معلومة

7.25J: التحليل الثنائي الهجين - علم الأحياء


أهداف التعلم

  • صمم تجربة ثنائية الهجين

إن فهم كيفية ارتباط البروتينات جسديًا يكشف عن أدلة حول هيكلها ووظيفتها ، ويجعلها هدفًا مثاليًا للعلاج بالعقاقير. توجد عدة منهجيات لدراسة تفاعل البروتينات في الجسم الحي. أكثر الأدوات استخدامًا هي الخميرة ثنائية الهجين. يعتبر نظام فحص الخميرة ثنائي الهجين أداة فعالة وسريعة للدراسة في الجسم الحي لتفاعل البروتين والبروتين في بدائيات النوى وحقيقيات النوى. تتكون الطريقة من تقسيم عامل نسخ الخميرة إلى مجال الارتباط ومجال التنشيط ، ودمج مجال الارتباط ببروتين واحد مهم (الطُعم) ومجال التنشيط لبروتين آخر مهم (الفريسة) ، وإعادة تكوين نشاط عامل النسخ عن طريق إعادة المجالين إلى القرب المادي. في حالة عدم وجود تفاعل ، تظل المجالات بعيدة ، مما يمنع ناتجًا يمكن اكتشافه. إذا تفاعل البروتينين ، فإن الطعم يجند الفريسة إلى موقع خلوي معين حيث يمكن أن يحفز ناتجًا يمكن اكتشافه (على سبيل المثال ، تنشيط الجينات). يقيس هذا النهج التجريبي التفاعل المادي المباشر بين البروتينات ويسمى الطريقة الثنائية. يتم تحليل مجموعات البيانات التي تم الحصول عليها من هذه الأدوات بشكل أكبر باستخدام الأساليب الحسابية لرسم خريطة لاتصال البروتين وتحقيق فهم على مستوى النظام للكائن الدقيق.

يتمثل أحد قيود شاشات الخميرة الكلاسيكية ثنائية الهجين في أنها تقتصر على البروتينات القابلة للذوبان. لذلك من المستحيل استخدامها لدراسة تفاعلات البروتين والبروتين بين بروتينات الغشاء المتكاملة غير القابلة للذوبان. يوفر نظام Split- ubiquitin طريقة للتغلب على هذا القيد. في نظام الانقسام يوبيكويتين ، يتم دمج بروتينين غشائيين متكاملين ليتم دراستهما في شقين مختلفين من يوبيكويتين: جزء يوبيكويتين C- طرفي ("شبل" ، المخلفات 35-76) وشريحة يوبيكويتين N-terminal ("Nub" ، المخلفات 1–34). تسمى هذه البروتينات المندمجة بالطعم والفريسة على التوالي. بالإضافة إلى اندماجها في بروتين غشائي متكامل ، يتم أيضًا دمج الجزء المكعب في عامل النسخ (TF) الذي يمكن أن ينشطر بواسطة البروتياز الخاص باليوبيكويتين. عند التفاعل بين الطعم والفريسة ، تتجمع الشقوق النبوية والشعبية ، مما يعيد تكوين الانقسام اليوبيكويتين. يتم التعرف على جزيء يوبيكويتين المعاد تكوينه بواسطة البروتياز الخاص باليوبيكويتين ، والذي ينفصل عن البروتين المراسل ، مما يسمح له بالحث على نسخ جينات المراسل.

ملخص

يعتبر فهم كيفية تفاعل البروتينات داخل الخلية جزءًا أساسيًا من التحليل الوظيفي الجيني واكتشاف الهدف الدوائي المحتمل. تسهل المنتجات المتاحة تجاريًا توصيف هذه التفاعلات في أنظمة الخميرة. يتضمن الشكل الأساسي تكوين جزيئين هجينين ، أحدهما يتم فيه دمج بروتين "طعم" مع عامل نسخ ، والآخر يتم فيه دمج بروتين "فريسة" مع عامل نسخ مرتبط. إذا تفاعل البروتينات الطعم والفريسة بالفعل ، فعندئذٍ يتم أيضًا تقريب العاملين اللذين يندمجان في هذين البروتينين مع بعضهما البعض.


فحص ثنائي الهجين

نهج الفرز ثنائي الهجين عبارة عن فحوصات تكميلية عالية الإنتاجية تختبر تفاعلات البروتين والبروتين والحمض النووي. يتم إجراء الاختبار عادةً عن طريق إدخال البروتينات ذات الأهمية الزوجية في الخميرة ، مع دمج كل بروتين في عامل النسخ الذي تم تقسيمه إلى جزأين مكملتين. تقليديًا ، يُشار إلى البروتين المندمج في مجال ربط الحمض النووي للطرف N لعامل النسخ باسم "الطُعم" والبروتين المندمج في مجال التنشيط الطرفي C باسم "الفريسة". عند الاقتراب من بعضها البعض من خلال التفاعل بين بروتينات الطعم والفريسة ، فإن مجالات الربط والتفعيل لوظيفة عامل النسخ لتنشيط نسخ الجين المراسل. قد يشفر الجين المراسل لمقاومة المضادات الحيوية ، بحيث يمكن اختيار الحيوانات المستنسخة المتفاعلة عن طريق الضغط على المضادات الحيوية. بدلاً من ذلك ، قد يقوم الجين المراسل بتشفير جين قاتل ، بحيث يؤدي التفاعل المادي إلى تقليل حجم المستعمرة. على الرغم من أن النهجين الهجينين يتم إجراؤهما عادةً باستخدام الخميرة ، فقد تم أيضًا تكييف هذه المقايسات مع الأنظمة البكتيرية والثديية (Joung et al. ، 2000). تتمثل عيوب النهجين الهجينين في أنها غالبًا ما تتمتع بمعدلات إيجابية كاذبة وسلبية كاذبة عالية. يمكن أن يؤدي إنتاج البروتينات بكثرة أعلى بكثير مما هو مناسب بيولوجيًا إلى تفاعلات زائفة ترفع معدل الإيجابي الكاذب. قد تحدث سلبيات كاذبة إذا كانت الاندماجات الطرفية N أو C تعطل واجهات التفاعل ، أو إذا كان طي البروتين المناسب أو معالجته أو تعديلات ما بعد الترجمة لا يمكن إعادة تلخيصها.

تم استخدام نهجين هجينين بشكل شامل لتوصيف التفاعلات بين البروتينات المضيفة والبروتينات المشتقة من مجموعة متنوعة من الفيروسات ، بما في ذلك فيروس الهربس المرتبط بساركوما كابوزي ، وفيروس الحماق النطاقي ، وفيروس γ-herpesvirus 68 (MHV-68) ، وفيروس اللقاح ، والسارس. فيروس كورونا ، فيروس الأنفلونزا (فريدل وهاس ، 2011). في حالة فيروس الأنفلونزا ، تم استخدام نهج متكامل لتحديد والتحقق من التفاعلات بين البروتينات الفيروسية والبشرية من خلال استكمال اختبار شامل للخميرة ثنائي الهجين بتجارب إضافية واسعة النطاق (Shapira et al. ، 2009). وشمل ذلك قياس استجابات النسخ الخلوية بعد تعداء العدوى باستخدام الحمض النووي الريبي الأنفلونزا ، وعلاج IFN-، والعدوى بسلالة أنفلونزا تفتقر إلى جين NS1 (المسؤول عن تثبيط الاستشعار المناعي الفطري للحمض النووي الريبي الفيروسي وإنتاج IFN المصب). تم أيضًا اختبار مجموعة من الجينات التي تم تنظيمها إما في الشاشة ثنائية الهجين أو شاشات التعبير الجيني في شاشات ضربة قاضية من siRNA لقياس تكاثر الإنفلونزا وإنتاج IFN-. كشف دمج البيانات الناتجة عن هذه الاختبارات المختلفة عن إثراء وحدات البوليميراز الفيروسية للتفاعلات التي أدت إلى التنظيم الإيجابي لإنتاج IFN ، مما يشير إلى أن البوليميراز الفيروسي ، بالإضافة إلى NS1 ، يلعب دورًا في تثبيط استجابة IFN.

تم استخدام نهج متكامل مماثل لوصف تفاعلات الفيروس مع المضيف لفيروس الهربس الفئران MHV-68 (Lee et al. ، 2011). باستخدام نهج الخميرة ثنائي الهجين ، تم فحص مكتبة تضم 84 جينًا MHV-68 مقابل بعضها البعض لتحديد 23 تفاعلًا داخل الفيروس. تم فحص المكتبة أيضًا مقابل مكتبة cDNA المشتقة من خلايا الكبد البشرية لتحديد 243 تفاعل بين الفيروس والمضيف. تحقق نهج تنقية التقارب من صحة 70 ٪ من التفاعلات داخل الفيروس ، مما أعطى تقديرًا للمعدل الإيجابي الكاذب لشاشة الخميرة ثنائية الهجين. أشارت تحليلات الشبكة إلى أن البروتينات الخلوية المستهدفة بواسطة MHV-68 كان لها شركاء أكثر في شبكة تفاعل بروتين-بروتين خلوي أكثر مما كان متوقعًا عن طريق الصدفة. لذلك أسفر نهج الفحص والتحقق المتكامل هذا عن شبكات تفاعل فيروسية - فيروسية وفيروسية - بروتين مضيف.


خلفية

تعتمد العديد من العمليات البيولوجية على تفاعلات البروتين والبروتين (PPIs). تشير التقديرات إلى أن ما يقرب من 350.000 نوع من مثبطات مضخة البروتون تحدث في خلية بشرية [1]. يوفر هذا فرصًا لا حصر لها لتطوير مثبطات PPI وبالتالي للتحكم في العمليات الخلوية على وجه التحديد. ومع ذلك ، فإن الحصول على مثبط جزيء صغير من مثبطات مضخة البروتون ليس بالأمر الهين. بشكل عام ، تكون الواجهات المستخدمة في مثبطات مضخة البروتون مسطحة وكبيرة ، مما يقلل من احتمالات المنافسة الفعالة بواسطة مثبط جزيء صغير [2]. ومع ذلك ، كان هناك بعض النجاح على مدى العقدين الماضيين في الحصول على مثبطات PPI جزيء صغير [3]. لقد لوحظ أن عددًا قليلاً من المخلفات الرئيسية في واجهة PPI تساهم في الجزء الأكبر من طاقة الربط في PPI [4] ، وبالتالي يمكن استهدافها للتثبيط بواسطة جزيء صغير.

من أجل أخذ عينات من المساحة المطابقة بأكملها لمؤشرات PPI ، فإن اختبار الفحص البسيط غير المكلف القابل للاستخدام في تنسيق عالي الإنتاجية أمر مرغوب فيه للغاية. على الرغم من وجود فحوصات في المختبر تتضمن طرقًا مثل قياس المسعر الحراري المتساوي ، ورنين الطحين السطحي ، والرحل الحراري المجهري ، ومقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم ، واستقطاب التألق ، ونقل طاقة الرنين الفلوري ، ومقايسة AlphaScreen المستندة إلى حبة (Perkin Elmer) ، فهي غالبًا ما تكون كثيفة العمالة ، ومكلفة ، وتتطلب كميات كبيرة من البروتين النقي [5]. علاوة على ذلك ، قد تحدد الاختبارات في المختبر المركبات التي تعتبر مثبطات PPI جيدة ولكن قد يكون لها تأثيرات سامة أو نفاذية منخفضة للخلايا. لذلك ، من المفيد أن يكون لديك مقايسة اقتصادية عالية الإنتاجية في الجسم الحي للكشف عن مثبطات PPI.

يعتبر اختبار الخميرة ثنائي الهجين (Y2H) أداة قوية لتحديد مؤشرات PPI الثنائية [6] من خلال استغلال الطبيعة المعيارية لعامل نسخ الخميرة Gal4. في هذا الاختبار ، يتم دمج مجال ربط الحمض النووي ومجال التنشيط لـ Gal4 مع بروتينين مهمين. إذا تفاعل البروتينان المعنيان جسديًا ، يتم إنشاء عامل نسخ نشط Gal4 ، مما يؤدي إلى التعبير عن جينات المراسل تحت سيطرة فتاه المروج (الشكل 1 أ ، اللوحة اليسرى). بصرف النظر عن تأكيد التفاعل بين بروتينين ، كان هذا الاختبار محوريًا في اكتشاف بروتينات ربط جديدة. تم استخدام مقايسة Y2H في تطوير خرائط تفاعل البروتين الثنائي في الكائنات الحية النموذجية مثل الخميرة [7] والبشر [8].

يتفاعل p53 مع Mdm2 في مقايسة الخميرة ثنائية الهجين (Y2H). أ رسم تخطيطي يوضح استخدام مقايسة Y2H في تحديد البروتينات المتفاعلة (اللوحة اليسرى) ومثبطات تفاعلات البروتين والبروتين (اللوحة اليمنى). ب تم غسل ثقافات الطور اللوغاريتمي لخلايا الخميرة AH109 المحتوية على بلازميدات إما Gal4 AD-p53 / Gal4 BD-Mdm2 أو Gal4 AD-p53 / Gal4 BD أو Gal4 AD / Gal4 BD-Mdm2 أو Gal4 AD / Gal4 BD في الماء والطلاء بتخفيفات مختلفة على لوحات غير انتقائية (-Leu-Trp) وانتقائية (-Leu-Trp-Ade-His) وحضنت عند 30 درجة مئوية لمدة 3 أيام. ج الثقافات بين عشية وضحاها لخلايا الخميرة AH109 التي تحتوي على بلازميدات ترميز إما Gal4 AD-p53 / Gal4 BD-Mdm2 ، Gal4 AD-p53 / Gal4 BD ، Gal4 AD / Gal4 BD-Mdm2 ، Gal4 AD / Gal4 BD ، Gal4 AD-p53-F19A / Gal4 تم غسل BD-Mdm2 أو Gal4 AD-p53 (Δ42) / Gal4 BD-Mdm2 في وسط غير انتقائي في الماء وتلقيحها في وسط انتقائي وغير انتقائي عند OD600 = 0.2 في التكرارات. لكل سلالة ، النمو كما تم قياسه بمتوسط ​​OD600 من الثقافات المكررة يتم رسمها ضد الزمن. نهايات الشريط العمودي تشير إلى OD600 قيم الثقافات المكررة

يمكن أيضًا استخدام مقايسة Y2H لتحديد المجالات وبقايا الأحماض الأمينية المطلوبة لمثبطات مضخة البروتون. سيؤدي حذف أو استبدال بقايا الأحماض الأمينية الضرورية لمثبطات مضخة البروتون أو العلاج بمثبطات مثبطات مضخة البروتون ذات الجزيئات الصغيرة إلى فقدان نشاط الجين المراسل (الشكل 1 أ ، اللوحة اليمنى). من الممكن أن يكون لديك اختيار إيجابي لفحص الطفرات أو المركبات التي تؤثر على مثبطات مضخة البروتون. على سبيل المثال ، عن طريق وضع ملف URA3 الجين تحت فتاه المروج ، يمكن للمرء أن يفحص الطفرات أو مثبطات PPI التي تنقذ فتك خلايا الخميرة المزروعة على وسط يحتوي على 5-fluoroorotic acid ، ويشار إلى هذا النهج بمقايسة Y2H العكسي وقد تم اقتراحه منذ 20 عامًا [9 ، 10]. ومع ذلك ، هناك عدد قليل جدًا من التقارير حول استخدامه في فحص مثبطات PPI [11 ، 12]. لقد تم الاعتراف بأن النفاذية المنخفضة لخلايا الخميرة إلى الجزيئات الصغيرة يمكن أن تحد من استخدام طرق Y2H للكشف عن مثبطات PPI [13].

لاستكشاف استخدام مقايسة Y2H للكشف عن مثبطات PPIs ، اخترنا تفاعل p53-Mdm2 ، حيث تتوفر العديد من مثبطات الجزيئات الصغيرة. p53 هو عامل نسخ رئيسي يلعب دورًا رئيسيًا في تنظيم توقف دورة الخلية ، والاستجابة لتلف الحمض النووي ، والشيخوخة ، وموت الخلايا المبرمج [14] ويتطور في أكثر من 50٪ من السرطانات [15]. يتم تثبيط p53 بواسطة Mdm2 ، وهو يوبيكويتين ليغاز الذي غالبًا ما يتم التعبير عنه بشكل مفرط في الأورام [16]. من خلال الارتباط بمجال المعاملات N-terminal الخاص بـ p53 ، يثبط Mdm2 نشاطه النسخي ، ويوجده ويستهدفه من أجل تدهور البروتينات ، ويستبعده من النواة. يؤدي تثبيط تفاعل p53-Mdm2 إلى تنشيط p53 وزيادة قدرته على كبت الورم. يمكن أن يُعزى التفاعل p53-Mdm2 إلى ثلاث نقاط ساخنة رئيسية (Phe19 و Trp23 و Leu26) في p53 والتي ترتبط بجيب كاره للماء على سطح المجال N-terminal الخاص بـ Mdm2 [17] (ملف إضافي 1: الشكل S1A) . ترتبط مثبطات الجزيئات الصغيرة ، مثل nutlin و AMG232 و MI-773 ، بالجيب الكارهة للماء من Mdm2 وتمنع تفاعل p53-Mdm2 عن طريق محاكاة تفاعل البقايا الكارهة للماء [18،19،20،21] (إضافية ملف 1: الشكل S1B – D). لوحظ أن ارتباط Mdm2 بـ p53 كامل الطول يكون أقوى بمقدار 10 أضعاف تقريبًا من المجال الطرفي N لـ p53 (بقايا الأحماض الأمينية 1-93) [22] ، مما يشير إلى وجود مجالات إضافية في p53 تتفاعل مع Mdm2. تم الإبلاغ عن اثنين من هذه المجالات حتى الآن ، حيث تبين أن مجال ربط الحمض النووي لـ p53 (البقايا 234-286 داخل المربعين الرابع والخامس المحفوظين) يتفاعلان مع المجال الحمضي المركزي لـ Mdm2 [23] والمجال التنظيمي لمحطة الكربوكسيل. من p53 (المخلفات 367-393) يتفاعل مع المجال N- طرفي لـ Mdm2 (المخلفات 10-139) [24].

في هذه الورقة ، قمنا بالإبلاغ عن نسخة محسنة من مقايسة Y2H والتي يمكن استخدامها للكشف عن مثبطات PPI بطريقة إنتاجية عالية. من خلال حذف تسعة جينات تشارك في وظيفة الجين الناقل ABC والتعبير عنه ، قمنا ببناء سلالة خميرة شديدة النفاذية للجزيئات الصغيرة. نظهر أن nutlin و AMG232 و MI-773 يمكن أن يمنع تفاعل p53-Mdm2 في مقايسة Y2H. نوضح أن nutlin عبارة عن ركيزة لنقل الخميرة ABC Pdr5. بالإضافة إلى ذلك ، نقترح أن منطقة Box II في مجال ربط الحمض النووي الأساسي لـ p53 تتفاعل مع المجال الطرفي N لـ Mdm2 وتجعل تفاعل p53-Mdm2 معارضة لتثبيط الجزيئات الصغيرة في مقايسة Y2H.


كيف تعمل الخميرة ثنائية الهجين؟

المفتاح لشاشة Y2H هو أن معظم عوامل النسخ حقيقية النواة معيارية. ينقسم مجال التنشيط (قسم البروتين الذي يجند آلية النسخ) ومجال الربط (قسم البروتين الذي يربط الحمض النووي مباشرة) لعوامل النسخ حقيقية النواة إلى جزأين. ولا يزال بإمكان عامل النسخ تنشيط النسخ عندما تكون الأجزاء قريبة من بعضها - ولا حتى متصلة بشكل مباشر.

يمكنك الاستفادة من هذه الوحدة النمطية عن طريق تمييز البروتينين المهمين لديك بمجالات مختلفة لعامل النسخ المجزأ. ثم إذا كانت هذه البروتينات ذات الأهمية على مقربة من بعضها البعض ، فإنها ستجعل مجالات ربط الحمض النووي والتفعيل الخاصة بها قريبة بما يكفي لتشكيل وحدة نسخ وظيفية. يمكن أن تربط هذه الوحدة الوظيفية بعد ذلك عنصرًا محفزًا في بداية جينات المراسل (مثل إنزيمات الهيستيدين والأدينين التخليقية الحيوية ، مما يسمح للخميرة بالنمو على ألواح تفتقر إلى هذه العناصر الغذائية) لتنشيط نسخها.


مناقشة

يستحث MeJA التخليق الحيوي للفلافونويد في الكمثرى كالي

في النباتات ، تعتبر الجاسمونات جزيئات إشارات أساسية [37] تعزز التخليق الحيوي للمستقلبات الثانوية ، وخاصة مركبات الفلافونويد [38]. تعتبر مركبات الفلافونويد من المحددات المهمة لجودة الفاكهة وقيمتها الاقتصادية نظرًا لتأثيرها على اللون والرائحة والقابضة وخواص مضادات الأكسدة [39]. لذلك ، على مدى العقود القليلة الماضية ، تم إجراء العديد من الدراسات لتطوير استراتيجيات لزيادة محتوى الفلافونويد للفاكهة عبر علاجات جاسمونيت [22 ، 27 ، 30 ، 31]. في هذه الدراسة ، أدى تطبيق MeJA الخارجي إلى تنشيط مسار إشارات jasmonate في الكمثرى كالي. تم تنظيم مستويات التعبير للعديد من DEGs في كالي الكمثرى المعالج بـ MeJA بالنسبة إلى المستويات المقابلة في عنصر التحكم غير المعالج (ملف إضافي 1: الشكل S1). بالإضافة إلى ذلك ، تم شرح العديد من عوامل إشارات jasmonate الهامة (JAR1 و COI1 و JAZ و MYC2) كجزء من مسار تحويل إشارة jasmonate (الشكل 3).

استخدمنا كمثرى كالي لدراسة آثار MeJA على التخليق الحيوي للفلافونويد لأنه يمكن إنتاجها بشكل مستمر وموحد لاستخدام المساحة المتاحة بكفاءة. لاحظنا أن MeJA عزز بشكل كبير التخليق الحيوي للفلافونويد في الكمثرى كالي ، وخاصة الأنثوسيانين (الشكل 1). وبالمثل ، خلصت الدراسات السابقة إلى أن MeJA يعزز تراكم الأنثوسيانين والبروانثوسيانيدين في تفاح كالي [18 ، 20 ، 33]. علاوة على ذلك ، يمكن للأنظمة المختبرية الفعالة أن تنتج أنثوسيانين عالي الجودة على نطاق تجاري [40].

في هذه الدراسة ، نظم علاج MeJA التعبير عن EBGs ، مثل PcCHS, PcCHI، و PcF3H، والتي تشارك في المراحل المبكرة من مسار التخليق الحيوي للفلافونويد. بالإضافة إلى ذلك ، تم التعبير عن LBGs ، التي تشارك بشكل خاص في التخليق الحيوي للأنثوسيانين والبروانثوسيانيدين ، بشكل كبير في كالي الكمثرى المعالج بـ MeJA مقارنةً بمجموعة التحكم (الشكل 5). يعتبر كل من DFR و ANS من الإنزيمات الرئيسية لتخليق الأنثوسيانين الحيوي [9]. تمشيا مع نتائجنا ، Shan et al. [17] ذكرت أن جاسمونيت ينظم بقوة التعبير عن AtDFR في شتلات نبات الأرابيدوبسيس ، وبالتالي تنظيم تراكم الأنثوسيانين. علاوة على ذلك ، فإن مستويات التعبير عن جينات التخليق الحيوي الأخرى للفلافونويد ، بما في ذلك AtPAL, أتشس, أتشي, AtF3H، و AtF3′H، زاد أيضًا استجابةً لجاسمونيت ، على الرغم من أن مستويات التعبير كانت لا تزال منخفضة نسبيًا. صن وآخرون. [20] أظهر أن تطبيق MeJA الخارجي يعزز تراكم الأنثوسيانين في كالي التفاح ذي اللحم الأحمر بسبب التنظيم المنتظم المرتبط به MdCHS, MdF3H، و MdUFGT التعبير. بالإضافة إلى الجينات المرتبطة بالتخليق الحيوي للأنثوسيانين ، فإن التعبير عن الجينات الرئيسية المشاركة في التخليق الحيوي للبروانثوسيانيدين (PcANR2a و PcLAR1) تم تنظيمه أيضًا بواسطة MeJA (الشكل 5). علاوة على ذلك ، كشف تحليل KEGG أن مسار التخليق الحيوي للفلافونويد قد تحسن بشكل كبير في كالي الكمثرى المعالج بـ MeJA مقارنةً بالتحكم غير المعالج (الشكل 2).

تنظيم النسخ للتخليق الحيوي للفلافونويد بوساطة MeJA في الكمثرى كالي استنادًا إلى بيانات تسلسل الحمض النووي الريبي

تنظم عوامل النسخ التعبير عن الجينات الهيكلية لمسار التخليق الحيوي للفلافونويد. على سبيل المثال ، تشكل بروتينات MYB و bHLH و WDR مركب MBW الذي ينظم التخليق الحيوي للفلافونويد في العديد من أنواع النباتات [12]. أشارت الدراسات السابقة إلى أن عوامل النسخ MYB هي العناصر الرئيسية في الشبكات التنظيمية التي تتحكم في أنماط التعبير الجيني المحددة أثناء التخليق الحيوي للفلافونويد [1]. في الكمثرى ، تم تحديد PpMYB10 مبدئيًا كعامل نسخ R2R3-MYB الذي ينظم بشكل إيجابي تخليق الأنثوسيانين الحيوي [41]. بالإضافة إلى ذلك ، تم وصف PbMYB10b و PbMYB9 كمنظمين إيجابيين للتخليق الحيوي للأنثوسيانين والبروانثوسيانيدين في الكمثرى [42]. حددت التحقيقات السابقة أن PpMYB114 و PpbHLH3 يمكنهما تنظيم التخليق الحيوي للأنثوسيانين في فاكهة الكمثرى [43] ، بينما تم شرح PbMYB12b وظيفيًا كمنظم للفلافونول في الكمثرى [44]. ومع ذلك ، فإن عوامل النسخ MYB المشاركة في التخليق الحيوي للفلافونويد بوساطة جاسمونيت لم يتم تمييزها بشكل خاص في الكمثرى. ومع ذلك ، في التفاح ، يقال أن MdMYB9 و MdMYB11 يتفاعلان مع MdbHLH3 و MdTTG1 لتشكيل مركب MBW الذي ينظم تراكم الأنثوسيانين بوساطة الجاسمونيت والبروانثوسيانيدين [33]. حديثا، MdMYB24L تم التعبير عنه بشكل مفرط في apple calli وتم وصفه وظيفيًا بأنه جين يقوم بترميز عامل نسخ MYB مستجيب لجسمونيت يساهم في تراكم أنثوسيانين الناجم عن MeJA في التفاح. أثبتت دراسات أخرى أن تراكم الأنثوسيانين الناجم عن الجاسمونات في نبات الأرابيدوبسيس يتم بوساطة عوامل النسخ MYB ، بما في ذلك PAP1 (MYB75) و PAP2 (MYB90) و GL3 ، التي تنظم التعبير عن جينات الأنثوسيانين التخليقية الحيوية [17 ، 32].

يعد تسلسل الحمض النووي الريبي أداة فعالة لتوضيح التنظيم النسخي للجينات الأساسية في مسارات التخليق الحيوي للمستقلب الثانوي [45]. على أساس WGCNA ، حددنا 21 جينًا مرشحًا لعامل النسخ MYB كانت مستويات تعبيرها مرتبطة بشكل إيجابي بشكل كبير بالتخليق الحيوي للفلافونويد الناجم عن MeJA في الكمثرى كالي. تضمنت هذه الجينات Pbr016663.1 (PcMYB10) ، والذي يشفر عامل نسخ معروف في MYB والذي ينظم بشكل إيجابي تخليق الأنثوسيانين الحيوي في الكمثرى. ومن المثير للاهتمام أننا اكتشفنا عدة مرشحين جدد من MYB كمنظمين محتملين لتخليق البروانثوسيانيدين والتخليق الحيوي للفلافونول في الكمثرى (الشكل 6).

تم أيضًا الكشف عن الجينات التي تشفر عوامل النسخ الأخرى المرشحة التي تنتمي إلى عائلات bHLH و AP2-EREBP و NAC و WRKY و TIFY على أنها معبر عنها بشكل تفاضلي استنادًا إلى بيانات النسخ لدينا (ملف إضافي 3: الشكل S3). تم الإبلاغ عن العديد من عوامل النسخ bHLH التي تنظم تراكم الأنثوسيانين المستجيب لجاسمونيت في النباتات. أثبتت دراسة سابقة أن MYC2 ، الذي ينتمي إلى عائلة bHLH ، ينظم استجابات jasmonate المتنوعة في نبات الأرابيدوبسيس ، بما في ذلك التخليق الحيوي للأنثوسيانين ، واستجابات الجرح ، وتثبيط نمو الجذر ، وتكيفات الإجهاد التأكسدي [17]. بالإضافة إلى ذلك ، يعمل MYC3 و MYC4 ، وهما متماثلان قريبان من MYC2 ، بشكل إضافي مع MYC2 في مسار إشارات jasmonate [46]. علاوة على ذلك ، فإن عوامل النسخ GL3 و EGL3 و TT8 bHLH هي أيضًا منظمات إيجابية لتراكم الأنثوسيانين المستجيب لجاسمونيت في نبات الأرابيدوبسيس [32]. في التفاح ، تم وصف MdMYC2 وظيفيًا كمنظم إيجابي لتخليق الأنثوسيانين الناجم عن الياسمونيت [47]. ومع ذلك ، لم يتم بعد الإبلاغ عن عوامل نسخ bHLH المشاركة في التخليق الحيوي للفلافونويد بوساطة الكمثرى. في الدراسة الحالية ، حددنا العديد من عوامل نسخ bHLH المرشحة ، بما في ذلك PcMYC2 ، والتي قد تشارك في التخليق الحيوي للفلافونويد الناجم عن jasmonate في الكمثرى كالي (الشكل 3 وملف إضافي 3: الشكل S3).

الآلية الجزيئية المرتبطة بالتخليق الحيوي للفلافونويد الناجم عن MeJA في الكمثرى كالي

تم وصف الآلية الجزيئية الكامنة وراء تخليق الأنثوسيانين الناجم عن الياسمونيت بدقة في نبات الأرابيدوبسيس [17 ، 32 ، 35 ، 48]. يُعتقد أن بروتينات JAZ تثبط مسار إشارات jasmonate. تتفاعل مثبطات JAZ بشكل مباشر مع عوامل النسخ MYB (PAP1 و PAP2 و GL1) وعوامل النسخ bHLH (GL3 و EGL3 و TT8) لمركب MBW لمنع النسخ ثم قمع التخليق الحيوي للأنثوسيانين في الأرابيدوبسيس. بعد التحلل الناجم عن إشارة jasmonate لبروتينات JAZ ، يتم تنشيط مجمع MBW للحث على التعبير عن الجينات الهيكلية في المصب والتوسط في تخليق الأنثوسيانين الناجم عن jasmonate [32]. علاوة على ذلك ، شان وآخرون. [17] كشف أن بروتين F-box COI1 ضروري للتعبير عن جينات عامل النسخ ، بما في ذلك تلك التي تشفر PAP1 و PAP2 و GL3. في التفاح ، خلصت دراسة سابقة إلى أن MdJAZ2 يثبط توظيف MdbHLH3 في MdMYB9 و MdMYB1 المروجين. بعد إدراك إشارات jasmonate ، يتم تحرير MdbHLH3 لتشكيل مركب MBW الذي يشارك في تنشيط جينات المصب المتعلقة بالتخليق الحيوي للفلافونويد [33]. ومع ذلك ، فإن الآلية الجزيئية المرتبطة بالتخليق الحيوي للفلافونويد بوساطة جاسمونيت لا تزال غير معروفة إلى حد كبير في الكمثرى.

في هذه الدراسة ، لاحظنا أن PcMYB10 و PcMYC2 يمكن أن يتفاعلوا بشكل مباشر مع بعضهما البعض ومع بروتينات JAZ (PcJAZ1 و PcJAZ2) (الشكل 7). في المقابل ، أشارت بيانات النسخ الخاصة بنا إلى أن 10 جينات JAZ تم التعبير عنها بدرجة أكبر في كالي المعالج بـ MeJA مقارنةً بمجموعة التحكم (الشكل 3). على الرغم من أن نسخ جينات JAZ قد يتم تنظيمه ، إلا أنه قد لا يكون متسقًا مع مستويات البروتين المرتفعة المترجمة بسبب الأنشطة التنظيمية اللاحقة للترجمة [49]. في دراسة سابقة على التفاح ، لوحظ أن MdJAZ8 و MdJAZ11 يشكلان معقدًا مع البروتين الشبيه بـ MdMYB24 لإضعاف نشاط النسخ لمجمع MYB-MYC2 ، واستجابة لتطبيق jasmonate ، تم تدهور MdJAZ8 و MdJAZ11 لإطلاق MdMYC2 و MdMYB24L ، وبالتالي تعزيز تراكم الأنثوسيانين بوساطة JA [18]. وبالتالي ، فإن النتائج التي توصل إليها الحاضر تشير إلى أن المركب الجزيئي PcMYB10 – PcMYC2 قد يكون متورطًا في تنظيم النسخ للتخليق الحيوي للفلافونويد بوساطة جاسمونيت في الكمثرى. ومع ذلك ، سوف يحتاج هذا إلى تأكيد تجريبيًا في الدراسات المستقبلية.


الأمريكتان

سيتم عرض الموقع باللغة الإنجليزية.

نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لضمان عمل موقعنا بشكل آمن وسليم ، فهي ضرورية لعمل خدماتنا ولا يمكن إيقاف تشغيلها في أنظمتنا. عادةً ما يتم تعيينها فقط استجابةً للإجراءات التي تقوم بها والتي ترقى إلى مستوى طلب الخدمات ، مثل تسجيل الدخول أو استخدام عربة التسوق أو ملء النماذج. يمكنك ضبط متصفحك لحظر ملفات تعريف الارتباط هذه أو تنبيهك بها ، لكن بعض أجزاء خدماتنا لن تعمل بدونها. مثل ملفات تعريف الارتباط الأخرى التي نستخدمها ، قد تكون ملفات تعريف الارتباط الضرورية للغاية إما ملفات تعريف ارتباط الطرف الأول أو ملفات تعريف ارتباط الطرف الثالث.

نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتذكر إعداداتك وتفضيلاتك. على سبيل المثال ، قد نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتذكر تفضيلات اللغة الخاصة بك.
السماح بملفات تعريف الارتباط المفضلة

نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لجمع معلومات حول كيفية تفاعلك مع خدماتنا ولمساعدتنا في قياسها وتحسينها. على سبيل المثال ، قد نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتحديد ما إذا كنت قد تفاعلت مع صفحة معينة.
السماح بملفات تعريف الارتباط الخاصة بالأداء / الإحصائيات

نحن وشركاؤنا الإعلانيون نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتقديم الإعلانات ، وجعلها أكثر صلة وذات مغزى بالنسبة لك ، ولتتبع كفاءة حملاتنا الإعلانية ، سواء على خدماتنا أو على مواقع الويب الأخرى ووسائل التواصل الاجتماعي.
السماح بملفات تعريف الارتباط التسويقية


7.25J: التحليل الثنائي الهجين - علم الأحياء

لدينا مشروعان بحثيان رئيسيان: 1. آليات زيادة تحمل الملح في نباتات المحاصيل الملقحة بالبكتيريا المحبة للملوحة 2. صيانة الحمض النووي للعضيات النباتية.

1. النباتات الملحية هي نباتات تنمو على النحو الأمثل في التربة المالحة ولديها إمكانية للتطوير كمحاصيل زراعية. ومع ذلك ، لا يُعرف الكثير عن الآليات والبروتينات المعبر عنها في هذه النباتات والتي تسمح لها بأن تكون قادرة على تحمل الملح. لقد أكملنا تحليل نسخة دي نوفو لنبتة ملحية واحدة ، Suaeda fruticosa، وتحديد الجينات التي تظهر تعبيرًا تفاضليًا في ظروف الملح المثلى. سيؤدي هذا العمل إلى فهم أفضل لكيفية تطوير الأنواع النباتية المختلفة للقدرة على النمو بمستويات عالية من الملح. قد تكون بعض هذه النباتات مفيدة كمحاصيل للمزارعين في الولايات المتحدة وفي البلدان النامية ذات التربة عالية الملوحة.

يركز العمل الحالي على الميكروبيوم المرتبط بنباتات يوتا الملحية الأصلية. لقد قمنا بعزل العديد من سلالات البكتيريا ، ووجدنا أن بعضها قد تم استخدامه لتلقيح البرسيم والنباتات الأخرى الحساسة للملح لتعزيز نموها في التربة المالحة. نقوم بتوصيف خصائص هذه السلالات البكتيرية التي تساهم في تعزيز نمو النبات وتحليل التغيرات في التعبير الجيني في النباتات الملقحة عند زراعتها في تربة مالحة مقارنة بالنمو في حالة عدم وجود ملح مضاف.

2. الميتوكوندريا هي مراكز القوى للخلايا حقيقية النواة وتنتج ATP للعمليات الخلوية. البلاستيدات الخضراء هي موقع التمثيل الضوئي. تحتوي كل من هذه العضيات على DNA (mtDNA و ctDNA) الذي يشفر فقط عددًا قليلاً من الجينات الأساسية ، بينما يتم ترميز معظم البروتينات الخاصة بوظيفة الميتوكوندريا والبلاستيدات الخضراء في النواة ويجب استيرادها إلى العضيات. نحن مهتمون بالآليات التي يتم من خلالها نسخ DNA العضوي والحفاظ عليه.

يعمل مختبرنا منذ سنوات عديدة على دراسة جينات النبات التي تشفر بروتينات mtDNA و ctDNA وإعادة التركيب وتحديد دورها في الحفاظ على جينومات العضية أثناء نمو النبات. نحن نحلل طفرات إدخال T-DNA لكل من هذه الجينات لتحديد تأثير تعطيل التعبير لكل منها على تطور النبات. ندرس أيضًا تفاعلات البروتين والبروتين باستخدام تحليل الخميرة ثنائي الهجين وتقنيات أخرى لتوصيف التفاعلات بين بروتينات النسخ المتماثل. تشير النتائج التي توصلنا إليها إلى أن بوليميرات الحمض النووي المزدوجة المستهدفة لها وظائف مختلفة ولكنها متداخلة جزئيًا في الميتوكوندريا والبلاستيدات الخضراء. بالإضافة إلى ذلك ، هناك أدلة متزايدة على أن جينومات الميتوكوندريا والبلاستيدات الخضراء في النباتات تتكاثر بآلية تعتمد على إعادة التركيب.


تتفاعل منظمات استجابة مجال باتان مع محرك بيلوس من النوع الرابع للتحكم في التوجه الضوئي في البكتيريا الزرقاء متزامن ص. PCC 6803

تُظهر العديد من بدائيات النوى سلوكيات معقدة تتطلب التنظيم المكاني والزماني المعقد لآلات البروتين الخلوي ، مما يؤدي إلى توزيع البروتين غير المتماثل وقطبية الخلية. أحد هذه السلوكيات هو محور ضوئي للبكتيريا الزرقاء والذي يعتمد على التوطين الديناميكي لبروتينات محرك بيلوس من النوع الرابع استجابة للضوء. في البكتيريا الزرقاء متزامن، تعد أنظمة الإشارات المختلفة التي تشتمل على منظمات استجابة CheY-like و PatA ذات الصلة بالتركيز الكيميائي عناصر حاسمة في التبديل بين المحور الضوئي الموجب والسالب اعتمادًا على شدة الضوء وطول الموجة. في هذه الدراسة ، أظهرنا أن منظمات PatA من النوع تطورت من أنظمة الحسية الكيميائية. باستخدام الفحص المجهري الفلوري والتحليل الهجين للخميرة ، نظهر أنهما يتمركزان في الغشاء الداخلي ، حيث يتفاعلان مع المجال السيتوبلازمي N-terminal الخاص بـ PilC ومجموعة Pilus ATPase PilB1. من خلال التعبير بشكل منفصل عن المجالات الفرعية لمنظم الاستجابة PixE ، نؤكد أن مجال N-terminal PATAN فقط يتفاعل مع PilB1 ، ويترجم إلى الغشاء ، ويكفي لعكس الاتجاه الضوئي. أثبتت هذه التجارب أن مجال PATAN هو مجال الإخراج الرئيسي للمنظمين من نوع PatA والذي نفترض أنه يعدل امتداد Pilus من خلال الارتباط بمكونات محرك Pilus.


مقدمة

السمة العامة للنمذجة التنموية هي أنها تحدث بشكل تدريجي بحيث يتم تنقيح الأنماط تدريجيًا بناءً على معلومات من أنماط فظة سابقة (Coen، 1999 Stern، 1968). يمثل هذا مشكلة ميكانيكية في نمو الأجنة أو بدائية الأعضاء ، لأنه يُعتقد أن معظم أحداث الزخرفة تتضمن تدرجات مورفوجينات تعمل عبر أعداد صغيرة من الخلايا ولا يمكن أن تستمر على مسافات أكبر (لورانس وستروهل ، 1996). الحل النموذجي لهذه المشكلة هو أن يصبح الناتج النسخي لأحداث الزخرفة المبكرة ثابتًا ، بحيث يتم توريث المعلومات من الأحداث المبكرة من خلال انقسام الخلية أثناء التطور الجسدي. غالبًا ما ينطوي هذا على تغييرات جينية في نشاط الجين ، أي. التغيرات التي يمكن توريثها من خلال الانقسام الانقسامي (وأحيانًا الانقسام الاختزالي) ولكنها لا تنتج عن تغيرات في تسلسل الحمض النووي (روسو وآخرون ، 1996). ميزة التغييرات اللاجينية في سياق التنمية هي أنه على الرغم من ثباتها إلا أنها قابلة للعكس ، خاصة أثناء الانقسام الاختزالي ، بحيث يمكن محو التغييرات التي تحدث أثناء التطور الجسدي في بداية كل جيل جديد.

في ذبابة الفاكهة and other animals, the epigenetic control of developmental patterning is mediated by members of the Polycomb group (Pc-G)and trithorax group (trx-G) of genes (for a review, see Francis and Kingston, 2001). A general feature of these genes is that they are required not for pattern initiation, but rather to ensure that the transcriptional output of early patterning events is stably inherited through somatic development. The two groups act antagonistically, so that the Pc-G genes are required for maintenance of transcriptional repression and the trx-G genes for maintenance of transcriptional activation. Recently, biochemical characterisation of their protein products has provided some mechanistic insight. The Pc-G products,which are structurally disparate from one another, are found in at least two distinct complexes, termed the Polycomb Repressive Complex 1 and 2 (PRC1 and PRC2) (Cao et al., 2002 Czermin et al., 2002 Francis et al., 2001 Kuzmichev et al., 2002 Muller et al., 2002 Saurin et al., 2001). Consistent with the epigenetic function of Pc-G proteins, the PRC2 was recently shown to modify chromatin. Thus, several groups have shown that the PRC2 has a histone methyltransferase (HMTase) activity, methylating specific residues (lysine 9 and lysine 27) on the N-tail of histone H3(Cao et al., 2002 Czermin et al., 2002 Kuzmichev et al., 2002 Muller et al., 2002). The precise biochemical function of the different PRC2 members is not well defined, with the exception of one member, the Enhancer of zeste [E(z)]protein, which has been shown to confer HMTase activity via a conserved motif,the SET domain. Unlike most other SET domain proteins, E(z) itself does not show HMTase activity in vitro unless associated with other members of the PRC2 complex (Czermin et al.,2002). The mK9 H3 and mK27 H3 modifications catalysed by the PRC2 are associated with the repression of transcription, although how they are interpreted and inherited through mitosis is not well understood. The Polycomb protein appears to recognise and bind mK27 H3, and may recruit other members of the PRC1 complex, which probably have roles in mediating transcriptional silencing and its propagation through mitosis(Cao et al., 2002 Czermin et al., 2002 Francis et al., 2001).

The PRC2 components are also found in plants, and were identified independently through genetic screens in أرابيدوبسيس aimed at dissecting various developmental pathways. وهكذا ، فإن FERTILISATION INDEPENDENT SEED (الجبهة الاسلامية للانقاد) genes were mostly identified through screens for mutants that showed some aspects of seed development in the absence of fertilisation (Chaudhury et al.,1997 Grossniklaus et al.,1998 Guitton et al.,2004 Ohad et al.,1996). Currently four الجبهة الاسلامية للانقاد genes have been identified: MEDEA (MEA), FERTILISATION-INDEPENDENT SEED2 (FIS2),FERTILISATION-INDEPENDENT ENDOSPERM (FIE) و MULTICOPY SUPPRESSOR OF IRA 1 (MSI1). These encode products with homology to the ذبابة الفاكهة PRC2 proteins E(z), Suppressor of zeste 12 [Su(z)12],Extra sex combs (Esc) and P55, respectively(Grossniklaus et al., 1998 Kiyosue et al., 1999 Kohler et al., 2003a Luo et al., 1999 Ohad et al., 1999). ال الجبهة الاسلامية للانقاد genes repress expression of the MADS box gene PHERES1(PHE1) during early seed development, and presumably affect many other as yet unidentified target genes(Kohler et al., 2003b). A second group have been identified based on a common function in repressing floral homeotic gene expression. Mutants in this class are early flowering and exhibit mild homeotic transformations in flowers. The first two members identified were CURLY LEAF (CLF) و EMBRYONIC FLOWER2 (EMF2), which encode proteins with homology to E(z) and Su(z)12, respectively (Goodrich et al.,1997 Yoshida et al.,2001). Recently, the الجبهة الاسلامية للانقاد الجينات MSI1 و FIE have also been implicated in repressing flowering homeotic genes during vegetative development. Because mutant alleles of the الجبهة الاسلامية للانقادgenes all cause early embryo lethality when inherited maternally, this obstructed the phenotypic analysis of fis homozygotes during later developmental stages. However, studies of transgenic lines that confer a partial loss of الجبهة الاسلامية للانقاد gene activity have revealed roles for FIE و MSI1 beyond seed development(Hennig et al., 2003 Katz et al., 2004 Kinoshita et al., 2001). A third class of أرابيدوبسيس Pc-G genes was identified on the basis of the function of the genes in the epigenetic memory of vernalisation. في أرابيدوبسيس, as with many other plant species originating from temperate latitudes, flowering is accelerated if plants are first vernalised by growing for 3-6 weeks at low temperatures (4-10°C). The vernalisation response has several epigenetic features, including stability during somatic development and resetting from generation to generation. Recent studies indicate that the underlying basis for the response involves transcriptional repression of FLC, a gene that itself represses flowering(Michaels and Amasino, 1999 Sheldon et al., 1999). ال VERNALIZATION2 (VRN2) gene is required so that the cold-induced repression of FLC is mitotically stable during later periods of growth at warm temperatures(Gendall et al., 2001). VRN2، مثل FIS2 و EMF2, encodes a protein with homology to ذبابة الفاكهة Su(z)12(Gendall et al., 2001). The completion of the أرابيدوبسيس genome sequence revealed that these comprised most of the أرابيدوبسيس homologues of the core members of the PRC2. One exception was a third E(z) homologue, GenBank accession At4g02020, that had not been characterised genetically. In addition, there are four genes with weak similarity to MSI1, MSI2-5, with poorly defined functions (Ach et al., 1997 Hennig et al., 2003 Kenzior and Folk, 1998). Thus,unlike ذبابة الفاكهة, in which the PRC2 members are single copy genes,in أرابيدوبسيس the different members are mostly small gene families. The duplicated members appear to have acquired distinct functions thus CLF و MEA function in repressing flowering and repressing endosperm proliferation, respectively. It is not clear how this has occurredfor example, whether it simply reflects different expression patterns of MEA و CLF, or whether their protein products have also diverged in function.

In addition to the conservation of PRC2 members in plants, there is also evidence that their proteins may act together. Thus, several studies have shown that the FIE protein can interact with the E(z) homologues MEA, CLF and At4g02020 (Katz et al., 2004 Kohler et al., 2003a Luo et al., 2000 Spillane et al., 2000 Yadegari et al., 2000). Also,compelling evidence for interaction of FIE and MSI1 proteins was recently presented (Kohler et al.,2003a). However, the role of the plant Su(z)12 homologues has remained obscure. Despite the similarities in the phenotype of fis2 والآخر fis mutants, no interaction between FIS2(or any other Su(z)12 homologue) with the other Pc-G proteins has been found.

Here, we show that the plant E(z) و Su(z)12 homologues interact both genetically and physically through their protein products. We localise the interactions to motifs that are conserved between the plant and animal proteins. We show that the third Arabidopsis E(z) homologue functions largely redundantly with CLF، لهذا السبب CLF has a more general role in control of plant development than was apparent from its single mutant phenotype. Characterisation of the misexpression phenotypes for the three E(z) homologues indicates that they have diverged not only in expression, but also at the protein level. We suggest that in plants an evolutionarily ancient complex (the PRC2) has been conserved, but gene duplication and divergence has given rise to several complexes with partially discrete functions.


Acknowledgements

This work was supported by grants from National Basic Research Program (2013CBA01402), Ministry of Science and Technology of China and the National Natural Science Foundation of China (30921003).

Filename وصف
tpj13025-sup-0001-FigS1.pdfapplication/PDF, 93.8 KB الشكل S1. The average grain length, width and 1000-grain weight of the wild type, dsg1 متحولة و DSG1-com.
tpj13025-sup-0002-FigS2.pdfapplication/PDF, 117.8 KB الشكل S2. Sequence alignment between OsMAPK6 and AtMAPK6.
tpj13025-sup-0003-FigS3.pdfapplication/PDF, 85.7 KB الشكل S3. Sequence alignment between OsMAPK6 and its homologs.
tpj13025-sup-0004-TableS1.pdfapplication/PDF, 148.4 KB الجدول S1. Quantitative measurements of the cell lengths and numbers in the third internodes, anthers and the spikelet hulls of the wild type and dsg1.
tpj13025-sup-0005-TableS2.pdfapplication/PDF, 157.8 KB الجدول S2. Primers used in this study.
tpj13025-sup-0006-Legend.docWord document, 31 KB

يرجى ملاحظة ما يلي: الناشر غير مسؤول عن محتوى أو وظيفة أي معلومات داعمة مقدمة من المؤلفين. يجب توجيه أي استفسارات (بخلاف المحتوى المفقود) إلى المؤلف المقابل للمقالة.