معلومة

تعريف الصبغ - اختبار الاختزال؟


هل يمكن لأحد أن يقدم شرحًا بسيطًا أو تعريفًا لما هو ملف اختبار تقليل الصبغة يكون.


اختبارات تقليل الصبغة (ويبدو أن هناك الكثير من الاختبارات المختلفة) هي ببساطة فحوصات يتم فيها إزالة لون الصبغة لإعطائك مؤشرًا مرئيًا لما إذا كانت هناك عملية معينة تحدث أم لا. هنا يمكنك العثور على مثال لاختبار تقليل الصبغة باستخدام Methylene Blue و Reazurin الذي يقيس بشكل غير مباشر الكثافة البكتيرية في الحليب والقشدة. انظر هذا الكتاب جوجل لمزيد من المعلومات.


اختبارات تقليل الصبغة: الميثيلين الأزرق والريسازورين

من: Atherton، H. V. and Newlander، J.A 1977. الكيمياء واختبار منتجات الألبان. 4th Edn. AVI، Westport، CT.

اختبار اختزال الميثيلين الأزرق

يعتمد اختبار اختزال الميثيلين الأزرق على حقيقة أن اللون المنقول إلى الحليب عن طريق إضافة صبغة مثل أزرق الميثيلين سوف يختفي بسرعة أو أقل. يؤدي إزالة الأكسجين من الحليب وتكوين مواد مختزلة أثناء التمثيل الغذائي البكتيري إلى اختفاء اللون. الوكالات المسؤولة عن استهلاك الأكسجين هي البكتيريا. على الرغم من أن أنواعًا معينة من البكتيريا لها تأثير أكبر بكثير من الأنواع الأخرى ، فمن المفترض عمومًا أنه كلما زاد عدد البكتيريا في الحليب ، كلما كان استهلاك الأكسجين أسرع ، وبالتالي سيختفي اللون مبكرًا. وبالتالي ، يتم أخذ وقت الاختزال كمقياس لعدد الكائنات الحية في الحليب على الرغم من أنه من المحتمل في الواقع أنه مقياس للتفاعلات الأيضية الكلية التي تحدث على سطح الخلية للبكتيريا.

فقد اختبار اختزال الميثيلين الأزرق الكثير من شعبيته بسبب ارتباطه المنخفض بالإجراءات البكتيرية الأخرى. هذا صحيح بشكل خاص في تلك العينات التي تظهر تكاثر واسع النطاق للأنواع المؤثرة على العقل.

الجهاز: - تتكون المعدات اللازمة من أنابيب اختبار مزودة بسدادات مطاطية ، أو ماصة أو قحافة متدرجة لتوصيل 10 مل من الحليب وحمام مائي للحفاظ على العينات عند 35 درجة مئوية إلى 37 درجة مئوية. يجب أن يحتوي الحمام على كمية من الماء تكفي لتسخين العينات إلى 35 درجة مئوية في غضون 10 دقائق بعد دخول الأنابيب إلى الماء ويجب أن يكون لها بعض الوسائل لحماية العينات من الضوء أثناء فترة الحضانة. إذا تم استخدام غرفة الهواء الساخن ، فيجب تسخين العينات إلى 35 درجة مئوية في حمام مائي لأن الهواء الدافئ سيسخن الحليب ببطء شديد.

تحتوي الأقراص الجافة على ثيوسيانات الميثيلين الأزرق ويمكن الحصول عليها من أي من دور توريد المختبرات المعتادة. يجب أن تكون معتمدة من قبل لجنة توحيد معايير البقع البيولوجية. يتم تحضير المحلول عن طريق التعقيم أو غلي 200 مل من الماء المقطر مؤقتًا في دورق سدادة مقاوم للضوء (كهرماني) ثم إضافة قرص واحد من الميثيلين الأزرق إلى دورق الماء الساخن. يجب إذابة القرص تمامًا قبل تبريد المحلول. يمكن تخزين المحلول في سدادة أو قارورة كهرمانية أو زجاجة كهرمانية في الظلام. يجب تحضير المحلول الطازج أسبوعيا.

الإجراء في الاختبار. - يوصى بالإجراءات التالية.

  1. عقم جميع الأواني الزجاجية والسدادات المطاطية سواء في الأوتوكلاف أو في الماء المغلي. تأكد من أن جميع الأواني الزجاجية نظيفة كيميائيًا.
  2. قم بقياس 1 مل من محلول الميثيلين الأزرق ثيوسيانات في أنبوب اختبار.
  3. أضف 10 مل من الحليب وسدادة.
  4. يمكن وضع الأنابيب في الحمام المائي على الفور أو يمكن تخزينها في الثلاجة في درجة حرارة من 0 إلى 4 درجة مئوية لفترة حضانة أكثر ملاءمة. عندما تكون جاهزًا لإجراء الاختبار ، يجب رفع درجة حرارة العينات إلى 35 درجة مئوية في غضون 10 دقائق.
  5. عندما تصل درجة الحرارة إلى 36 درجة مئوية ، اقلب الأنابيب ببطء عدة مرات لضمان دهن موحد. لا تهز الأنابيب. سجل هذا الوقت كبداية فترة الحضانة. غطاء لمنع الضوء.
  6. فحص عينات لإزالة اللون بعد 30 دقيقة من الحضانة. قم بعمل قراءات لاحقة على فترات زمنية بعد ذلك.
  7. بعد كل قراءة ، قم بإزالة الأنابيب المزالة اللون ثم قم ببطء بعمل انعكاس كامل للأنابيب المتبقية.
  8. سجل وقت التقليل في الساعات الكاملة بين آخر انعكاس وإزالة اللون. على سبيل المثال ، إذا كانت العينة لا تزال زرقاء بعد L 5 ساعات ولكن تمت إزالة اللون (أبيض) عند قراءة 2.5 ساعة ، فسيتم تسجيل وقت اختزال الميثيلين الأزرق على أنه 2 ساعة. يعتبر إزالة اللون مكتملاً عندما يختفي أربعة أخماس اللون.

التصنيف. - تم إدراج التصنيف المقترح.

الصنف 1. ممتاز ، لا يزيل اللون خلال 8 ساعات.

الصنف 2. جيد ، إزالة اللون في أقل من 8 ساعات ولكن ليس أقل من 6 ساعات.

الصنف 3. عادل ، إزالة اللون في أقل من 6 ساعات ولكن ليس أقل من ساعتين.

الصنف 4. ضعيف ، زوال اللون في أقل من ساعتين.

العوامل التي تؤثر على الاختبار. - تؤثر العديد من العوامل على اختبار اختزال الميثيلين الأزرق وبالتالي يجب أن تكون خطوات التشغيل موحدة.

نظرًا لأنه يجب استخدام محتوى الأكسجين قبل اختفاء اللون ، فإن أي تلاعب يزيد من الأكسجين يؤثر على الاختبار. يحتوي الحليب البارد على كمية أكسجين أكثر من الحليب الدافئ ، حيث يؤدي صب الحليب ذهابًا وإيابًا من حاوية إلى أخرى إلى زيادة الكمية ، وفي وقت الحلب يمكن امتصاص الكثير من الأكسجين.

يؤثر نوع الكائنات الحية على معدل التخفيض. يبدو أن البكتيريا القولونية هي أسرع الكائنات الحية اختزالًا ، تليها بكتيريا Streptococcus lactis ، وبعض المكورات العقدية البرازية ، وبعض المكورات الدقيقة. تعمل البكتيريا الحرارية والبكتيريا النفسية على تقليل الميثيلين الأزرق ببطء شديد على الإطلاق. يؤثر عدد كبير من الكريات البيض على وقت التخفيض ماديًا.

يسرع الضوء في الحد ، وبالتالي يجب تغطية الاختبارات. يجب أن يكون تركيز الصبغة متجانسًا حيث يؤدي التركيز المتزايد إلى إطالة وقت التخفيض. تؤدي زيادة درجة حرارة الحضانة إلى زيادة نشاط البكتيريا وبالتالي تقصير وقت التقليل.

يؤدي دهن عينات الاختبار إلى إزالة عدد من الكائنات الحية من جسم الحليب وإحضارها إلى السطح مع زيادة الدهون. هذا العامل يسبب اختلافات في وقت التخفيض ، لأن البكتيريا ليست موزعة بالتساوي. زادت دقة الاختبار ، وتقصير وقت التخفيض ، وزاد اللون أكثر اتساقًا إذا تم قلب العينات بشكل دوري أثناء الحضانة.

اختبار Resazurin

يتم إجراء اختبار resazurin على غرار اختبار اختزال الميثيلين الأزرق مع حكم الجودة بناءً على اللون الناتج بعد فترة الحضانة المحددة أو على الوقت المطلوب لتقليل الصبغة إلى نقطة نهاية معينة. تم اقتراح تعديلات عديدة. الأكثر شيوعًا هما "اختبار ساعة واحدة" و "اختبار القراءة الثلاثية" بعد ساعة ، وساعتين ، وثلاث ساعات من الحضانة. التعديلات الأخرى لها قيمة في تطبيقات محددة.

إجراء اختبار ريسازورين كالتالي: تحضير محلول ريسازورين عن طريق إذابة قرص واحد من ريسازورين (محتوى الصبغة / قرص ، 11 مجم تقريبًا ، معتمد من لجنة البقع البيولوجية) في 200 مل من الماء المقطر الساخن كما تم في اختبار الميثيلين الأزرق . ضع 1 مل من محلول الصبغة في أنبوب اختبار معقم ، ثم أضف 10 مل من العينة. قم بسد الأنبوب ، وضعه في الحاضنة ، وعندما تصل درجة الحرارة إلى 36 درجة مئوية ، اقلب الأنبوب لخلط الحليب والصبغة. احتضان عند 36 درجة مئوية يتم فحص الأنابيب وتصنيفها في نهاية ساعة في "اختبار ساعة واحدة" أو في نهاية ثلاث فترات متتالية كل ساعة في "اختبار القراءة الثلاثية". العلاقات التالية بين اللون والجودة مقبولة بشكل عام:

لون العينة: جودة الحليب

  1. الأزرق (بدون تغيير اللون): ممتاز
  2. أزرق إلى بنفسجي غامق: جيد
  3. البنفسجي العميق إلى الوردي الغامق: متوسط
  4. وردي غامق إلى وردي مائل للبياض: ضعيف
  5. الأبيض: سيء

قد يكون اختبار ريسازورين أداة قيمة لتوفير الوقت إذا تم إجراؤه بشكل صحيح وتفسيره بذكاء ، ولكن يجب استكماله بالفحص المجهري.

النتائج بشأن موثوقية اختبارات ريززورين متضاربة. وجدت إحدى الدراسات في مقارنة اختبار resazurin مع طريقة Breed المجهري على 235 عينة أن الاختبار موثوق به. تشير تقارير أخرى إلى أن اختبار ريسازورين هو مؤشر غير موثوق به للجودة البكتريولوجية في الحليب. يتمثل أحد الانتقادات الرئيسية لهذه الطريقة في أن وقت تقليل الريسازورين للحليب المعبأ المبرد عند درجة حرارة 20 درجة مئوية أو 37 درجة مئوية طويل جدًا بحيث لا يكون له أي قيمة في تقييم التلف البكتيري للحليب المخزن.

تشير الطرق القياسية إلى أنه لا ينبغي تحت أي ظرف من الظروف الإبلاغ عن نتائج اختبارات الميثيلين الأزرق أو اختبارات ريزازورين من حيث أعداد البكتيريا. تم وصف إجرائي تقليل الصبغة بمزيد من التفصيل في الفصل 15 من الإصدار الثالث عشر للطرق القياسية التي جمعتها جمعية الصحة العامة الأمريكية.


صبغة

استخدم Wiemann النهج لتحديد الصبغات في بيض الديناصورات.

تحتاج الصبغة لامتصاص الضوء بأطوال موجية مماثلة لتقليل الضوضاء الداخلية.

تمتص الصبغة s - الكلوروفيل ، في النباتات الخضراء - الضوء وتنقل الطاقة إلى مركز التفاعل ، حيث يبدأ إنتاج الطاقة الكيميائية لاستخدام الخلية.

يجمع الأكسجين مع صبغة تسمى لوسيفيرين لتوليد الضوء.

هذا الضوء ناتج عن الصبغة التي تعطي اللون المرجاني.

على الرغم من أن المعدات هي نفسها ، يستخدم فنان الوشم الحبر ، ونستخدم الصباغ.

The Daily Pic: هل مطبوعات YBA حول لون الصباغ أم لون النقود؟

تبدو ماريامو أصغر بكثير من سنواتها ، ومع ذلك فإن بشرتها البيضاء الخالية من الصبغات أصبحت جلدية من الشمس.

لو تم رسم الصورة على القماش بواسطة مزور ، لبقيت آثار طلاء الصبغة على السطح.

تحدث بشكل عام معًا ، لكن الصباغ ليس نادرًا بمفرده.

الأشكال الأقدم هي أجسام عديمة اللون أكبر تحتوي على حبيبات من الصباغ البني.

تم تزيين الأشكال ، إلى جانب تحديدها بالنقاط ، في كل مكان بنفس الصبغة في أحزمة عرضية منقطة.

كانت الجدران مطلية بالجص الناعم ، أبيض وثابت - دليل على العصور القديمة - ومزينة بشرائط من صبغة حمراء زاهية.

ثم يُفرك وجه الجدار بقطعة طوب ناعمة من نفس اللون ، أو قد يتم تلوين العمل بصبغة.


موردانتس

جعل الحرفيون ذوو المهارات العالية مع الصيغ السرية الخاضعة لحراسة مشددة الصباغة تجارة محمية جيدًا. كان تكوين الألوان المختلفة عن طريق مزج الأصباغ الحمراء والزرقاء والأصفر معروفًا جيدًا في العصور القديمة ، كما كان استخدام الأملاح المعدنية للمساعدة في الاحتفاظ بالأصباغ على المادة المرغوبة وتغيير الألوان الناتجة. لا يمكن تطبيق الأصباغ الطبيعية مباشرة على القطن ، على عكس الصوف والحرير ، على الرغم من أنه يمكن صبغ القطن عن طريق الوعاء أو عن طريق المعالجة المسبقة بأملاح غير عضوية تعرف باسم موردانتس (من اللاتينية موردير، تعني "لدغة"). يتم امتصاصها على الألياف وتتفاعل مع الصبغة لإنتاج شكل أقل قابلية للذوبان يتم تثبيته على القماش. الشب ، كال (SO4)2 × ح2O ، وكذلك أملاح الحديد والنحاس والقصدير كانت من الموردات القديمة الشائعة. لا شك أن العمليات السرية تضمنت مكونات أخرى لتحسين النتائج النهائية. تم استخدام موردانتس أيضًا لتغيير الألوان المنتجة من صبغة واحدة. على سبيل المثال ، المعالجة بهيدروكسيد الألومنيوم Al (OH)3، قبل الصباغة بالأيزارين ينتج أحمر تركيا ، الأحمر التقليدي لزي الجيش البريطاني والفرنسي. يعطي Alizarin ألوانًا بنفسجية مع مواد مغنيسيوم ، وأحمر أرجواني مع مواد كالسيوم ، وأزرق مع بقايا الباريوم ، وأسود بنفسجي مع أملاح حديدية. حوالي عام 1850 ، تم العثور على أملاح الكروم ، المستخدمة كمواد ، لتوفير احتباس فائق للصبغة ، ومع مرور الوقت ، لا تزال تستخدم على نطاق واسع مواد الكروم الأخرى المستخدمة على نطاق واسع للصوف ، وإلى حد ما ، للحرير والنايلون.


السلامة والآثار الجانبية

في حالات نادرة ، يكون لدى الأشخاص ردود فعل تحسسية تجاه المواد المتباينة. من الضروري أن تتواصل جيدًا مع طبيبك. أخبرهم عن أي نوع من أنواع الحساسية أو الأمراض أو الأدوية التي لديك. إذا كنت تعاني من حساسية تباين معروفة - أو كنت في خطر - فإن طاقم المستشفى سوف يتخذ كل الاحتياطات لحمايتك من أي رد فعل سلبي.

نادرًا ما يواجه المرضى آثارًا جانبية خفيفة من تباين التصوير الطبي مثل الغثيان والإسهال. لكن معظم الناس لا يتفاعلون على الإطلاق. إذا كنت تتلقى صبغات متباينة لفحص التصوير الطبي ، فتأكد من شرب الكثير من الماء بعد ذلك. سوف يطرد جسمك التباين بشكل طبيعي.

لمعرفة المزيد حول إجراءين شائعين يستخدمان مواد تباين ، ألق نظرة على مقالتنا عن التصوير بالرنين المغناطيسي مقابل التصوير المقطعي المحوسب. إذا كنت & # 8217 مهتمًا بإجراء فحص في نظام UVA الصحي ، فاتصل بـ 1.434.243.0321 لإعداد استشارة اليوم.


كيف يعمل صبغ غرام؟

يتضمن تلطيخ الجرام ثلاث عمليات: التلوين بصبغة قابلة للذوبان في الماء تسمى البنفسجي الكريستالي ، وإزالة اللون ، والتلوين المضاد ، عادةً باستخدام سافانين. بسبب الاختلافات في سمك طبقة الببتيدوغليكان في غشاء الخلية بين البكتيريا موجبة الجرام والبكتيريا سالبة الجرام ، تحتفظ البكتيريا الموجبة للجرام (مع طبقة ببتيدوغليكان أكثر سمكًا) بصبغة البنفسج الكريستالية أثناء عملية إزالة اللون ، بينما تفقد البكتيريا سالبة الجرام صبغة البنفسج الكريستالية وبدلاً من ذلك يتم تلطيخها بواسطة safranin في عملية التلوين النهائية. تتضمن العملية ثلاث خطوات:

  1. الخلايا ملطخة بصبغة الكريستال البنفسجي. بعد ذلك ، يضاف محلول اليود Gram & # 039 s (اليود ويوديد البوتاسيوم) لتشكيل معقد بين البنفسجي البلوري واليود. هذا المركب هو جزيء أكبر من صبغة الكريستال البنفسجي الأصلية واليود وغير قابل للذوبان في الماء.
  2. تتم إضافة مزيل اللون مثل الكحول الإيثيلي أو الأسيتون إلى العينة ، مما يؤدي إلى تجفيف طبقة الببتيدوغليكان ، وتقليصها وشدها. مركب اليود البنفسجي البلوري الكبير غير قادر على اختراق طبقة الببتيدوغليكان المشدودة ، وبالتالي فهو محاصر في الخلية في البكتيريا موجبة الجرام. على العكس من ذلك ، يتحلل الغشاء الخارجي للبكتيريا سالبة الجرام وتكون طبقة الببتيدوغليكان الرقيقة من الخلايا السالبة الجرام غير قادرة على الاحتفاظ بمركب اليود البنفسجي البلوري ويفقد اللون.
  3. تتم إضافة صبغة مضادة ، مثل سافرانين القابل للذوبان في الماء بشكل ضعيف ، إلى العينة ، مما يؤدي إلى تلطيخها باللون الأحمر. نظرًا لأن السافرانين أخف من البنفسجي الكريستالي ، فإنه لا يعطل اللون الأرجواني في الخلايا الموجبة للجرام. ومع ذلك ، فإن الخلايا السلبية الجرام غير الملونة ملطخة باللون الأحمر.

يتم تحضين لقاح ثقيل من كائن الاختبار في مرق يحتوي على نترات. تقوم الكائنات الحية القادرة على إنتاج إنزيم اختزال النترات بتقليل النترات الموجودة في المرق إلى النتريت الذي يمكن بعد ذلك تقليله إلى أكسيد النيتريك أو أكسيد النيتروز أو النيتروجين.

يعتمد اختبار تقليل النترات على الكشف عن النتريت وقدرته على تكوين مركب أحمر عندما يتفاعل مع حمض السلفانيليك لتكوين مركب (حمض النتريت-سلفانيليك) والذي يتفاعل بعد ذلك مع α-naphthylamine لإعطاء راسب أحمر (برونتوسيل) ، وهو صبغة آزو قابلة للذوبان في الماء.

ومع ذلك ، فقط عند وجود النترات في الوسط ، يتم إنتاج اللون الأحمر. إذا لم يكن هناك & # 8217s لون أحمر في الوسط بعد إضافة حمض السلفانيليك و α-naphthylamine يعني فقط أن النتريت غير موجود في الوسط.

هناك تفسيران لهذه الملاحظة.

  1. قد لا يكون النترات قد تم تقليله لأن الضغط سالب النترات.
  2. قد يتم تقليل النترات إلى نتريت والذي تم بعد ذلك تقليله تمامًا إلى أكسيد النيتريك أو أكسيد النيتروز أو النيتروجين والذي لن يتفاعل مع الكواشف التي تتفاعل مع النتريت ، وتكون السلالة موجبة للنترات.

وبالتالي ، عندما لا يتم الكشف عن النتريت ، فمن الضروري اختبار ما إذا كان الكائن الحي قد خفض النترات إلى ما بعد النتريت. يمكن القيام بذلك بشكل غير مباشر عن طريق إضافة كمية صغيرة من مسحوق الزنك إلى المزرعة. يحفز مسحوق الزنك اختزال النترات إلى نتريت. يشير تطور اللون الأحمر عند إضافة الزنك إلى أن النترات لم يتم تقليلها بواسطة الكائن الحي مما يشير إلى أن كائن الاختبار غير قادر على تقليل النترات. إذا لم يحدث أي تغيير في اللون بعد إضافة الزنك ، فهذا يشير إلى أن الكائن الحي قلل النترات إلى أحد مركبات النيتروجين الأخرى ، وبالتالي فهو مخفض للنترات.

ملحوظة: يتم وضع أنبوب دورهام في مرق النيتروجين للكشف عن تدهور المرق قبل التلقيح ، كما يتضح من تكوين الغاز في الأنبوب ولتحديد إزالة النتروجين بواسطة الكائنات الحية التي تنتج الغاز عن طريق مسارات بديلة.


ما هو MTS الفحص

مقايسة MTS هي طريقة جديدة لمقايسة MTT لأنها تستخدم نوعًا جديدًا من صبغة التترازوليوم ، والتي تؤدي في النهاية إلى منتج فورمازان مائي قابل للذوبان. هنا ، صبغة tetrazolium المستخدمة في مقايسة MTS هي 3- (4،5-dimethylthiazol-2-yl) -5- (3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4-sulfophenyl) -2H-tetrazolium. يحدث تكوين صبغة الفورمازان القابلة للذوبان في وجود ميثوسلفات الفينازين (PMS) ، والذي يعمل كمستقبل وسيط للإلكترون ، حيث يقوم بنقل الإلكترونات من NADH لتقليل صبغة التترازوليوم ، وتشكيل منتج فورمازان القابل للذوبان.

الشكل 2: لوحة MTT

يقلل التكوين المباشر لمنتج فورمازان قابل للذوبان من خطوة إذابة منتج فورمازان لمقايسة MTT. لذلك ، يعتبر اختبار MTS أكثر كفاءة وأقل استهلاكا للوقت. كما أنه يزيل الأخطاء المحتملة مثل فقدان الخلية ، والذي يمكن أن يحدث أثناء إزالة الوسيط وإذابة منتج فورمازان. بالإضافة إلى ذلك ، فإن منتج فورمازان الناتج يكون أغمق في اللون مما يزيد من حساسية ودقة الفحص.


ثقافة الخلية ثلاثية الأبعاد - الحية / الميتة / تلطيخ الخلايا الثلاثية الكلية

مجموعة أدوات تصوير قابلية الخلية للخلايا عبارة عن اختبار ثلاثي الألوان يمكن استخدامه مع ثقافات الخلايا ثنائية وثلاثية الأبعاد من أجل تلطيخ مضان متزامن للخلايا القابلة للحياة (كالسين- AM) ، والخلايا الميتة (بروبيديوم يوديد / بي) ، وكذلك الخلايا الكلية (هويشت) 33342).

  • يتألق Calcein-AM باللون الأخضر على الكالسيوم الرابط ، معتمداً على نشاط الاستريز الموجود فقط في الخلايا النشطة الأيضية القابلة للحياة.
  • بروبيديوم يوديد (PI) هو صبغة نووية يتم استبعادها بواسطة غشاء الخلايا الحية ، ولكنها تمر عبر الغشاء التالف للخلايا الميتة ، وتتداخل مع الحمض النووي لتنبعث منها وميض أحمر قوي.
  • Hoechst 33342 عبارة عن صبغة لتلطيخ الحمض النووي تظهر سمية خلوية منخفضة. يتوهج باللون الأزرق ويستخدم كمؤشر لإجمالي عدد الخلايا.

مبدأ اختبار أوكسيديز

يعتمد مبدأ اختبار أوكسيديز على آلية تفاعل الأكسدة، حيث يمكن للكائنات الحية التي تمتلك إنزيم أوكسيديز السيتوكروم أن تؤكسد TMPD كاشف في المنتجات النهائية مثل مركب أزرق اللون (إندوفينول) و ماء.

يميز اختبار أوكسيديز بشكل ملحوظ الكائنات الحية الدقيقة إلى مجموعتين محددتين ، وهما موجبة أوكسيديز وسلبية أوكسيديز. تخضع الكائنات الحية الإيجابية لأوكسيديز للتنفس الهوائي ، حيث تستخدم TMPD ك مانح الإلكترون.

سوف يمرر كاشف أوكسيديز TMPD الإلكترونات إلى أوكسيديز السيتوكروم ج، حيث يتحول كاشف TMPD إلى ملف جذر TMPD أو يكتسب اللون الأزرق البنفسجي.

أخيرًا ، سيقبل حامل الأكسجين الطرفي الإلكترونات من السيتوكروم أوكسيديز ويرتبط بالبروتونات لإطلاق الماء. على النقيض من ذلك ، فإن عجز الكائنات الحية في أوكسيديز السيتوكروم لن يؤكسد كاشف TMPD.

اختبار الكاشف

لإجراء اختبار أوكسيديز ، نحتاج إلى:

  1. كاشف أوكسيديز: لتحضير هذا الكاشف ، قم بإذابة 0.60 جرام من TMPD (N، N، N & # 8217، N & # 8217- tetramethyl-p- phenylenediamine dihydrochloride) ، 0.02 جرام من عامل استقرار في 100 مل من ثنائي ميثيل سلفوكسيد.
  2. أقراص أوكسيديز: هذه هي أقراص ورق الترشيح غير المشبعة فقط أكسالات DMPD (N ، N & # 8211 ثنائي ميثيل ف- فينيلنديامين أكسالات) ، ألفا نافثول، و حمض الاسكوربيك ولكنه يقلل أيضًا من وقت تحضير كاشف أوكسيديز.

إجراءات وطرق اختبار أوكسيديز

يمكن إجراء اختبار أوكسيديز باتباع الطرق التالية:

طريقة ورق الترشيح الجاف

في هذه الطريقة ، نحتاج إلى تشبع ورق الترشيح رقم 1 من Whatman في كاشف 1٪ N ، N ، N-tetramethyl p-phenylenediamine dihydrochloride. بعد ذلك ، قم بإخضاع ورق الترشيح لعملية التجفيف بالتجميد ثم احتفظ بها لاحقًا في زجاجة ذات غطاء لولبي (تحت داكن مكان).

بعد ذلك ، أخرج ورق الترشيح وقم بترطيبه ببعض الماء المقطر. بعد ذلك ، ضع ورق الترشيح في طبق بتري وحضر مسحة بكتيرية فوقها. أخيرًا ، دوِّن نتيجة الملاحظة لأي تغييرات في لون ورق الترشيح.

طريقة ورق الترشيح الرطب

في هذه الطريقة ، خذ أقراص الترشيح المشبعة بكاشف أوكسيديز وافرك مباشرة ثقافة كائن الاختبار عبر قضيب خشبي. أخيرًا ، لاحظ ورقة الترشيح لظهور اللون الأزرق المائل إلى البنفسجي.

طريقة اللوحة المباشرة

إنها طريقة مريحة للغاية وإجراء من خطوة واحدة ، والتي تتضمن إضافة كاشف أوكسيديز TMPD فوق المستعمرات المشتبه بها.

طريقة المسحة

إنه إجراء بسيط يتضمن غمس قطعة قطن معقمة في محلول 1٪ كاشف TMPD. بعد ذلك ، المس المسحة القطنية برفق فوق المستعمرة المشتبه بها وابحث عن أي تغيرات في اللون في برعم المسحة.

طريقة أنبوب الاختبار

في هذه الطريقة ، قم بإعداد وسط مرق المغذيات وصب ما يصل إلى 4.5 مل في أنبوب الاختبار. بعد ذلك ، قم بتلقيح كائن الاختبار واحتضانه لمدة 24-48 ساعة على الأقل عند 35 درجة مئوية.

بعد الحضانة ، أضف كاشف أوكسيديز (0.2 مل) في أنبوب الثقافة ورج بقوة. أخيرًا ، انظر إلى أنابيب الثقافة لظهور اللون الأرجواني المزرق.

نتائج الإختبار

يمكن أن تكون هناك ثلاث نتائج محتملة:

  • إيجابي: يتطور اللون الأرجواني المزرق العميق الشديد في غضون 10 ثوانٍ.
  • تأخر إيجابي: يتطور اللون الأرجواني المزرق العميق بعد 10 ثوانٍ.
  • نفي: لا يحدث أي تغيير في اللون عن طريق إضافة كاشف أوكسيديز.

يؤكد اختبار أوكسيديز وجود إنزيم أوكسيديز السيتوكروم ضمن سلسلة نقل الإلكترون في الميتوكوندريا. يميز الكائنات الحية إلى أوكسيديز موجب وأكسيداز سالب ، بناءً على وجود أوكسيديز السيتوكروم في نظام نقل الإلكترون.

تمتلك البكتيريا الهوائية أوكسيديز السيتوكروم الذي يشكل جزءًا من سلسلة الجهاز التنفسي الهوائية. وبالتالي ، فإن اختبار أوكسيديز يميز أيضًا الكائنات الهوائية من التمارين الهوائية الاختيارية ، اللاهوائية الصارمة والاختيارية. يعتبر اختبار أوكسيديز مفيدًا في الانتواع ، لأنه يميز الزائفة من الأنواع الأخرى ذات الصلة.

محددات

يجب أن تكون الكواشف طازجة ، وإلا فإن اختبار أوكسيديز قد يعطي نتائج متنوعة. يجب أن يكون عمر كائن الاختبار 18-24 ساعة. يُفضل كائن الاختبار المعزول عن الوسائط غير الانتقائية وغير التفاضلية لتحديد الهوية والتصنيف.

يمكن لوسط النمو المضاف إليه الصبغة أن يعطي نتائج خاطئة. يستخدم حلقة بلاتينية بدلاً من الحديد أو نيتشروم لتجنب النتائج الإيجابية الكاذبة من أكسدة السطح أثناء الاشتعال.


شاهد الفيديو: طريقة سهلة وبسيطة للاختزال (كانون الثاني 2022).