربائي ، بناءً على مبدأ أن الوزن الجزيئي يتناسب عكسيًا مع التنقل عبر مصفوفة الهلام. نحن نقدم معايير وزن جزيئي وفيرة للحمض النووي يمكن استخدامها لأطوال أجزاء مختلفة. تمت تنقية شظايا علامات الحمض النووي الخاصة بنا بشكل منفصل عن طريق تقنية خاصة ، وبالتالي فإن جودتها تتفوق على معايير الصناعة.

كريسبر (جمشتهى رعلى سبيل المثال أنامتباعد سهورت صأليندروميك رepeats) هي عائلة من سلاسل الحمض النووي الموجودة في جينومات الكائنات بدائية النواة مثل البكتيريا والعتائق. تشتمل تقنية تحرير الجينات القائمة على هذا النظام على مجموعة متنوعة من التطبيقات. هنا ، نقدم العديد من نوكليازات Cas ، و sgRNAs الاصطناعية ، و T7 Endonuclease I بجودة عالية لتحسين دقة وكفاءة تجاربك.


GreenSafe Premium (MB13201)

وصف: GreenSafe Premium عبارة عن بقعة حمض نووي جديدة يمكن استخدامها كبديل أكثر أمانًا لبروميد الإيثيديوم التقليدي للكشف عن الأحماض النووية في المواد الهلامية للأغاروز. إنه حساس مثل بروميد الإيثيديوم ويمكن استخدامه تمامًا بنفس الطريقة في الاغاروز الكهربائي للهلام. تنبعث بقعة GreenSafe Premium من التألق الأخضر عند ارتباطها بالحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. لديها اثنين من قمم الإثارة الثانوية الفلورية (≈270 نانومتر و ≈290 نانومتر) وذروة إثارة قوية واحدة عند 490 نانومتر. انبعاث التألق مشابه لبروميد الإيثيديوم عند ارتباطه بالحمض النووي عند 530 نانومتر. وبالتالي فإن صبغة GreenSafe Premium متوافقة مع مجموعة متنوعة من أدوات قراءة الهلام.

سمات:
& # 8211 يستخدم للكشف عن dsDNA و RNA
& # 8211 غير سامة وغير مطفرة وغير مسرطنة (بديل لتلطيخ بروميد الإيثيديوم)
& # 8211 حساسية عالية حتى للأجزاء الصغيرة
& # 8211 إشارة متفوقة إلى نسبة الضوضاء
& # 8211 مريحة جاهزة للاستخدام
& # 8211 متوافق مع مجموعة متنوعة من أدوات قراءة الهلام
& # 8211 لا نفايات خطرة

التطبيقات:
& # 8211 الكشف عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي في المواد الهلامية agarose عن طريق التلوين المسبق أو تلطيخ لاحق

حساسية عالية على نطاق واسع من أحجام الحمض النووي:

1٪ (وزن / حجم) هلام الاغاروز الملون بـ GreenSafe Premium

تحديد:

الجزيء المستهدف: DNA و RNA
طريقة الكشف: ضوئي
طريقة الاستخدام: أضف البقعة أثناء صب الجل أو بدلاً من ذلك يمكن تلطيخ المواد الهلامية لاحقًا
ازالة: يجب التخلص من النفايات وفقًا لأنظمة الرقابة البيئية
شروط التخزين: يحفظ في درجة حرارة الغرفة أو 4 درجات مئوية ، بعيداً عن الضوء
شروط الشحن: يتم شحنها في درجة حرارة الغرفة إلى 4 درجات مئوية

عناصر:
& # 8211 1 قارورة سعة 1 مل

1. لماذا استخدام بدائل EtBr؟
من المحتمل أن يكون بروميد الإيثيديوم (EtBr) هو الصبغة الأكثر شهرة المستخدمة لتصور الحمض النووي. نظرًا لتركيبها الكيميائي ، فإنها تتداخل في خيوط الحمض النووي لتشكل مجمعات فلورية يمكن تصورها تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية. لكن بروميد الإيثيديوم مادة مسرطنة ومطفرة محتملة ، لذلك يجب التعامل معه بعناية خاصة للغاية وعادة ما يتطلب مساحة خاصة وحصرية من البدلاء حتى لا يلوث المختبر بأكمله. نظرًا لجميع المخاطر الصحية التي ينطوي عليها العمل مع EtBr ، فقد تم تطوير العديد من بقع الحمض النووي البديلة خلال السنوات الأخيرة. هذه البدائل أقل خطورة للعمل معها وإظهار أداء تلطيخ جيد جدًا.
تفخر NZYTech بالإعلان عن مجموعة من بقعتي حمض نووي بديلين: GreenSafe Premium و GreenSafe Direct Load. حساسيتها مشابهة لـ EtBr ويمكن إجراء الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز بنفس الطريقة تمامًا كما هو الحال مع EtBr.

تحليل مقارن أولي لقوة حل COX1 و
16S-rDNA كواسمات جزيئية لتحديد القراد من البرتغال

Filipe D و Parreira R و Pereira A و Galvão N و Cristovão MJ و Nunes M و Vieira LM و Campino L و Maia و C
علم الطفيليات البيطرية: دراسات إقليمية و Repors , 2021

استجابة الجسم المضاد لفيروس توسكانا وحمى ذبابة الرمل في القطط المعرضة بشكل طبيعي لدغات ذبابة الرمل الفاصدة في البرتغال
Pereira A، Nazli A، Cristóvão JM، Vilhena H، Martins A، Cachola P، Henriques J، Coimbra M، Catarino A، Lestinova T، Spitzova T، Volf P، Campino L، Charrel R، Maia C
الكائنات الدقيقة , 2019

استجابة الجسم المضاد ل الفاصدة perniciosus يرتبط اللعاب في القطط المعرضة بشكل طبيعي لذباب الرمل الفليبوتومين بشكل إيجابي الليشمانيا عدوى
Pereira A، Cristóvão JM، Vilhena H، Martins A، Cachola P، Henriques J، Coimbra M، Catarino A، Lestinova T، Spitzova T، Volf P، Campino L، Maia C
الطفيليات وناقلات أمبير , 2019

تم اكتشاف البكتيريا والبروتوزوا التي تنقلها القراد في القراد الذي تم جمعه من الحيوانات الأليفة والحياة البرية في وسط وجنوب البرتغال
بيريرا A، Parreira R، Cotão AJ، Nunes M، Vieira ML، Azevedo F، Campino L، Maia C
القراد والأمراض التي تنقلها القراد, 2018

التصنيف الجزيئي وصفات الفوعة ومقاومة مضادات الميكروبات للمكورات العنقودية للقدم السكري
Mottola C، Semedo-Lemsaddek T، Mendes JJ، Melo-Cristino J، Tavares L، Cavaco-Silva P، Oliveira M
مجلة العلوم الطبية الحيوية, 2016

تنظيم الإستروجين لناقلات البيكربونات من عائلة SLC4 في خلايا الفئران سيرتولي
برناردينو آر إل ، مارتينز إيه دي ، جيسوس تي تي ، سا آر ، سوزا إم ، ألفيس إم جي ، أوليفيرا بي إف
مول الخلية الحيوية , 2015

العوامل البكتيرية والأولية للأمراض التي تنقلها الكلاب في دم الكلاب الأليفة والضالة من جنوب البرتغال
Maia C و Almeida B و Coimbra M و Fernandes MC و Cristóvão JM و Ramos C و Martins  و Martinho F و Silva P و Neves N و Nunes M و Vieira ML و Cardoso L و Campino L
الطفيليات وناقلات أمبير , 2015

تنقية لقاح الأنفلونزا القائم على حمض الديوكسي ريبونوكلييك باستخدام كتلة أغماتين
Bicho D و Caramelo-Nunes C و Sousa A و Sousa F و Queiroz JA و Tomaz CT
ي تشروماتوجر ب أناليت تكنول علوم الحياة بيوميد , 2016


بدائل EtBr

SERVA DNA Stain Clear G هو نسخة جديدة غير مسرطنة وأكثر حساسية وملاءمة من SERVA DNA Stain G. ويمكن استخدامه بدلاً من بروميد الإيثيديوم شديد السرطانات للكشف عن الحمض النووي في المواد الهلامية الاغاروز.

ينبعث SERVA DNA Stain Clear G مضانًا أخضر عندما يرتبط بالحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. لديها اثنين من قمم الإثارة الثانوية الفلورية (حوالي 270 نانومتر و 295 نانومتر) وذروة إثارة قوية واحدة تتمحور حول 490 نانومتر. انبعاث الفلورة مشابه لـ EtBr في كاليفورنيا. 530 نانومتر عندما يرتبط بالحمض النووي.
يمكن تطبيق بروتوكولات ما قبل الصب والتلوين.
1 مل من هذه البقعة يكفي لـ 17 & # 8211 25 لتر من هلام الاغاروز.

معلومة اضافية

معلومات الطلبية

AMRESCO & # 8211 EZ-Vision ™ ، بديل آمن لـ EtBr

EZ-VISION ™ عبارة عن كاشف فلوري غير مطفر ينتج عنه تصور فوري لنطاقات الحمض النووي عند الإضاءة فوق البنفسجية لجل الاغاروز (*). يتم توفير منتجات EZ-VISION ™ في مخزن تحميل الحمض النووي 6X من AMRESCO.
يحتوي EZ-VISION ™ Three على 3 أصباغ تتبع تنتقل بسرعة 4000 نقطة في البوصة و 400 نقطة في البوصة و 10 نقاط في البوصة. يتمتع EZ-VISION ™ One بجميع مزايا EZ-VISION ™ Three ، ويحتوي فقط على صبغة تتبع سريعة واحدة تنتقل بسرعة 10 نقاط أساس في 1 ٪ هلام الاغاروز. يشكل EZ-VISION ™ مركبًا محكمًا مع عينة الحمض النووي وينتقل معه أثناء الرحلان الكهربي. يمكن تصور نطاقات الحمض النووي مباشرة بعد التشغيل عن طريق وضع الهلام على جهاز معياري للأشعة فوق البنفسجية. يتم التخلص تمامًا من تلطيخ ما بعد التشغيل.

EZ-VISION ™ غير مسبب للطفرات ويزيل اعتبارات الشحن والمناولة الخطرة. إنه مثالي للتطبيقات التي تحتاج إلى تصور سريع لنطاق الحمض النووي وللبيئات التي تتطلب بديلاً آمنًا وغير خطير لبروميد الإيثيديوم.

(*) EZ-VISION ™ غير قابل للتحلل مع هلام الأكريلاميد ولا لتلطيخ الحمض النووي الريبي.


على الرغم من استخدام بروميد الإيثيديوم بشكل روتيني لتلطيخ الحمض النووي في المواد الهلامية ، فقد تم استخدام بروميد الإيثيديوم أيضًا للكشف عن معقدات البروتين والحمض النووي في فحوصات إزاحة النطاق ولمراقبة جزيئات الحمض النووي المفردة أثناء الرحلان الكهربائي للهلام. يعد تلطيخ ssDNA أو RNA أقل حساسية ، وغالبًا ما يتطلب 10 مرات أكثر من الحمض النووي للكشف المكافئ.

نقدم محلول مائي 10 مجم / مل من بروميد الإيثيديوم ، والذي يمكن استخدامه على النحو المنصوص عليه أو تخفيفه إلى التركيز المطلوب.

تعامل مع EtBr بحذر
العيب الرئيسي لبروميد الإيثيديوم هو أنه مطفر قوي. يجب التعامل مع محلول بروميد الإيثيديوم بحذر شديد وإزالة التلوث قبل التخلص منه.


صبغة الأحماض النووية الماسية هي بديل آمن واقتصادي لبروميد الإيثيديوم

في هذه الدراسة ، قمنا بمقارنة الخصائص المطفرة لصبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة وبروميد الإيثيديوم باستخدام اختبار أميس ، وهو اختبار بيولوجي لتحديد إمكانية الطفرات الجينية للمركب. لقد وجدنا أن صبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة هي أقل مطفرة بشكل ملحوظ من بروميد الإيثيديوم بالتركيزات المستخدمة عادةً في تلطيخ المواد الهلامية.

مقدمة

منذ الستينيات ، استخدم العلماء الفصل الكهربائي للهلام لفصل الأحماض النووية حسب الحجم ، واستخدم بروميد الإيثيديوم لتلطيخ وتصور الأحماض النووية بعد الرحلان الكهربائي (1). لقد أظهرنا سابقًا أن صبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة هي صبغة حساسة يمكن استخدامها لتصور مجموعة واسعة من تركيزات وأحجام كل من الحمض النووي والحمض النووي الريبي بعد الرحلان الكهربائي باستخدام نفس المعدات (2). يعد الاستخدام الآمن للكواشف المختبرية أمرًا بالغ الأهمية ، وهناك حركة متزايدة لتقليل كمية الكواشف السامة المستخدمة يوميًا في المختبر.

بروميد الإيثيديوم هو عامل متشابك له خصائص مطفرة معروفة. من ناحية أخرى ، فإن صبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة هي عامل فلورسنت يرتبط بالأخاديد الموجودة في التركيب (الهياكل) الحلزونية للأحماض النووية. في هذه الدراسة ، تم تحديد الطفرات الجينية (السمية الجينية) لصبغة الأحماض النووية الماسية والتجارية ومقارنتها مع تلك الموجودة في بروميد الإيثيديوم باستخدام اختبار Ames MPF & trade Assay ، وهو اختبار تم استخدامه لتحديد الطفرات الجينية للمواد الكيميائية منذ أوائل السبعينيات وما زال يستخدم على نطاق واسع اليوم.

المواد

أساليب

تم إجراء اختبار السمية بواسطة Apredica (Watertown ، MA) ، قسم أبحاث تعاقدية من Cyprotex ، باستخدام Ames MPF & trade Assay (3). تم توفير مخزون مركب (الماس والتجارة الصبغة النووية والإيثيديوم بروميد) إلى Apredica ، وتم تخفيفه بعد ذلك بنسبة 1:25 في PBS ، ثم تم تخفيفه بشكل متسلسل بنسبة 1:10 عبر 6 جرعات للمقايسة في ثلاث نسخ في اختبار Ames المصغر MPF & trade Assay. تطلب صبغة الأحماض النووية والماس للتجارة تخفيفًا أوليًا إضافيًا بنسبة 1:10 في برنامج تلفزيوني لتحقيق مخزون قابل للذوبان للاختبار.

تم اختبار سلالتين من البكتيريا: السالمونيلا تيفيموريوم تحمل الطفرات في المشغل للتخليق الحيوي للحامض الهيستيدين 1) سلالة TA98 (طفرة انزياح الإطار) و 2) سلالة TA100 (استبدال زوج القاعدة). تم اختبار سلالات في غياب ووجود مستخلص كبد الفئران S9 لتنشيط التمثيل الغذائي ، والتي يمكن أن تحول بعض المواد الكيميائية إلى مطفرة. تم تحضين البكتيريا بالمركبات في وسط مع حد أدنى من الهيستدين لمدة 90 دقيقة (تكفي لمضاعفة جيلين) ، ثم نقلت إلى وسط خالي من الهيستدين وزرعها لمدة 48 ساعة إضافية. تمت مراقبة الارتدادات الطبيعية بدون مركب (التحكم في السيارة فقط) ، ن = 9. وفقًا لمقايسة Ames MPF & trade ، تم تحضين البكتيريا في الثقافة السائلة في وجود مؤشر لوني لدرجة الحموضة. كان التغير في الرقم الهيدروجيني مؤشرا على نمو البكتيريا وتم رصده بواسطة القياس الطيفي.

تمت مقارنة النمو في وجود المركب بالتحكم في السيارة فقط. تم تعيين انحرافين قياسيين فوق عنصر التحكم في السيارة فقط كخط أساس. تم تصنيف الجرعات المركبة التي أعطت نموًا كبيرًا فوق خط الأساس (كما هو محدد بواسطة P & lt0.01 بواسطة اختبار T أحادي الجانب) على أنها مطفرة (سامة للجينات). تم تصنيف الجرعات المركبة التي أعطت نموًا كبيرًا دون خط الأساس (كما هو محدد بواسطة P & lt0.01 بواسطة اختبار T أحادي الجانب) على أنها سامة للخلايا (تم تثبيط النمو الكلي بحيث تعذر تحديد الطفرات الجينية).

نتائج

قمنا بتقييم السمية المحتملة لصبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة باستخدام Ames MPF & trade Assay وقارننا النتائج بنتائج بروميد الإيثيديوم ، وهو بقعة معروفة من الأحماض النووية المسببة للسرطان والمطفرة. استخدمنا سلسلة تخفيف 1:10 لتشمل تركيزات الاستخدام الموصى بها لكل من الأصباغ.

يتوفر بروميد الإيثيديوم عادةً بمخزون 10 مجم / مل ويستخدم لتلوين الهلام عند

0.5 ميكروغرام / مل. لقد ثبت أنه مطفر من خلال اختبار أميس (3). كانت سامة للخلايا (تمنع نمو الخلفية بالكامل) عند أعلى الجرعات المختبرة والسمية الجينية ضمن نطاق تركيزات الاستخدام النموذجي (الشكل 1).

الشكل 1. تم قياس سمية بروميد الإيثيديوم بواسطة مقايسة Ames MPF ™. تم اختبار كل جرعة مركبة مع سلالتين من البكتيريا (TA98 و TA100) في غياب ووجود مستخلصات كبد الفئران S9. عرض متوسط ​​العينات الثلاثية. يشار إلى الجرعات ضمن نطاق الاستخدام المعتاد (0.4 و 4 ميكروغرام / مل). تمت مقارنة الجرعات المركبة بخط الأساس للتحكم في السيارة (ن = 9). يشار إلى الجرعات التي تظهر نموًا كبيرًا أعلى (السمية الجينية) أو أقل من خط الأساس (السمية الخلوية) (على النحو الذي تحدده P & lt0.01 بواسطة اختبار T غير المزدوج أحادي الجانب).

يتم توفير صبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة أيضًا بتركيز عالٍ مع تخفيف الاستخدام الموصى به بنسبة 1: 10000. كمخزون مركّز ، كانت صبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة أيضًا سامة للخلايا ، ولكن عند استخدام التخفيف الموصى به ، لم يتم اكتشاف أي سمية (الشكل 2). تم الكشف عن بعض السمية الجينية عند التخفيف الوسيط (1: 1000) ، ولكن فقط عند 7٪ من المستوى الذي تم قياسه لبروميد الإيثيديوم.

الشكل 2. سمية صبغة الأحماض النووية الماسية تم قياسها بواسطة Ames MPF ™ Assay. تم اختبار كل جرعة مركبة مع سلالتين من البكتيريا (TA98 و TA100) في غياب ووجود مستخلصات كبد الفئران S9. تم توفير صبغ المخزون عند 23.5X بالنسبة للمخزون التجاري (Cat. # H1181) ، ولكن تم تقريبه إلى 25X للإبلاغ عن البساطة. عرض متوسط ​​العينات الثلاثية. يشار إلى جرعة الاستخدام الموصى بها (0.0001 عامل تخفيف). تمت مقارنة الجرعات المركبة بخط الأساس للتحكم في السيارة (ن = 9). يشار إلى الجرعات التي تظهر نموًا كبيرًا أعلى (السمية الجينية) أو أقل من خط الأساس (السمية الخلوية) (على النحو الذي تحدده P & lt0.01 عن طريق اختبار T أحادي الجانب).

استنتاج

صبغة الأحماض النووية الماسية والتجارة ليست سامة للجينات أو سامة للخلايا بشكل واضح عند التخفيف 1: 10000 الموصى به لتلوين الهلام ، كما هو محدد بواسطة Ames MPF & trade Assay. هذا على عكس بروميد الإيثيديوم ، وهو سام للجينات بتركيزات استخدام نموذجية (0.5 ميكروغرام / مل). كلا الأصباغ سامة للخلايا ، ومع ذلك ، في تركيزات المخزون المتاحة تجارياً. تشير هذه البيانات إلى أن صبغة الأحماض النووية للماس والتجارة أقل سمية بشكل ملحوظ من بروميد الإيثيديوم ضمن التركيزات النموذجية المستخدمة في صبغ المواد الهلامية.


الملخص

يعد الفصل الكهربي للحمض النووي والتلطيخ إجراءً شائعًا في مختبرات الكيمياء الحيوية ، ولكن استخدام بروميد الإيثيديوم (EB) للكشف عن الحمض النووي أمر مقلق لأن EB مادة مطفرة ومسرطنة محتملة. تم تقييم خمسة بقع بديلة للكشف عن الحمض النووي ، والسلامة ، والتكلفة ، وسهولة الاستخدام: BlueView ، methylene blue ، Carolina Blu ، DAPI (4 '، 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride: hydrate) ، و SYBR Green I. BlueView ، Carolina Blu و methylene blue ليست حساسة بدرجة كافية لاكتشاف كميات ميكروغرام من الحمض النووي المستخدمة في العديد من الإجراءات. ومع ذلك ، فإن DAPI و SYBR Green I هما بدائل تلطيخ جيدة لبروميد الإيثيديوم من حيث أن لديهم حساسية مماثلة وكلاهما سهل الاستخدام. يعد SYBR Green I أغلى من EB أو DAPI ، ومع ذلك ، تشير بيانات السلامة المحدودة إلى أن SYBR Green I هو أكثر البقع أمانًا.


كيف يكون SYBR Safe DNA gel stain أفضل من طريقة تلطيخ بروميد الإيثيديوم التقليدية؟

SYBR الآمن هو صبغة سيانين تستخدم كحمض نووي وصمة في علم الأحياء الجزيئي. SYBR الآمن يربط الحمض النووي. النتيجة الحمض النووي-مركب الصبغ يمتص الضوء الأزرق (و lambdaالأعلى = 509 نانومتر) ويبعث الضوء الأخضر (& lambdaالأعلى = 524 نانومتر).

بجانب ما سبق ، كيف يصبغ إيثيديوم بروميد أو SYBR Green DNA؟ بروميد الايثيديوم (EtBr) و SYBR الأخضر أنا نكون هلام الحمض النووي صبغات وتستخدم عادة مع إضاءة الأشعة فوق البنفسجية. EtBr يؤدي بشكل تفضيلي إلى حدوث طفرات تغيير الإطارات ولكن فقط في وجود نظام تنشيط استقلابي خارجي ، بينما SYBR الأخضر أنا يكون مطفر ضعيف للغاية يؤدي إلى حدوث طفرات تغيير الإطارات.

إلى جانب ذلك ، ما هي آلية تلطيخ الحمض النووي باستخدام أصباغ EtBr أو SYBR Safe لماذا تعتبر مطفرة محتملة؟

ال SYBR الأخضر الأول والثاني صبغات (مرة أخرى ، تم تسويقها بواسطة المجسات الجزيئية) تم تحسينها لأغراض مختلفة. لأن أنهم ربط الحمض النووي, أنهم لا تزال تعتبر مطفرة محتملة و بسبب ذلك، أنهم يجب التعامل معها بحذر.

لماذا يستخدم العلماء بروميد إيثيديوم؟

بروميد الايثيديوم. بروميد الاثيديوم هو جزيء شائع تستخدم لتصور الحمض النووي في تجارب الاغاروز الكهربائي للهلام. عندما تكون يكون تتعرض للأشعة فوق البنفسجية ، بروميد الايثيديوم يتألق. وبالتالي ، توفر هذه المادة الكيميائية وسيلة لتمييز جزيئات الحمض النووي ووسيلة لتصورها.


ملخص

من أجل دراسة الأحماض النووية ، يجب أن يكون لدينا طريقة لفصلها وتعريفها.

تقنية الفصل الأكثر شيوعًا هي الرحلان الكهربائي للهلام. تنفصل قطع الحمض النووي عن هلام بناءً على الحجم.

يمكن تصوير الحمض النووي على مادة هلامية عبر التصوير الشعاعي الذاتي ، وهو إجراء يقوم فيه الحمض النووي بدمج النيوكليوتيدات المشعة.

يمكن أيضًا رؤية الحمض النووي باستخدام الفلورة ، غالبًا مع مركب يسمى بروميد إيثيديوم ، والذي يضيء باللون البرتقالي تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية عند ارتباطه بالحمض النووي.


شاهد الفيديو: النيوكليوتيدة والفرق بين لريبوز والديؤكسى ريبوز (كانون الثاني 2022).